Calendario Esercitazioni Insegnamento ‘Miglioramento genetico dei lieviti’ A.A. 2016-2017 Titolare dell’insegnamento: Prof. Paolo Giudici Responsabile delle esercitazioni: Dr.ssa Lisa Solieri Esercitazione Data N°1 07-11-2016 Orario 14,00-16,00 N°2 14-11-2015 14,00-15,00 14-11-2015 15,00-16,00 N°3 21-11-2016 14,00-15,00 15,00-16,00 N°4 28-11-2016 14,00-16,00 N°5 05-12-2016 14,00-15,00 15,00-16,00 N°6 05-12-2016 9,00-17,00 N°7 06-12-2016 14,00-16,00 N°8 12-12-2016 14,00-16,00 Argomento Osservazione al microscopio a contrasto di fase di cellule di Saccharomyces cerevisiae e altre specie in attiva propagazione e aschi di spore Preparazione di terreni culturali per la propagazione mitotica di S. cerevisiae e per l’induzione della meiosi Preparazione di una soluzione di Zimoliasi e digestione enzimatica della parete di aschi di lievito in sospensione acquosa Dissezione di una tetrade S. cerevisiae; Costituzione di ibridi mediante metodo ‘spore to spore’ Caratterizzazione dell’idiomorfo sessuale in colture monosporali di S. cerevisiae derivanti da una tetrade dissezionata. Allestimento di un gel elettroforesi per il controllo della PCR da colonia Annotazione geni MAT sul ChrIII e identificazione delle sequenze primer Cariotipo di candidati ibridi e delle relative coppie parentali (prima parte) Cariotipo di candidati ibridi e delle relative coppie parentali (seconda parte) Consultazione del Saccharmoyces genome database e della piattaforma Yeast Gene Order Browser (YGOB) per la ricerca dei geni MAT in S. Competenze -Preparazione di un vetrino; -Riconoscimento di cellule in gemmazione; -Riconoscimento di gameti. -Allestimento di terreni colturali; -Allestimento di una pre-coltura di lievito; -Utilizzo dell’autoclave. -Allestimento di una reazione enzimatica; -Riconoscimento della degradazione progressiva di parete di cellule di lievito. -Utilizzo del micromanipolatore -Allestimento di PCR da colonia dei geni MAT (MATa e MATα); -Preparazione di gel d’agarosio; -Riconoscimento di ampliconi MATa e MATα. -Utilizzo di GenBank -Preparazione di plugs di sferoplasti di S. cerevisiae; -Principi di utilizzo e funzionamento del CHEF-Mapper. -Allestimento gel-elettroforesi per CHEF-Mapper; -Analisi dei risultati - Utilizzo del SGD - Utilizzo di YGOB - Allineamento di geni e disegno di primer uvarum