Dako
EnVision™+ Dual Link System-HRP
Codice K4063
15 mL
Codice K4061 10x11 mL
Prodotto pronto all'uso
Uso previsto
Per uso diagnostico In Vitro.
EnVision+ Dual Link System-HRP è stato diluito in modo ottimale per essere utilizzato con gli anticorpi primari derivati da topo e coniglio
nelle procedure immunoistochimiche basate sul metodo del polimero marcato. Di seguito viene fornito un elenco dei prodotti compatibili
consigliati, disponibili presso Dako.
Fare riferimento alle General Instructions for Immunohistochemical Staining (Istruzioni generali per la colorazione immunoistochimica) di
Dako o alle istruzioni sul sistema di rivelazione per le procedure IHC per: 1) Principio della procedura, 2) Materiali necessari ma non forniti,
3) Conservazione, 4) Preparazione dei campioni, 5) Procedura per la colorazione, 6) Controllo della qualità, 7) Risoluzione dei problemi,
8) Interpretazione della colorazione, 9) Limiti generali.
Cenni introduttivi
L'EnVision+ Dual Link System-HRP è una tecnica di colorazione IHC a due fasi, basata su un polimero marcato con HRP (perossidasi di
rafano) e coniugato con anticorpi secondari. Il polimero marcato non contiene né avidina né biotina, quindi la colorazione aspecifica
derivante dall'attività endogena avidina-biotina in fegato, reni, tessuti linfoidi e sezioni criostatate è eliminata o ridotta in modo significativo.
Reagente fornito
Questo reagente contiene immunoglobuline (Ig) di capra anti-topo e anti-coniglio, coniugate con polimero marcato da perossidasi in un
tampone Tris-HCl con proteina stabilizzante e un agente antibatterico.
Precauzioni
1. Per uso professionale.
2. Evitare la contaminazione batterica dei reagenti, altrimenti potrebbe verificarsi un incremento della colorazione aspecifica.
3. Adottare le normali procedure previste per il trattamento dei prodotti di origine biologica.
4. Indossare indumenti di protezione personale adeguati, per evitare il contatto con gli occhi e la pelle.
5. Smaltire la soluzione inutilizzata nel rispetto delle disposizioni locali, regionali e nazionali in materia.
6. Su richiesta è disponibile una scheda di sicurezza per utenti professionisti.
Conservazione
Conservare a 2–8°C.
Non sono stati osservati segni evidenti che suggeriscano l'instabilità di questi prodotti. Pertanto, è opportuno analizzare un controllo positivo
e un controllo negativo contemporaneamente ai campioni dei pazienti. Qualora si ottenga una colorazione imprevista, che non sia
giustificata da un cambiamento delle procedure di laboratorio ma sia dovuta ad un probabile problema del kit per analisi, contattare
l'Assistenza Tecnica Dako.
Preparazione dei campioni
Prima della colorazione IHC, i tessuti devono essere fissati e trattati. La fissazione impedisce l'autolisi e la putrefazione dei tessuti asportati,
preserva l'antigenicità, migliora l'indice di rifrazione dei costituenti del tessuto e aumenta la resistenza degli elementi cellulari al trattamento
del tessuto. Il tessuto viene sottoposto a disidratazione, diafanizzazione degli agenti disidratanti, infiltrazione di mezzi inclusivi, inclusione e
infine sezionamento. I fissatori più comuni per i preparati di tessuto destinati alle procedure IHC sono descritti nelle General Instructions for
Immunohistochemical Staining (Istruzioni generali per la colorazione immunoistochimica). Queste informazioni sono fornite esclusivamente
come linee guida. Le procedure ottimali dovranno essere definite e verificate dall’utente.
Caratteristiche prestazionali
Gli anticorpi contenuti in questo prodotto sono stati assorbiti in fase solita al fine di rimuovere gli anticorpi con reazione crociata nelle
immunoglobuline umane. Le Ig di capra anti-topo e anti-coniglio sono state purificate per affinità su una colonna con Ig di topo e Ig di
coniglio rispettivamente. L'Ig di capra anti-topo presente sul polimero reagisce con tutte le sottoclassi IgG di topo e con le IgM di topo. La
reattività crociata con altre immunoglobuline di topo può verificarsi tramite catene leggere. L'Ig di capra anti-coniglio presente sul polimero
reagisce con le immunoglobuline di coniglio. Come determinato dal saggio ELISA, questo prodotto reagisce in modo minimo con l'Ig umana;
tuttavia, la reattività crociata con Ig di altre specie potrebbe essere presente.
La perossidasi presente sul polimero è stata preparata a partire da perossidasi di rafano con attività altamente specifica. L'enzima non
coniugato è stato rimosso tramite cromatografia di gel-filtrazione.
Applicazione
Questo reagente è idoneo per le procedure immunoistochimiche a due fasi. EnVision+ Dual Link System-HRP è fornito pronto per l'uso.
L'ulteriore diluizione di questo reagente o una variazione del tempo o della temperatura di incubazione potrebbe generare risultati erronei.
EnVision+ Dual Link è previsto per essere utilizzato con gli anticorpi primari Dako pronti per l'uso o con i concentrati ottimizzati dall'utente.
(112902-002)
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Procedura
Procedura automatizzata
Programmare il sistema automatizzato come segue:
FASE 1: selezionare il Protocol Template Auto Program (programma automatico per il modello di protocollo).
FASE 2: sistemare i reagenti sul rack reagenti Dako Autostainer e riempire le damigiane con il tampone di lavaggio e l'acqua deionizzata.
FASE 3: caricare i vetrini sul sistema Dako Autostainer.
FASE 4: avviare il ciclo.
FASE 5: rimuovere i vetrini dal sistema Dako Autostainer.
Procedura manuale
È necessario eseguire tutte le fasi a temperatura ambiente. Tutti i reagenti devono essere equilibrati a temperatura ambiente.
(Per ogni fase della procedura, fare riferimento ai prodotti Dako compatibili sotto descritti.)
FASE 1: BLOCCO DEGLI ENZIMI ENDOGENI
Picchiettare per eliminare il tampone in eccesso. Applicare una quantità di Dual Endogenous Enzyme Block sufficiente a coprire il
campione. Incubare per 5–10 minuti, in base alla concentrazione dell'enzima endogeno nel tessuto testato.
Sciacquare delicatamente con acqua distillata o soluzione tampone da una spruzzetta (fare attenzione a non indirizzare il flusso
direttamente sul tessuto) e collocare in un bagno tampone fresco.
FASE 2: ANTICORPO PRIMARIO O REAGENTE DI CONTROLLO NEGATIVO
Picchiettare per eliminare il tampone in eccesso come prima. Applicare una quantità di anticorpo primario diluito in modo ottimale
oppure di reagente di controllo negativo sufficiente per ricoprire il campione. Incubare per 30 (±1) minuti.
Sciacquare delicatamente con soluzione tampone da una spruzzetta (fare attenzione a non indirizzare il flusso direttamente sul
tessuto) e collocare in un bagno tampone fresco.
FASE 3: POLIMERO MARCATO, HRP
Picchiettare per eliminare il tampone in eccesso come prima. Applicare una quantità di polimero marcato sufficiente a coprire il
campione. Incubare per 30 (±1) minuti.
Sciacquare i vetrini come nella fase 2 e posizionarli in un bagno tampone per 5 (±1) minuti.
FASE 4: SUBSTRATO-CROMOGENO
Asciugare i vetrini come descritto precedentemente. Applicare una quantità di soluzione substrato-cromogeno sufficiente per
ricoprire il campione. Incubare per 5–30 minuti con AEC+ o per 5–10 minuti con DAB+.
Sciacquare delicatamente con acqua distillata da una spruzzetta (fare attenzione a non dirigere il flusso direttamente sul tessuto).
Raccogliere il substrato-cromogeno di scarto in un contenitore per materiali pericolosi e smaltire in modo appropriato.
FASE 5: COLORAZIONE DI CONTRASTO CON EMATOSSILINA (facoltativa)
Immergere i vetrini in un bagno di ematossilina acquosa. La durata dell'incubazione varia a seconda della potenza
dell'ematossilina usata.
Sciacquare i vetrini in un bagno di acqua distillata o deionizzata per 2–5 minuti.
Campioni
Sezioni di tessuto fissate in formalina e incluse in paraffina, nonché sezioni di tessuto congelate e strisci cellulari.
Prodotti Dako compatibili consigliati
Codice Dako
Nome del prodotto
Anticorpi primari pronti all'uso Dako
Tipo di prodotto
Anticorpi primari pronti all'uso per:
EnVision+ Dual Link
EnVision+ e LSAB+
S2003
Dual Endogenous Enzyme Block
Blocco della perossidasi endogena
S3006
Wash Buffer 10x
per utilizzo IHC automatizzato e
manuale
Tampone di lavaggio
S3001
TBS (Tris-Buffered Saline)
Tampone di lavaggio
S3024
PBS (Phosphate-Buffered Saline)
Tampone di lavaggio
K3461/K3469
K3467/K3468
AEC+ Ready-to-use
Liquid DAB+
Sistema substrato
Edizione 05/07
(112902-002)
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