12-DNA Ricombinante
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ENZIMI DI RESTRIZIONE • BIOLOGIA • TECNOLOGIA Ricombinazione del DNA in vitro Analisi di frammenti di restrizione mediante elettroforesi con gel di agarosio Marcatore di peso molecoleare LA TECNICA DEL SOUTHERN TRANSFER MAPPE DI RESTRIZIONE NORTHERN Southern (DNA), Northern (RNA), Western (proteine) blot Analisi genetica usando i polimorfismi di restrizione Eliminazione di un sito di restrizione mediante mutazione RFLP: polimorfismi di restrizione Analisi di un albero genealogico mediante RFLP Amplificazione di frammenti di DNA in vivo ed in vitro (Clonaggio e PCR) FRAMMENTAZIONE DI UN DNA CIRCOLARE MEDIANTE ENZIMI DI RESTRIZIONE Shot-gun Identificazione di cloni batterici che contengono un plasmide con un’inserzione di un frammento di DNA Inattivazione di un gene la cui attività può essere identificata su piastra Il plamide pBR322: inserzione in un gene per la resistenza ad antibiotici Quale enzima di restrizione scegliere per un esperimento di shotgun? COSTRUZIONE DI UNA LIBRERIA MEDIANTE CLONAGGIO NEL BATTERIOFAGO LAMBDA Vettori ibridi: cosmidi Costruzione di una libreria genomica usando digestioni parziali con enzimi di restrizione Clonaggio di una sequenza complementare ad un RNA (cDNA) IDENTIFICAZIONE DI UNO SPECIFICO CLONE MEDIANTE IBRIDIZZAZIONE CON OLIGONUCLEOTIDI Identificazione di un clone che esprime una particolare proteina CHROMOSOMAL WALKING Step 1 Step 2 Inserzione di una sequenza conosciuta (Tag) vicino ad un gene di interesse LA TECNICA DI SEQUENZIAMENTO MEDIANTE DESOSSINUCLEOTIDI Analisi della sequenza desossinucleotida usando precursori fluorescenti Polimerase Chain Reaction Ricombinazioni di plasmidi ricombinanti con un genoma Utilizzo del batterio Agrobacterium tumefaciens per la manipolazione genetica delle piante Utilizzo del batterio Agrobacterium tumefaciens per la manipolazione genetica delle piante
