TIROCINIO LAUREA MAGISTRALE LABORATORIO DI BIOLOGIA CELLULARE ISTITUTO DI NEUROSCIENZE DEL CNR – DIPARTIMENTO DI FARMACOLOGIA MEDICA, UNIVERSITA’ DI MILANO DOCENTE-GUIDA SEDE DEL LABORATORIO DOVE SI SVOLGERA’ LA TESI DESCRIZIONE DEL PROGETTO DI RICERCA NOME COGNOME INDIRIZZO EMAIL NUMERO TELEFONICO Nica Borgese [email protected] 02-50316971/72/47 Istituto Neuroscienze del CNR/ Dipartimento di Farmacologia Medica Via Vanvitelli 32, 20129 Milano MECCANISMO DI INSERMENTO POST-TRADUZIONALE DI PROTEINE DI MEMBRANA. Un problema fondamentale nella Biologia Cellulare riguarda il meccanismo tramite cui le cellule eucariotiche costruiscono i loro molteplici compartimenti. Ogni membrana contiene proteine transmembrana diverse che la caratterizzano, tuttavia non tutti i meccanismi alla base dello specifico inserimento di ciascuna proteina nella corretta membrana sono compresi, e la disfunzione di questi meccanismi porta a gravi patologie. Il progetto di tesi si occuperà dei meccanismi di inserimento nel reticolo endoplasmatico di cellule di mammifero di una particolare classe di proteine di membrane, le cosiddette proteine “tail-anchored” (ancorate con coda C-terminale); queste si inseriscono con un particolare meccanismo post-traduzionale che differisce dal più comune e meglio caratterizzato meccanismo cotraduzionale utilizzato dalla maggiore parte delle proteine transmembrana. Della classe “tail-anchored” fanno parte proteine con funzioni fondamentali, come le proteine della famiglia Bcl2 (regolatori dell’apoptosi) e le SNARES (proteine necessarie per il traffico vescicolare). Scopo del progetto sarà di identificare il recettore, a tutt’oggi sconosciuto, della membrana del reticolo endoplasmatico di mammifero responsabile per l’inserimento delle proteine “tailanchored”. TECNICHE CHE LO STUDENTE UTILIZZERA’ DURANTE LO SVOLGIMENTO DELLA TESI DNA ricombinante – PCR - costruzione di plasmidi- analisi di sequenze – Trascrizione e traduzione in vitro tecniche biochimiche standard (SDS-PAGE, western blotting, dosaggi vari) - frazionamento cellulare - tecniche cromatografiche (affinità e standard) - tecniche di proteomica