ENZIMI DI RESTRIZIONE
• BIOLOGIA
• TECNOLOGIA
Ricombinazione del DNA in vitro
Analisi di frammenti di
restrizione mediante elettroforesi
con gel di agarosio
Marcatore di peso
molecoleare
LA TECNICA
DEL SOUTHERN
TRANSFER
MAPPE DI
RESTRIZIONE
NORTHERN
Southern (DNA), Northern (RNA), Western (proteine) blot
Analisi genetica usando i polimorfismi di restrizione
Eliminazione di un sito di restrizione mediante mutazione
RFLP: polimorfismi di restrizione
Analisi di un albero genealogico mediante RFLP
Amplificazione di frammenti di DNA in vivo ed in vitro
(Clonaggio e PCR)
FRAMMENTAZIONE DI UN DNA CIRCOLARE
MEDIANTE ENZIMI DI RESTRIZIONE
Shot-gun
Identificazione di cloni batterici che
contengono un plasmide con
un’inserzione di un frammento di DNA
Inattivazione di un gene la cui attività
può essere identificata su piastra
Il plamide pBR322: inserzione in un
gene per la resistenza ad antibiotici
Quale enzima di restrizione scegliere per un
esperimento di shotgun?
COSTRUZIONE DI UNA
LIBRERIA MEDIANTE
CLONAGGIO NEL
BATTERIOFAGO LAMBDA
Vettori ibridi: cosmidi
Costruzione di una libreria genomica usando digestioni
parziali con enzimi di restrizione
Clonaggio di una sequenza complementare ad un RNA (cDNA)
IDENTIFICAZIONE DI UNO SPECIFICO CLONE
MEDIANTE IBRIDIZZAZIONE CON OLIGONUCLEOTIDI
Identificazione di un clone che esprime una particolare proteina
CHROMOSOMAL WALKING
Step 1
Step 2
Inserzione di una sequenza conosciuta (Tag) vicino
ad un gene di interesse
LA TECNICA DI SEQUENZIAMENTO MEDIANTE
DESOSSINUCLEOTIDI
Analisi della sequenza desossinucleotida
usando precursori fluorescenti
Polimerase
Chain
Reaction
Ricombinazioni di plasmidi ricombinanti con un genoma
Utilizzo del batterio Agrobacterium tumefaciens per la
manipolazione genetica delle piante
Utilizzo del batterio Agrobacterium tumefaciens per la
manipolazione genetica delle piante
