Dako Omnis

FLEX
Polyclonal Rabbit
Anti-Human
Thyroglobulin
Ready-to-Use
(Dako Omnis)
Codice GA509
Uso previsto
Per uso diagnostico in vitro.
FLEX Polyclonal Rabbit Anti-Human Thyroglobulin, Ready-to-Use (Dako Omnis) è destinato all'utilizzo in ambito
immunoistochimico in combinazione con lo strumento Dako Omnis. Questo anticorpo è utile per l'identificazione della
tireoglobulina nel tessuto tiroideo ed è un valido strumento per l'identificazione dei carcinomi della tiroide ben
differenziati (1). L'interpretazione clinica di qualsiasi colorazione o della sua assenza deve essere completata da
studi morfologici usando controlli corretti e deve essere valutata nel contesto dell'anamnesi clinica del paziente e di
altri esami diagnostici eseguiti da un patologo qualificato.
Cenni
introduttivi
La tireoglobulina (Tg) è una glicoproteina, la cui forma predominante è un omodimero con peso molecolare 660 kDa.
Precursore degli ormoni tiroidei, la tireoglobulina è sintetizzata dai tireociti ed è trasportata sulla superficie apicale
dove viene secreta nel lume dei follicoli tiroidei e conservata come componente principale del colloide (> 95%). Una
minima parte di tireoglobulina è presente in forma monomerica o tetramerica con peso molecolare 330 kDa. La
riduzione o degradazione delle molecole di tireoglobulina 660 kDa o 330 kDa può portare alla formazione di
polipeptidi più piccoli, alcuni dei quali sono presenti in tracce nel colloide. In corrispondenza dell'interfaccia cellulacolloide hanno luogo modificazioni post-transizionali della Tg, che sono caratterizzate dall'accoppiamento di residui
di tirosile con ioduro. Ciò porta alla formazione di residui di ormone tiroideo all'interno della molecola di
tireoglobulina. Il rilascio dell'ormone richiede in genere il distacco della tireoglobulina dal colloide ad opera dei
tireociti, oltre alla segmentazione proteolitica per via lisosomiale (2).
Consultare le General Instructions for Immunohistochemical Staining (Istruzioni generali per la colorazione
immunoistochimica) (www.dako.com/IHC-instructions) di Dako oppure le istruzioni relative alle procedure IHC del
sistema di rilevazione.
Reagente fornito
Anticorpo policlonale di coniglio pronto per l'uso fornito in forma liquida in un tampone contenente la proteina
stabilizzante e 0,015 mol/L sodio azide.
Immunogeno
Tireoglobulina umana isolata da ghiandole tiroidee umane.
Specificità
L'anticorpo marca la tireoglobulina umana; ogni traccia di anticorpi contaminanti è stata rimossa mediante
adsorbimento su fase solida con proteine di plasma umano.
Nei test di immunoelettroforesi crociata, condotti utilizzando 12,5 µL di anticorpo concentrato per ogni cm2 di area gel
contro 2 µL di estratto di ghiandola tiroidea umana, compare solo un precipitato corrispondente alla tireoglobulina.
Con 2 µL di plasma umano non compare nessun precipitato. Colorazione: Coomassie Brilliant Blue.
Nelle colture cellulari di tiroide umana, l'anticorpo marca la Tg a livello intracellulare (3).
Precauzioni
1. Per uso professionale.
2. Questo prodotto contiene sodio azide (NaN3), una sostanza chimica fortemente tossica in forma pura. Sebbene
alle concentrazioni del prodotto non sia classificata come pericolosa, la sodio azide può reagire con il rame e il
piombo delle tubature formando azidi metalliche fortemente esplosive. Durante lo smaltimento del prodotto, far
scorrere abbondante acqua nelle tubature per impedire la formazione di azidi metalliche.
3. Adottare le normali procedure previste per il trattamento dei prodotti di origine biologica.
4. Indossare dispositivi di protezione individuale appropriati per evitare il contatto con gli occhi e la cute.
5. La soluzione non utilizzata deve essere smaltita in conformità alle normative locali e nazionali vigenti in materia.
Conservazione
(123964-001)
Dako Denmark A/S
Conservare a 2-8 °C con il coperchio ben chiuso. No n utilizzare dopo la data di scadenza stampata sul flacone. La
stabilità sullo strumento è di 80 ore. Il software Dako Omnis tiene traccia del tempo di stabilità sullo strumento
rimanente. Nel caso in cui i reagenti vengano conservati diversamente da quanto specificato, le condizioni dovranno
essere verificate dall'utente. Non è possibile indicare segni evidenti di instabilità del prodotto. Pertanto, è necessario
analizzare gli opportuni controlli positivi e negativi contemporaneamente ai campioni dei pazienti. Se si osserva una
colorazione inattesa non imputabile a variazioni delle procedure di laboratorio e si sospetta un problema associato
all'anticorpo, contattare l'Assistenza tecnica Dako.
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Guida rapida
Fase
Fissazione/inclusio
ne
Commenti
Fissazione in formalina, inclusione in paraffina
Deparaffinazione sullo strumento
Pretrattamento
EnVision™ FLEX, Low pH (Codice GV805)
HIER 30 min
Anticorpo
Prodotto pronto all'uso
Incubazione 10 min
Controllo negativo
FLEX Negative Control, Rabbit (codice GA600)
Incubazione 10 min
Visualizzazione
EnVision™ FLEX (codice GV800)
Blocco: 3 min; polimero: 20 min;
cromogeno: 5 min
Colorazione di
contrasto
Hematoxylin (codice GC808)
Incubazione 3 min
Tessuto di controllo
Tiroide
Colorazione citoplasmatica
Vetrini
FLEX IHC Microscope Slides (codice K8020)
Consigliati per applicazioni in cui è
richiesta una maggiore aderenza delle
sezioni di tessuto ai vetrini.
Montaggio
È richiesto il montaggio permanente e non
acquoso
Una volta completata la procedura di
colorazione, le sezioni devono essere
disidratate, diafanizzate e montate
utilizzando un mezzo di montaggio
permanente.
Strumentazione
Dako Omnis
I reagenti sono forniti in flaconi
specifici per lo strumento
*Si raccomanda all'utente di leggere sempre il foglietto informativo contenuto nella confezione per istruzioni dettagliate sulla
procedura di colorazione e la manipolazione del prodotto.
Preparazione dei
campioni
Sezioni in paraffina: l'anticorpo può essere utilizzato per marcare sezioni di tessuto fissate in formalina, incluse in
paraffina. I campioni tissutali devono essere tagliati in sezioni di 4 µm.
Pretrattamento: è necessario il pretrattamento di sezioni di tessuto incluso in paraffina e fissato in formalina con la
tecnica dello smascheramento antigenico termoindotto (HIER). È consigliato il pretrattamento dei tessuti con HIER
utilizzando la soluzione diluita EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, Low pH (50x) (Dako Omnis), codice
GV805. Le operazioni di deparaffinazione, reidratazione e recupero antigenico vengono eseguite sullo strumento
Dako Omnis. Fare riferimento a "Dako Omnis Manuale utente di base".
Evitare che le sezioni di tessuto si secchino durante il pretrattamento o durante la successiva procedura di
colorazione immunoistochimica. Per una maggiore aderenza delle sezioni di tessuto ai vetrini, si consiglia di
utilizzare i vetrini FLEX IHC Microscope Slides (codice K8020).
Procedura di
colorazione
Programma: il ciclo di colorazione e i tempi di incubazione sono preimpostati nel software Dako Omnis. Per istruzioni
dettagliate sul caricamento di vetrini e reagenti, consultare "Dako Omnis Manuale utente di base". Se i protocolli non
sono disponibili nel sistema Dako Omnis, rivolgersi all'Assistenza tecnica Dako. Tutte le fasi di incubazione vengono
eseguite sullo strumento Dako Omnis a 32 °C.
Visualizzazione: il sistema di visualizzazione consigliato è EnVision FLEX High pH (Dako Omnis), codice GV800.
La visualizzazione viene eseguita sullo strumento Dako Omnis.
Nota: utilizzare EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low pH (50x) (Dako Omnis), codice GV805, per HIER.
Colorazione di contrasto: per la colorazione di contrasto, si consiglia di utilizzare Hematoxylin (Dako Omnis), codice
GC808. La colorazione di contrasto viene eseguita sullo strumento Dako Omnis.
Montaggio: una volta completata la procedura di colorazione sullo strumento Dako Omnis, le sezioni devono essere
disidratate, diafanizzate e montate utilizzando un mezzo di montaggio permanente.
Controlli: i controlli positivi e negativi devono essere analizzati contemporaneamente utilizzando lo stesso protocollo
dei campioni dei pazienti. Il tessuto di controllo positivo deve includere tessuto tiroideo e le cellule/strutture devono
mostrare i pattern di reazione descritti per il tessuto in questione nella sezione "Caratteristiche di prestazione". Il
controllo negativo consigliato è FLEX Universal Negative Control, Rabbit (Dako Omnis), codice GA600.
Interpretazione dei
risultati della
colorazione
Il pattern di colorazione cellulare è di tipo citoplasmatico nel lume dei follicoli tiroidei e nella superficie apicale dei
tireociti.
Caratteristiche di
prestazione
Tessuti normali: l'anticorpo marca la tireoglobulina nei follicoli tiroidei e sulla superficie apicale dei tireociti. La
tireoglobulina si trova nelle cellule follicolari della tiroide e, con un'estensione inferiore, nel tessuto interstiziale e nello
stroma tiroideo a causa di una normale dispersione. Le cellule epiteliali follicolari colonnari e cuboidali nella tiroide
devono mostrare una reazione di colorazione citoplasmatica da debole a moderata, mentre i colloidi extracellulari
devono mostrare una reazione da moderata a forte.
Tessuti anomali: nelle ghiandole iperplastiche, la tireoglobulina è stata rilevata nei follicoli e nelle cellule ghiandolari
dei follicoli più piccoli. Questo anticorpo colora i carcinomi papillari, follicolari e midollari con produzione multiormonale (1, 4-5). La tireoglobulina è stata rilevata anche nei carcinomi follicolari a cellule chiare, mentre, per altre
neoplasie a cellule chiare, non è stata rilevata alcuna marcatura (1, 6). Sono reattive anche alcune cellule del
carcinoma a cellule giganti e anaplastico fusiforme. I sarcomi o i carcinomi metastatici sono negativi (1).
(123964-001)
Dako Denmark A/S
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Bibliografia
1. Albores-Saavedra J, Nadji M, Civantos F, Morales AR. Thyroglobulin in carcinoma of the thyroid: An
immunohistochemical study. Hum Pathol 1983;14:62-6.
2. Marinò M, McLuskey RT. Role of thyroglobulin endocytic pathways in the control of thyroid hormone release. Am
J Physiol Cell Physiol 2000;279:1295-1306.
3. Kayser L, Olsen BE, Høyer PE. Quantitative cytochemical demonstration of intracellular thyroglobulin in cultured
human thyrocytes. Effects of fixatives, TSH and interleukin-1α. Histochem J 1991;23:235-40.
4. LiVolsi V, et al. Anaplastic thyroid tumors. Amer J Clin Pathol 1987; 87:434
5. Holm R, et al. Medullary thyroid carcinoma with thyroglobulin immunoreactivity. A special entity? Lab Invest
1987; 57:258
6. Civantos F, et al. Clear cell variant of thyroid carcinoma. Amer J Surg Pathol 1984; 8:187
Spiegazione dei simboli
Numero di catalogo
Limiti di temperatura
Dispositivo medico diagnostico
in vitro
Codice lotto
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l'uso
Data di scadenza
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Produttore
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