DESTINI METABOLICI DEL PIRUVATO Metabolismo aerobico: il piruvato entra nel mitocondrio Glicolisi Piruvato Acetil-CoA Ciclo di Krebs Catena di trasporto degli elettroni Complesso della Piruvato deidrogenasi (PDH) Piruvato Acetil-CoA La reazione produce oltre all’acetil-CoA anche un equivalente riducente di NADH che può essere indirizzato alla catena di trasporto di e - mitocondriale. Partendo da 1 molecola di glucosio si ottengono 2 Acetil-CoA e 2 NADH Complesso della Piruvato deidrogenasi (PDH) Complesso multienzimatico contenente copie multiple di 3 distinte attività enzimatiche (E1 - E2 - E3) E1 = piruvato deidrogenasi (in E. coli 24 subunità) E2 = diidrolipoammide acetiltransferasi (24 subunità) E3 = diidrolipoammide deidrogenasi (12 subunità) Decarbossilazione ossidativa del piruvato. È un processo irreversibile. In E. coli: le 24 subunità E2 costituiscono il cuore del complesso Mike Williamson, COME FUNZIONANO LE PROTEINE, Zanichelli editore S.p.A. Copyright © 2013 10 | 4 Subunità E1 Contiene come cofattore la TPP. Catalizza la decarbossilazione del piruvato e la formazione dell’intermedio idrossietil-TPP E1 Piruvato Idrossietil- _ La forma carbanionica dell’Idrossietil-TPP è quella più reattiva ed entra in gioco nella reazione successiva Subunità E2 Contiene come cofattore la Lipoammide. La subunità E1 trasferisce il gruppo idrossietilico dalla TPP sulla lipoammide della subunità E2: nel trasferimento l’idrossietile è OSSIDATO a gruppo Acetilico e il ponte disolfuro della lipoammide viene ridotto. Si forma un legame tioestere ad alta energia. La subunità E2 catalizza poi la transacetilazione del gruppo acetilico dalla Lipoammide al Coenzima A con conseguente formazione di Acetil-CoA. La lipoammide rimane nella forma ridotta. _ H+ H+ O =C-CH3 HS S HS S ACETIL DIIDROLIPOAMIDE Mike Williamson, COME FUNZIONANO LE PROTEINE, Zanichelli editore S.p.A. Copyright © 2013 10 | 7 Ciascuno porta un braccio di lipoammide che può caricare un gruppo acetilico Dominio della subunità periferica Il movimento del braccio mobile della lipoammide garantisce una canalizzazione dei prodotti da una reazione all’altra, il processo è più efficiente e non si verifica perdita di intermedi metabolici. Mike Williamson, COME FUNZIONANO LE PROTEINE, Zanichelli editore S.p.A. Copyright © 2013 10 | 8 Subunità E3 Contiene come cofattore il FAD. Catalizza l’ossidazione della lipoillisina (si riforma il ponte disolfuro) con riduzione del FAD a FADH2 il quale trasferirà poi 2 e- sul NAD+ con conseguente produzione finale di NADH. D. Voet – C. W. Pratt – J. G. Voet, FONDAMENTI DI BIOCHIMICA, Zanichelli editore S.p.A. Copyright © 2013 17 | 9 FAD LIPOAMMIDE RIDOTTA HS SH Cys S Cys S OSSIDORIDUZIONI NELLA SUBUNITA’ E3 NAD+ FAD FADH2 SH S SH S FAD S + NADH + H+ S LIPOAMMIDE OSSIDATA Il NADH è un trasportatore mobile di e-, nella forma ridotta lascia il complesso della piruvato deidrogenasi per dirigersi alla catena respiratoria mitocondriale REGOLAZIONE DEL COMPLESSO DELLA PIRUVATO DEIDROGENASI DISPONIBILITA’ DEL SUBSTRATO MODULAZIONE ALLOSTERICA MODIFICAZIONI COVALENTI (fosforilazione/defosforilazione) I prodotti della reazione funzionano da modulatori allosterici negativi: Acetil-CoA (sulla transacetilasi, E2) NADH (sulla diidrolipoil deidrogenasi, E3) reazione irreversibile alte concentrazioni di Acetil-CoA e NADH informano l’enzima che non è più necessario metabolizzare il piruvato (le esigenze cellulari sono soddisfatte) L’attività della PDH è connessa anche al metabolismo dei lipidi: una elevata degradazione dei lipidi che incrementa il livello di Acetil-CoA e NADH rallenta la PDH e porta al risparmio di glucosio. NADH e Acetil-CoA quando presenti ad alte concentrazioni nel mitocondrio attivano la piruvato deidrogenasi chinasi che fosforilando il complesso lo rende inattivo In condizioni di elevato apporto glucidico, sotto stimolo dell’Insulina, è attivata una fosfatasi specifica che defosforila il complesso rendendolo attivo e permettendo quindi l’ingresso di piruvato nel ciclo di Krebs D. Voet – C. W. Pratt – J. G. Voet, FONDAMENTI DI BIOCHIMICA, Zanichelli editore S.p.A. Copyright © 2013 17 | 12