fluorochrome conjugated single reagent

Monoclonal Mouse Anti-Human CD103, Mucosa Lymphocyte Antigen, Clone Ber-ACT8
Codice N. F 7138 FITC-Conjugated
Codice N. R 7188 RPE-Conjugated
Uso previsto
Diagnostica in vitro
F 7138 e R 7188 sono destinati all’uso nella citometria a flusso. CD103 si esprime sulle cellule T delle mucose,
sulle cellule T attivate da CD8+ e sulle cellule della leucemia a cellule capellute. L'antigene CD103 si esprime
in numerosi tumori maligni, come nei linfomi a cellule T associati ad enteropatia e nella leucemia a cellule
capellute. L'anticorpo è particolarmente indicato per l'immunofenotipizzazione delle leucemie e dei linfomi (1,
2). L'interpretazione dei risultati deve essere effettuata da uno specialista qualificato, nel contesto
dell’anamnesi clinica del paziente e delle altre metodiche diagnostiche adottate.
Sinonimo dell'antigene
ITGAE, antigene linfocitario della mucosa umana 1 (HML-1), catena di integrina E (3).
Introduzione
CD103 è la subunità E dell’integrina eterodimerica E7 appartenente alla piccola sottofamiglia delle integrine
7. Gli anticorpi anti-CD103 immunoprecipitano una proteina antigenica composta da due catene con peso
molecolare di 105 kDa (7) e 175 kDa (E) prima della riduzione. Una volta ridotta, la catena di 175 kDa si
divide in due frammenti di rispettivamente 150 e 25 kDa (4).
Reagente fornito
I coniugati dell'anti-CD103, F 7138 e R 7188, sono stati prodotti da un anticorpo monoclonale murino purificato.
I coniugati vengono forniti in formulazione liquida in tampone contenente l'1% di albumina di siero bovino (BSA)
e 15 mmol/L di NaN3, a pH 7,2. Ciascuna fiala è sufficiente per 100 test (10 L di coniugato per un massimo di
106 linfociti stimolati da PHA isolati da sangue periferico umano).
Isotipo: IgG1, kappa. Concentrazione del coniugato in mg/L: Vedere l'etichetta sulla fiala.
N. codice
anticorpo.
Fluorocromo
N. codice controllo
negativo
F 7138
FITC (isomero di isocianato di fluorescina)
X 0927
R 7188
RPE (R-ficoeritrina)
X 0928
Immunogeno
Linea cellulare HTLV-1+ MAPS-16 (1).
Specificità
L'anti-CD103, Ber-ACT8, è stato incluso nel Fifth International Workshop and Conference on Leukocyte Cell
Differentiation Antigens e gli studi condotti da numerosi laboratori ne hanno confermato la reattività con
l'antigene CD103 (4). L'anticorpo reagisce con un epitopo situato sulla catena polipeptidica di 150 kDa e rileva
la stessa molecola bersaglio individuata dagli anticorpi monoclonali HML-1, LF61 e B-Ly7 (1). Nell'intestino,
l'anticorpo marca più del 90% dei linfociti intraepiteliali intestinali e circa il 40% dei linfociti della lamina propria
(3). Negli altri tessuti umani normali, la reattività dell'anticorpo risulta limitata ad un esiguo numero (dallo 0,5 al
5%)di cellule T a riposo CD8 positive del sangue periferico, dei linfonodi e delle tonsille, dove marca qualche
sporadica cellula linfoide presenti nelle zone T e nei mantelli follicolari. Nella polpa rossa della milza, l'anticorpo
colora l'8 - 10% delle cellule (1, 3).
Precauzioni
1. Per operatori specializzati.
2. Questo prodotto contiene sodio azide (NaN3), sostanza chimica altamente tossica allo stato puro. Alle
concentrazioni indicate, il prodotto non è classificato come pericoloso, ma la sodio azide potrebbe reagire con
le tubature in piombo e rame formando azidi metalliche altamente esplosive. Per lo smaltimento del prodotto è
consigliabile sciacquare abbondantemente per prevenire la formazione di azidi metalliche nelle tubature.
3. Come per ogni prodotto di derivazione biologica, utilizzare procedure di manipolazione adeguate.
Conservazione
Conservare a 2 – 8 °C. Non utilizzare dopo la data di scadenza stampata sulla fiala. Se i reagenti vengono
conservati con modalità diverse da quelle specificate, l'utente deve verificarne le condizioni. Il prodotto non
presenta segni di l’instabilità. Pertanto, i controlli positivi e negativi vanno eseguiti contemporaneamente ai
campioni del paziente. Rivolgersi al servizio tecnico qualora si osservi la comparsa di una colorazione
imprevista, non giustificata da variazioni nelle procedure di laboratorio, e si sospetti un problema dovuto
all'anticorpo.
Procedura di Colorazione
1.
Raccogliere il sangue venoso in una provetta contenente un anticoagulante.
2.
Isolare le cellule mononucleate mediante centrifugazione su un mezzo di separazione. Oppure, lisare le
emazie dopo il punto 6.
3.
Lavare due volte le cellule mononucleate con RPMI 1640 o con PBS (soluzione salina di tampone fosfato) , a
pH 7,2 - 7,4.
4.
Miscelare 100 L di sospensione cellulare con 10 L di anti-CD103 coniugato con fluorocromo.
5.
Utilizzare come controllo negativo un anticorpo monoclonale non reattivo del medesimo isotipo, coniugato
con lo stesso fluorocromo (vedere la tabella).
6.
Incubare al buio a 4 ºC per 30 minuti.
7.
Lavare due volte con PBS contenente il 2% di BSA. Risospendere le cellule in liquido idoneo per citometria a
flusso, ad es. 0,3 mL di paraformaldeide al’1% (fissativo) in 0,01 mol/L di PBS, a pH 7,4.
(104176-002)
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8.
Analizzare su un citometro a flusso.
Ad ogni esecuzione del test, è opportuno includere un idoneo campione di controllo positivo e negativo del
reagente e della preparazione. Si fa presente che i coniugati con fluorocromo sono fotosensibili, perciò devono
essere protetti dalla luce durante la colorazione e fino all’esecuzione dell'analisi.
Riferimenti bibliografici
1.
Kruschwitz M, Fritzsche G, Schwarting R, Micklem K, Mason DY, Falini B, et al. Ber-ACT8: New
monoclonal antibody to the mucosa lymphocyte antigen. J Clin Pathol 1991;44:636-45.
2.
Schwarting R, Dienemann D, Kruschwitz M, Fritsche G, Stein H. Specificities of monoclonal antibodies Bly7 and HML-1 are identical. Blood 1990;75:320-1.
3.
Tanaka T. CD Guide. CD103. In: Mason D, André P, Bensussan A, Buckley C, Civin C, Clark E, et al.,
editors. Leucocyte typing VII. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 7th International
Workshop and Conference; 2000 Jun 19-23; Harrogate, United Kingdom. New York: Oxford University
Press Inc.; 2002. p. 845-6.
4.
Cepek KL, Wong DA, Brenner MB, Springer TA. AS7/8.4. CD103 (E) cluster report. In: Schlossman SF,
Boumsell L, Gilks W, Harlan JM, Kishimoto T, Morimoto C, et al., editors. Leucocyte typing V. White cell
differentiation antigens. Proceedings of the 5th International Workshop and Conference; 1993 Nov 3-7;
Boston, USA. Oxford, New York, Tokyo: Oxford University Press; 1995. p. 1666-7.
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