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Nuove prospettive terapeutiche per la malattia celiaca Torino 10 Marzo 2007 Terapia attuale Dieta senza glutine: • • • • • Da seguirsi per tutta la vita Sicura ed efficace Normalizzazione della mucosa intestinale Bassa compliance Implicazioni sociali (mense, viaggi, etc, etc) CD mucosa atrofica CD mucosa trattata NO glutine glutine Torino 10 Marzo 2007 Terapia futura Immunomodulazione: ¾ Deve sopprimere specificamente la reazione infiammatoria al glutine ¾ Deve essere priva di rischi ¾ Gianfrani et al. Immunotherapy of coeliac disease: where do we stand? In Perspective in Coeliac Disease. Catassi C. (eds), 2003 ¾ Gianfrani et al. Possible drug targets for coeliac disease. EOTT 2006 Torino 10 Marzo 2007 Perché immunomodulazione specifica? Patogeni / / / // batteri protozoi virus IMMUNITÀ ATTIVA Risposta Immune attiva Non-patogeni proteine alimentari batteri probiotici TOLLERANZA Tolleranza immunitaria Torino 10 Marzo 2007 Digestione degli alimenti Digestione meccanica Proteine Digestione intestinale: •pepsina, •tripsina, •endopeptidasi Lunghi peptidi Corti peptidi e aminoacidi Torino 10 Marzo 2007 Patogenesi della lesione celiaca Lume intestinale Glutine Linfocita T CD4 Epitelio a spazzola TG2 T γ/δ CD4 CD8 TCRαβ TG2 Peptide deamidato T CD4 APC T T CD4 B cell T CD4 HLA-DQ2/DQ8 T CD8 APC APC Lamina propria (LPLs) • Interferone-γ • Proliferazione Torino 10 Marzo 2007 Risposta Immune attiva Tolleranza immunitaria Interleuchina (IL)-10 e la risposta immune intestinale Controlla la risposta immune alla flora non patogena Induce l’anergia cellulare Regola la proliferazione dei linfociti e produzione di interferone-γ Topi privi di IL-10 sviluppano l’enterocolite cronica Torino 10 Marzo 2007 La cultura d’organo della mucosa celiaca in remissione come strumento per lo studio della immunomodulazione da IL-10 Piccoli espianti di mucosa digiunale Gliadina IL-10 24hs at 37°C Immunoistochimica Morfologia dei villi/cripte Generazione di linee linfocitarie Torino 10 Marzo 2007 Il trattamento con IL-10 inibisce l’infiammazione indotta dal glutine nella mucosa intestinale • Notevole riduzione di: – Dell’infiltrato dei linfociti CD3+ nell’epitelio e lamina propria – Dell’attivazione cellulare (CD25) – CD80 (B7-1) – ICAM-1 – Interferone-γ e IL-2 mRNA Salvati et al. Gut 2005 Torino 10 Marzo 2007 1500 medium 1250 gliadin gliadin+α-IL10R 1000 gliadin+α-TGFbeta 750 500 250 medium 1800 ctl-TCL IL-10-TCL T cell lines (n=4) 1600 gliadin 1400 6 0 IL-10-SFC/1x10 cells γ -IFN-SFC/1x106 cells IL-10 sopprime la reattività dei linfociti T al glutine nella mucosa celiaca 1200 1000 800 600 400 200 0 ctl-TCL IL-10-TCL T cell lines (n=4) Gianfrani C. et al J. Immunology 2006 Torino 10 Marzo 2007 L’IL-10 attiva meccanismi di regolazione “endogeni”? IL-10 gliadin Th1 Th1 APC IFN-γ IL-2 Th1 Tr IL-10 TGF−β Tr Nell’intestino celiaco sono presenti cellule regolatorie? Torino 10 Marzo 2007 Torino 10 Marzo 2007 Nell’intestino dei celiaci trattati la risposta infiammatoria al glutine è contrastata da meccanismi di regolazione IL-10 & TGF-β mediati 60 Treated CD-TCL Treated CD-TCL 1200 IFN−−γ (pg/ml) 3 3-H-TdR (cpmx10 ) 1400 50 40 30 20 10 1000 800 600 400 200 0 0 cells gliadin gliadin gliadin gliadin + + + aIL10R aTGFβ both cells cells + + aIL10R aTGFβ cells gliadin gliadin gliadin gliadin + + + aIL10R aTGFβ both cells + aIL10R cells + aTGFβ N=5, P<0.05 Torino 10 Marzo 2007 4 3.5 3 2.5 2 1.5 1 0.5 0 Untreated CD-TCL Untreated CD-TCL 6 γ -IFN - SFC/1x10 cells 3-H-TdR (cpmx10 3) Nell’intestino dei celiaci atrofici la risposta infiammatoria al glutine è contrastata da meccanismi di regolazione IL-10 & TGF-β mediati 4000 3000 2000 1000 0 medium gliadin medium Gliadin + αIL10R + αTGFβ gliadin Gliadin + αIL10R+αTGFβ N=5, P<0.05 Torino 10 Marzo 2007 Nell’intestino dei celiaci sono presenti cellule T regolatorie che bloccano la risposta infiammatoria al glutine Teff:Treg 1:1 Stimulation index 5 4 3 57% 2 1 0 Th.3 (Th0) Th.3 + Tr1.9 (Th0 +Tr1) Tr1.9 (Tr1) Inibizione del 57% della risposta proliferativa al glutine Torino 10 Marzo 2007 Lume intestinale glutine glutine Th1 Th1 APC CD25 IL-2 IFN- γ ? HLA-DR ICAM-1 B7.1 APC Th1 IFN-γ Tr Tr Th1 HLA-DR ICAM-1 B7.1 IL-10 Tr IL-10 Th1 Th1 IL-10 Th1 Th1 Th1 Tr Th1 Tr Tr infiammazione NO infiammazione Prospettive terapeutiche ¾ Espansione ed attivazione in vivo delle cellule regolatorie attraverso l’immissione di IL-10 esogena ¾ Vescicole lipoproteiche che rilasciano IL-10 nel sito di infiammazione Dose di IL-10 Via di somministrazione orale o rettale Sicurezza del farmaco/effetti collaterali Efficacia Dosaggio di glutine ingerito Pazienti non complianti e con autoimmunita’ associate? Torino 10 Marzo 2007 Applicazioni terapeutiche ¾ Deviere et al Gastroenterology 2001: ¾ Riduzione dei casi di pancreatite spontanea dopo indagine ERCP ¾ Assenza di effetti collaterale ¾ Schreiber et al Gastroenterology 1995: ¾ Pazienti con colite ulcerativa refrattaria ¾ Riduzione delle citochine pro-infiammatorie ¾ Migloramento del tessuto all’esame endoscopico ¾ Mulder et al 2001 Celiachia refrattaria: Somministrazione sottocutanea di IL-10 (8 ug/Kg) per 3 volte/settimana per 3 mesi ¾ 5/8 nessun miglioramento istologico ¾ 1/8 esacerbazione dell’istologia ¾ 2/8 miglioramente clinico e istologico Torino 10 Marzo 2007 Contributi Giuseppe Mazzarella Alessandra Camarca Istituto Scienze dell’Alimentazione CNR, Avellino Maria Grazia Roncarolo Tiget, Milano Virginia Salvati Delia Zanzi Salvatore Auricchio Riccardo Troncone Dip. Pediatria & ELFID Univ. Federico II, Napoli Nicola Giardullo Gaetano Iaquinto U.O. Gastroenterologia, Os Moscati, Avellino Torino 10 Marzo 2007 Strategie terapeutiche alternative alla dieta senza glutine Diminuzione del carico antigenico ¾ Selezione/produzioni di varietà prive delle sequenze biologicamente rilevanti ¾ Terapia enzimatica supplementare o digestione di cereali tossici mezzo di proteasi batteriche Interferenza con il passaggio intestinale della gliadina Interferenza con la presentazione della gliadina a cellule T ¾ Inibizione della transglutaminasi ¾ Blocco molecole HLA Interferenza con attivazione cellule T Anticitochine infiammatorie ¾ Strategie che interferiscono con l’immunità innata glutine-indotta (anti-IL15) ¾ Anti IFNgamma Citochine immunoregolatrici e induzione di cellule T regolatorie gliadina-specifiche Interferenza con i meccanismi di homing Management of CD: from the Bench to In Vivo Therapeutic Intervention • Drugs That Target the Enzymatic Breakdown of Gluten • Drugs That Interfere with the Intestinal Transport of Gluten – An inhibitor of zonulin, AT-1001, is currently being tested in clinical trials for the treatment of CD patients on a gluten-free diet (Paterson B. Alba Therapeutics. US patent 6548925 and XII International – bacterial prolyl endopeptidases (PEPs) can efficiently degrade gluten peptides by cleaving proline bonds (Mitea C. XII International Celiac Disease Symposium, New York, November 2006 ) Celiac Disease Symposium, New York, November 2006) • Peptide Therapy – a vaccine with a peptide that combines two immunodominant α- and ϖ- gliadin 17-mer peptides (combo-epitope) (Anderson R. granted patent WO/2001/025793 and XII International Celiac Disease Symposium, New York, November 2006) Reviewed in Gianfrani et al. MRMC submitted
