γ-GT γ-GT Carbossi substrato. Cinetico Determinazione quantitativa della γ-glutamiltransferasi (γ-GT) IVD Conservare a 2-8°C WR (mL) 1.0 100 Campione (µL ) 4. Mescolare,aspettare 1 minuto. 5. Leggere l’Ass.iniziale (A) del campione,far partire il cronometro e leggere le assorbanze ad intervalli di 1 minuto per 3 minuti. 6.Calcolare il ∆A per minuto (∆A/min.). PRINCIPIO DEL METODO La γ-glutaliltransferasi (γ-GT) catalizza il trasferimento del gruppo γglutamil dalla γ-glutamil-p-nitroanilide alla glicilglicina,come dalla seguente reazione: γ-GT γ-L-glutamyl-3-carboxi-4-nitroanilide + glycylglycine γ-L-Glutamyl-glycylglycine + ac.2-Nitro-5-aminobenzoico CALCOLI ∆A/min. x 1190*= U/L di γ-GT La velocità di decremento della concentrazione di acido 2nitro-5-aminobenzoico formatosi,misurata per via fotometrica,è proporzionale alla concentrazione catalitica della γ-GT presente nel campione. Unità:una unità internazionale (IU) è la quantità di enzima che trasforma 1 µmol di substrato in 1 minuto,in condizioni standard. La concentrazione è espressa in unità per litro di campione (U/L). Fattori di conversione a diverse temperature In dipendenza della temperatura di lavoro,correggere i risultati moltiplicando per i seguenti fattori: SIGNIFICATO CLINICO La γ-GT è un enzima cellulare con una vasta distribuzione nei tessuti,principalmente nel rene,pancreas,fegato e prostata. La misura dell’attività della γ-GT viene utilizzata nella diagnosi e nel trattamento delle malattie epatobiliari come ostruzione biliare,cirrosi e tumori del fegato. Temperatura di lavoro 25°C 30°C 37°C REAGENTI R1 Tampone TRIS pH 8.6 100 mmol/L R2 Substrato Glicilglicina L-γ-glutamil-3-carbossi-4-nitroanilide 100 mmol/L 3 mmol/L 25°C 30°C 37°C 1.00 0.73 0.56 1.37 1.00 0.77 1.79 1.30 1.00 CONTROLLO QUALITA’ Si consiglia di utilizzare dei sieri di controllo per monitorare le performance del procedimento. Se i valori dei controlli sono al di fuori del range definito,controllare lo strumento,i reagenti e la tecnica per determinare i problemi. Ciascun laboratorio dovrebbe stabilire un proprio schema di Controllo di Qualità e le azioni correttive se i controlli non rientrano nei limiti di tollerabilità. PREPARAZIONE Soluzione di lavoro (WR): Ref:CH-40 Sciogliere ( ) una tavoletta di Substrato R2 in 2 ml di Tampone R1. Ref:CH-41 Sciogliere ( ) una tavoletta di Substrato R2 in 15 mL di Tampone R1. Agitare delicatamente per omogeneizzare la soluzione. Stabilità: 21 gg. A 2-8°C o 5 gg a T.A (15-25°C ). VALORI DI RIFERIMENTO Uomini Donne 25°C 4-18 U/L 6-28 U/L 30°C 5-25 U/L 8-38 U/L 37°C 7-32 U/L 11-50 U/L Questi valori sono orientativi;ciascun laboratorio dovrebbe stabilire un proprio intervallo di riferimento. CONSERVAZIONE E STABILITA’ Tutti i componenti del kit sono stabili fino alla data di scadenza indicata sull’etichetta se conservati ben chiusi a 2-8°C,protetti dalla luce e se si evitano contaminazioni durante l’uso. Non usare tavolette che appaiono spezzate. Non utilizzare i reagenti oltre la data di scadenza. Segnali di deterioramento dei reagenti: -presenza di particelle e torbidità; -assorbanza del bianco (A) a 405 nm > o =1.20. CARATTERISTICHE DEL METODO 1. Range di misura: dal limite di detenzione di 2.56 U/L al limite di linearità di 250 U/L. Se i valori ottenuti sono superiori al limite di linearità,diluire il campione ½ con NaCl 9 g/L e moltiplicare il risultato per 2. 2. Precisione: MATERIALE ADDIZIONALE -Spettrofotometro o colorimetro che misuri a 405 nm. -Bagno termostatico a 25°C,30°C o 37°C (± 0.1°C). -Cuvette con cammino ottico di 1 cm. -Attrezzatura generale di laboratorio. Media (U/L) SD CV (%) 3. 4. CAMPIONI Siero fresco. La γ-GT è stabile almeno 3 gg. a 2-8°C, 8 ore a 15-25 °C e 1 mese a -20 °C. PROCEDIMENTO 1.Condizioni operative: Lunghezza d’onda: 405 nm Cuvette : cammino ottico 1 cm T. costante: 25°C/30°C/37°C 2. Azzerare lo strumento contro acqua distillata o aria. 3. Pipettare in cuvetta: Intra-assay (n=20) 45.7 203 0.66 1.72 1.44 0.85 Inter-assay (n=20) 45.5 203 1.04 3.43 2.28 1.69 Sensibilità diagnostica: 1 U/L= 0.0008 ∆A/min. Accuratezza: i risultati ottenuti con i reagenti di questo kit (y) non mostrano differenze sistematiche se comparati con altri reagenti in commercio (x). Coefficiente di correlazione (r):0.99 Equazione di regressione: y=0.9919x-0.1042 INTERFERENZE Non deve essere utilizzato il plasma.Gli anticoagulanti inibiscono l’enzima.Elevata emolisi interferisce nel dosaggio. Un elenco di farmaci ed altre sostanze che interferiscono con la determinazione della γ-GT è stato riportato in letteratura da Young e al. 1 Rev. 0 Ed. 2004 Intermedical srl. Via A:Genovesi,13– 80010 Villaricca (NA) Tel. +39 081 3302705 Fax +39 081 3301453 E-Mail: [email protected] Sito: www.intermedical-italy.it NOTA Sono disponibili su richiesta le metodiche applicative per i più diffusi analizzatori automatici. BIBLIOGRAFIA 1. Gendler S. γ-GT.Kaplan A. Et al. Clin. Chem. The C.V. Mosby Co. St.Louis.Toronto.Princeton 1984 ;1120-1123. 2. Persijn J.P. et al. J.Clin.Chem. Clin. Biochem. 1976; (14) 9:421-427. th 3. Young DS. Effects of drugs on clin. Lab. test, 4 ed. AACC Press, 1995 4. Young DS. Effects of disease on clin. Lab. test, 4th ed. AACC Press, 2001. rd 5. Burtis A. et al. Tietz Textbook of Clin. Chem.,3 ed. AACC 1999. 6. Tietz N.W. et al. Clin. Guide to Lab.Tests,3rd ed. AACC 1995. CONFEZIONE γ-GT Ref.: CH-40 Cont : 20 x 2 mL Ref.: CH-41 Cont : 15 x 15 mL SIMBOLI GRAFICI ADOTTATI Consultare le istruzioni dell’uso Conservare a 2-8°C Fabbricante Dispositivo medico-diagnostico in vitro Numero di catalogo Numero di lotto Cont Contenuto Utilizzare entro 2 Rev. 0 Ed. 2004 Intermedical srl. Via A:Genovesi,13– 80010 Villaricca (NA) Tel. +39 081 3302705 Fax +39 081 3301453 E-Mail: [email protected] Sito: www.intermedical-italy.it