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Monoclonal Mouse Anti-Human CD14, Clone TÜK4
N. codice F 0844
N. codice R 0864
FITC-coniugato
RPE-coniugato
Uso previsto
Per uso diagnostica in vitro
F 0844 e R 0864 sono destinati all’uso nella citofluorimetria a flusso. L'anti-CD14 è importante per escludere i
monociti CD14+ nelle analisi dei subset T linfocitari (1, 2). Nella citofluorimetria a flusso, l'anti-CD14 è
considerato indispensabile per la valutazione iniziale della leucemia mieloide acuta, assieme a una serie di altri
anticorpi (3). L'interpretazione dei risultati va effettuata da uno specialista qualificato, alla luce della storia
clinica del paziente e delle altre metodiche diagnostiche adottate.
Sinonimo dell'antigene
Recettore LPS, LPS-R e antigene MO2, My4 e LeuM3 (4, 7).
Introduzione
La molecola CD14 matura, una proteina di membrana dal peso molecolare di 53-55 kDa, è composta da 356
aminoacidi ed è ancorata alla membrana cellulare attraverso il legame con il glicosil-fosfatidilinositolo (GPI).
Inoltre, sono state descritte due forme solubili. La prima forma solubile viene prodotta dallo sfaldamento della
superficie cellulare, che porta alla formazione di molecole dal peso di circa 48 kDa (4-7). La seconda forma
solubile viene liberata dalle cellule prima dell'aggiunta del legame GPI, e produce una molecola dal peso
maggiore (6). CD14 funge da recettore per l'endotossina (lipopolisaccaride (LPS)) ed è il recettore più
importante per la risposta letale sulle endotossine e sui batteri Gram-negativi (4, 6). Gli anticorpi diretti contro
CD14 impediscono la produzione del fattore di necrosi tumorale alfa (TNF) indotta dai lipopolisaccaridi (LPS)
(4, 6).
L’espressione della proteina CD14 è marcata sulla superficie dei monociti e ridotta su quella dei granulociti.
L'antigene viene espresso anche dalla maggior parte dei macrofagi tessutali e delle cellule di Langerhans (5-7).
L'antigene CD14 viene espresso sulle cellule leucemiche della linea mielo-monocitica, in particolare sui tipi M4,
M5a e M5b della classificazione FAB (Franco-Americo-Britannica) della leucemia mieloblastica acuta (AML) (3).
Reagente fornito
I coniugati dell'anti-CD14, F 0844 e R 0864, sono stati ricavati da un anticorpo monoclonale murino purificato. I
coniugati vengono forniti in formulazione liquida in tampone contenente l'1% di albumina di siero bovino (BSA)
e 15 mmol/L di NaN3, a pH 7,2. Ciascuna fiala è sufficiente per 100 test (10 L di coniugato per un massimo di
106 leucociti di sangue periferico umano normale).
Isotipo: IgG2a, kappa. Concentrazione del coniugato in mg/L: Vedere l'etichetta sulla fiala.
Specificità
N. codice
anticorpo
Fluorocromo
N. codice controllo
negativo
F 0844
FITC (Isomero 1 dell'isotiocianato di
fluoresceina)
X 0933
R 0864
RPE (R-ficoeritrina)
X 0950
L'anti-CD14, TÜK4, è stato incluso nel Fourth, Fifth and Sixth International Workshop and Conference on
Leukocyte Cell Differentiation Antigens e gli studi condotti da numerosi laboratori ne hanno confermato la
reattività con l'antigene CD14 (5-7).
L'anti-CD14, TÜK4, reagisce marcatamente con i monociti del sangue periferico e mostra un’elevata reattività
nei confronti dei granulociti. Reagisce anche con i macrofagi perivascolari. L'anticorpo marca il 50% delle
cellule di Langerhans nelle sospensioni cellulari epidermiche ed è quindi classificato come debolmente reattivo
(7).
Precauzioni per l'uso
1. Per operatori specializzati.
2. Questo prodotto contiene sodio azide (NaN3), sostanza chimica altamente tossica allo stato puro. Alle i
indicate, il prodotto non è classificato come pericoloso, ma la sodio azide potrebbe reagire con
le tubature
in piombo e rame formando azidi metalliche altamente esplosive. Per lo smaltimento del prodotto è
consigliabile sciacquare abbondantemente per prevenire la formazione di azidi metalliche nelle tubature.
3. Come per ogni prodotto di derivazione biologica, utilizzare procedure di manipolazione adeguate..
Conservazione
Conservare a 2-8° C. Non utilizzare dopo la data di scadenza stampata sulla fiala. Se i reagenti vengono
conservati con modalità diverse da quelle specificate, l'utente deve verificarne le condizioni. Non ci sono segni
evidenti di instabilità del prodotto. Pertanto, i controlli positivi e negativi vanno eseguiti contemporaneamente ai
campioni del paziente. Rivolgersi al servizio tecnico qualora si osservi la comparsa di una colorazione
imprevista, non giusitifcata da variazioni nelle procedure di laboratorio, e si sospetti un problema dovuto
all'anticorpo.
Procedura di colorazione
1.
Raccogliere il sangue venoso in una provetta contenente un anticoagulante.
2.
Isolare le cellule mononucleate mediante centrifugazione su un mezzo di separazione. Oppure, lisare i
globuli rossi dopo il punto 6.
3.
Lavare due volte le cellule mononucleate con RPMI 1640 o con PBS (soluzione salina di tampone fosfato) , a
pH 7,2 - 7,4.
4.
Miscelare 100 L di sospensione cellulare con 10 L di anti-CD14 coniugato con fluorocromo.
(104134-003)
F 0844/R 0864/IT/SSA/23.02.04 p 1/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
5.
Utilizzare come controllo negativo un anticorpo monoclonale non reattivo del medesimo isotipo, coniugato
con lo stesso fluorocromo (vedere la tabella).
6.
Incubare al buio a 4 ºC per 30 minuti.
7.
Lavare due volte con PBS contenente il 2% di BSA. Risospendere le cellule in liquido idoneo per
citofluorimetria a flusso, ad es. 0,3 mL di paraformaldeide all'1% (fissativo) in 0,01 mol/L di PBS, a pH 7,4.
8.
Analizzare su un citofluorimetro a flusso.
Con ogni esecuzione del test, è opportuno includere un idoneo campione di controllo positivo e negativo del
reagente e della preparazione. Si fa presente che i coniugati con fluorocromo sono fotosensibili, perciò devono
essere protetti dalla luce durante la colorazione e fino all'esecuzione dell'analisi.
Riferimenti bibliografici
1.
Centers for disease control. Guidelines for the performance of CD4+ T-cell determinations in persons
with human immunodeficiency virus infection. MMWR 1992;41 (No. RR-8);001. CDC Publication date
05/08/1992.
2.
National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS) Document. Clinical applications of flow
cytometry: Quality assurance and immunophenotyping of peripheral blood lymphocytes. H42-T
1992;12:1-76.
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van Dongen JJM, Adriaansen HJ. Immunobiology of leukemia. In: Henderson ES, Lister TA, Greaves
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4.
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5.
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7.
Goyert SM, Tesio L, Ashman LK, Ball E, Bazil V, Garrido F, Hogg N, Horejsi V, et al. M3.1. Report on the
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Borne AEG, editors. Leucocyte typing IV. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 4th
International Workshop and Conference on Human Leucocyte Differentiation Antigens; 1989 Februarv
21-25; Vienna, Austria. Oxford, New York, Tokyo: Oxford University Press; 1989. p. 789-94.
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