Citofluorimetria
con anticorpi monoclonali
dotati di fluorocromi
Permette di riconoscere, selezionare, contare, separare cellule
dotate di particolari, specifici antigeni (proteine di membrana), mediante
uso di anticorpi complementari forniti di molecole che rendono
visibile il complesso cellula-anticorpo se illuminato con fonte
luminosa (laser) di particolare frequenza
Esempio di laser
blu/ 488 nm
rosso / 633 nm
near-UV /375 nm
Descrizione molto superficiale e approssimata della tecnica usata
Le cellule presentano sulla superficie esterna della membrana
particolari molecole (proteiche o glicoproteiche) specifiche per
ogni tipo cellulare, che possono permettere di distinguerle quando
si trovino assieme a cellule di altro tipo: antigeni specifici di membrana
Esistono anticorpi , molecole proteiche naturali prodotto dal sistema
immunitario, complementari per specifici antigeni cellulari:
tali anticorpi possono legarsi alle cellule che vengono riconosciute
come portatrici degli antigeni specifici .
Si possono ottenere in laboratorio grandi quantità di anticorpi di un
determinato tipo, anticorpi monoclonali, che possono essere forniti
di particolari sostanze di diverso colore ,fluorocromi, quando siano
trattate con particolari fonti lumininose (laser ) con diversa lunghezza
d’onda .
Anticorpo con fluorocromo rosso
Anticorpo con fluorocromo viola
Anticorpo con fluorocromo blu
Anticorpo con fluorocromo verde
Cellule con antigene, molecola proteica o
glicoproteica, su membrana cellulare,
riconoscibile da molecola di anticorpo specifica,
complementare ( fornita di sostanza colorata,
fluorocromi, di vario colore)
Trattando una popolazione cellulare formata da vari tipi di cellule con
anticorpi monoclonali forniti di fluorocromi si ottiene un insieme di cellule
riconoscibili per la colorazione indotta dall’anticorpo collegatosi:
uno strumento, citofluorimetro, permette rapidamente di contare e
separare i diversi tipi cellulari in funzione della colorazione assunta
Cellule tumorali e cellule sane
Cellule riconoscibili per il colore dell’anticorpo legato
Cellule normali
Cellule riconoscibili per il colore dell’anticorpo legato
Cellule riconoscibili per il colore dell’anticorpo legato
separate e disponibili per esami ulteriori
Cellule riconoscibili per il colore dell’anticorpo legato
separate e disponibili per esami ulteriori
Cellule tumorali colorate e sane incolori
Popolazione cellulare separata
Popolazione cellulare separata
Cellule separate e coltivate in laboratorio
La separazione delle singole cellule di un certo tipo
può avvenire inserendo ogni cellula in una gocciolina fluida
successivamente elettrizzabile: quando le goccioline fluiscono
in presenza di un campo elettrico possono essere separate
in gruppi distinti
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Popolazione mista
con due tipi cellulari
Inserimento di cellule
in singole goccioline
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Assegnazione di carica
elettrica alle goccioline
quando le goccioline fluiscono
in presenza di un campo elettrico possono essere separate
in gruppi distinti
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