NPM1 MutaQuantTM Kit e Standard PROFILING LEUKEMIA Rilevazione quantitativa, sensibile, accurata e altamente riproducibile delle mutazioni NPM1 in DNA genomico e RNA isolato da sangue periferico. NPM1 e Leucemia Mieloide Acuta La Leucemia Mieloide Acuta (AML) è una malattia clinicamente eterogenea da un punto di vista citogenetico e molecolare. Differenti anormalità cariotipiche definiscono diversi sottogruppi prognostici. Quasi la metà dei casi AML presentano un cariotipo normale (AML-NK) costituendo così il più grande raggruppamento citogenetico di AML. Il gene per la nucleofosmina (NPM1) codifica per una proteina nucleocitoplasmatica multifunzionale (NPM), che migra tra nucleo e citoplasma con prevalente localizzazione nucleolare1. Il gene NPM1 è traslocato o mutato in vari linfomi e leucemie. Studi recenti 2,3 hanno dimostrato che circa il 60% dei pazienti AML con cariotipo normale hanno una mutazione all’interno dell’esone 12 del gene NPM1, questo dato rende la mutazione NPM1 la più specifica e frequente lesione genetica descritta nelle AML adulte de novo (circa un terzo). Circa 40 varianti molecolari delle mutazioni NPM1 sono state identificate ad oggi. Indipendentemente dal loro tipo, esse generano comuni alterazioni nella porzione C-terminale della proteina NPM. Le mutazioni creano un nuovo motivo (NES) di esporto nucleare e distruggono residui critici di triptofano a livello del dominio di legame nucleolare, il risultato è l’accumulo della proteina NPM nel citoplasma (NPMc+). La maggior parte delle mutazioni NPM1 sono caratterizzate dall’inserzione di quattro paia di basi. La mutazione più comune (mutazione A), una duplicazione del tetranucleotide TCTG, è presente nel 70-80% dei casi di AML NPMc+ adulta. Le mutazioni B e D sono state osservate circa nel 10% e nel 5% dei casi rispettivamente. Inoltre numerosi studi hanno dimostrato che i pazienti AML-NK con mutazioni NPM1, ma senza mutazioni concomitanti FLT3-ITD, rappresentano un sottogruppo indipendente con prognosi favorevole. Studi retrospettivi hanno dimostrato che le mutazioni NPM1 potrebbero essere considerate marcatori molecolari prognostici per il monitoraggio della malattia minima residua in AMLNK e che la quantificazione delle copie mutate di NPM1 potrebbe costituire un fattore predittivo di una eventuale ricaduta precoce 6,7. I risultati preliminari di trial clinici ad ampia indagine concordano con queste indicazioni 8. Tecnologia Calibrata e Normalizzata La tecnologia MutaQuant utilizza l’amplificazione in PCR da DNA genomico (gDNA) e da cDNA con analisi quantitativa delle mutazioni NPM1 A, B, D e del gene di controllo ABL. Un piccolo frammento che identifica il sito di mutazione viene amplificato con uno strumento di real-time PCR, mediante primer e probe ottimizzati. Il saggio NPM1 MutaQuant utilizza una tecnologia validata basata su plasmidi calibratori come curve standard, questa tecnologia permette la quantificazione precisa e riproducibile della mutazione. Questo saggio risulta significativamente migliore rispetto agli altri metodi per sensibilità, facilità d’uso e risparmio di tempo. Prodotti Associati MutaQuantTM standard sono disponibili per la rilevazione specifica di polimorfismi da campioni sia di RNA (cDNA) sia di DNA genomico. Al fine di offrire una soluzione che copre le mutazioni più frequenti di NPM1, Ipsogen ha sviluppato MutaQuant Gene Standards comprensivi di cinque provette per la mutazione A, per la mutazione B e D di NPM1; tali provette contengono diluizioni del gene mutato da utilizzare come calibratori della RQ-PCR. RUO Questi prodotti sono solamente per ricerca, non per uso diagnostico. Primer e probe per l’amplificazione del trascritto NPM1 mutazione A Primer e probe per l’amplificazione del trascritto NPM1 mutazione B Primer e probe per l’amplificazione del trascritto NPM1 mutazione D Primer e probe per l’amplificazione del trascritto ABL Perché scegliere NPM1 MutaQuant Kit? • Rilevazione sensibile e altamente specifica della mutazione A del gene NPM1 • Risultati espressi come Normalized Copy Number (NCN) NCNNPM1-A= CNNPM1-A / CNABL X100 • Protocollo standardizzato • Compatibilità su multi-piattaforma • Soluzioni pre-diluite pronte all’uso • Tempo di lavoro ottimizzato per il massimo delle prestazioni del laboratorio • Ridotti rischi di contaminazione • Attrezzature & QMS conformi a ISO 13485:2003 Ciascun MutaQuant Kit contiene: • 1 provetta con la miscela di primer e probe specifici per l’allele mutato NPM1 • 1 provetta con la miscela di primer e probe specifici per la rilevazione del gene di controllo ABL • 1 set di standard per l’allele mutato NPM1 (5 diluizioni da 101 a 106 copie/5 µl) • 1 set di standard per il gene di controllo ABL (3 diluizioni da 103 a 105 copie/5 µl) Informazioni per gli ordini: Descrizione Numero di campioni in duplicato Numero d’ordine 24 - 30* 504MQPP04 24 - 30* 504MQPP05 NPM1 mut A MutaQuant™ Kit NPM1 mut B&D MutaQuant™ Kit Bibliografia for each mutation B or D * Il numero di campioni varia in funzione dello strumento utilizzato ** Sistema di estrazione, retrotrascrizione e Taq polimerasi non sono inclusi nel kit 1. Falini B et al. N Engl J Med. (2005) 352(3): 254-266. 2. Falini B et al. Review - Blood (2007) 109(3): 874-885. 3. Falini B et al. Review - Haematologica (2007) 92(04): 519-532. 4. Mrozek et al. Blood (2007) 109(2): 431-448. 5. Hollink IH et al. Leukemia (2009) 23(2): 262-270 6. Chou WC et al. Leukemia (2007) 21(5): 998-1004. 7. Gorello P et al. Leukemia (2006) 20(6): 1103-1108. 8. Schnittger S et al.Haematologica (2007) 12th Congress of the European Hematology Association, Vienna, June 7-10, 2007. Abstract Book. Prodotti associati: Numero d’ordine NPM1 mut A cDNA MutaQuant Standard* Numero di provette Numero di reazioni 504MQRS01 5 8 NPM1 mut B e D cDNA MutaQuantTM Standards* 504MQRS02 5+5 8+8 NPM1 mut A gDNA MutaQuantTM Standard* 504MQRS01G 5 8 504MQRS02G 5+5 8+8 TM NPM1 mut B e D gDNA MutaQuant TM Standards* * Ciascun set di MutaQuantTM Standard è composto da 5 diluizioni plasmidiche da 101 a 106 copie/5μl Ipsogen MutaQuant è un marchio registrato Ipsogen. I nostri prodotti e le nostre tecnologie sono coperti da brevetti. Per maggiori informazioni visitare la pagina web: www.ipsogen.com/leukemia-products/healthcare-professionales/product-portfolio/ IPSOGEN SA, MARSEILLE, FRANCE Tel: +33 (0)4 91 29 30 90 -Fax:+33 (0)4 91 29 30 99 - e-mail: [email protected] Prodotti distribuiti in esclusiva da Instrumentation Laboratory SpA - Viale Monza 338 - 20128 Milano, Italy - Informazioni: Tel. 02/2522344-264 - e-mail: [email protected] - Ordini: Tel. 02/2522804 - Fax 02/2522809 www.il-italia.it p/n 98091-85 Rev. 3 - 08/10 - © Copyright 2009 Ipsogen Descrizione