MECCANISMI DI AZIONE TIPI DI CATALISI • CATALISI COVALENTE • CATALISI ACIDO-BASE • CATALISI DA IONI METALLICI Termodinamicamente favorita ma avverrebbe in 10-1000 anni Termodinamicamente favorita ma avverrebbe in 10-1000 anni In presenza dell’enzima la reazione avviene in pochi ms SPECIFICITA’ DELLA CHIMOTRIPSINA La forma della curva ci suggerisce che la reazione proceda in due fasi L’esistenza delle due fasi si può spiegare mediante la formazione veloce di un complesso covalente intermedio enzima-substrato Perché la Serina che è un debole nucleofilo??? Perché PROPRIO la Ser 195??? L’alta reattività della serina 195 attivo si spiega con la struttura del sito attivo della chimotripsina! His57 Asp102 TRIADE CATALITICA Adesso possiamo comprendere l’importanza del pH nel modulare l’attività enzimatica Velocità di catalisi in relazione al pH Velocità di Vmax in relazione al pH Ciò dipende dallo stato di ionizzazione dell’His57 della triade A pH bassi l’His57 è protonata e non può sottrarre un protone a Ser195 Questo meccanismo spiega l’attività catalitica della chimotripsina ma non la sua specificità!!