AMILASI

AMILASI
AMILASI
Cinetico CNPG3
Determinazione quantitativa dell’ α-amilasi (AMS)
Conservare a 2-8°C
IVD
PROCEDIMENTO
1.Condizioni operative:
Lunghezza d’onda:
405 nm
Cuvette :
cammino ottico 1 cm
T. costante:
37°C
2. Azzerare lo strumento contro acqua dist.
3. Pipettare in cuvetta:
PRINCIPIO DEL METODO
L’α-amilasi idrolizza il 2-cloro-4-nitrofenil-α-D-maltotriosido(CNPG3)
a 2-cloro-4-nitrofenolo (CNP) e forma il 2-cloro-4-nitrofenil-α-Dmaltoside (CNPG2),maltotrioso (G3) e glucosio (G),secondo la
reazione:
Amilasi
10 CNPG3
9 CNP + 1 CNPG2 + G3 + G
R (mL )
Campioni (µL )
La velocità di formazione del CNP,determinata fotometricamente,è
proporzionale alla concentrazione catalitica dell’α-amilasi nel
campione esaminato.
Siero o plasma
1.0
20
Urine
1.0
10
4. Mescolare e incubare 2 min. a 37°C .
5. Leggere l’Ass.iniziale (A) del campione,far partire il cronometro e
leggere le assorbanze ad intervalli di 1 minuto per 3 minuti.
6.Calcolare il ∆A per minuto (∆A/min.).
SIGNIFICATO CLINICO
L’α-amilasi è un enzima che aiuta la digestione del glicogeno e
dell’amido.Essa si produce principalmente nelle ghiandole salivari e
nel pancreas esocrino.La sua determinazione è utile soprattutto per
diagnosticare e controllare le malattie pancreatiche come la
pancreatine cronica o acuta. Essa può anche rifletter una patologia
biliare o gastrointestinale o altri sconvolgimenti.
La diagnosi clinica non dovrebbe essere fatta sul risultato di un
singolo test;essa dovrebbe integrare i dati clinici e gli altri dati di
laboratorio.
Unità:una unità internazionale (IU) è la quantità di enzima che
trasforma 1 µmol di substrato in 1 minuto,in condizioni standard. La
concentrazione è espressa in unità per litro di campione (U/L).
REAGENTI
Fattore di conversione: U/L x 0.01667 = µkat/L.
R
MES pH 6.0
100 mmol/L
CNPG3
2.25 mmol/L
Cloruro di Sodio
350 mmol/L
Acetato di Calcio
6 mmol/L
Tiocianato di Potassio
Sodio azide
CALCOLI
Siero o plasma:
Urine:
∆A/min. x 3954 = U/L di AMS
∆A/min. x 7908 = U/L di AMS
CONTROLLO QUALITA’
Si consiglia di utilizzare dei sieri di controllo per monitorare le
performance del procedimento.
Se i valori dei controlli sono al di fuori del range definito,controllare
lo strumento,i reagenti e la tecnica per determinare i problemi.
Ciascun laboratorio dovrebbe stabilire un proprio schema di
Controllo di Qualità e le azioni correttive se i controlli non rientrano
nei limiti di tollerabilità.
900 mmol/L
0.95 gr/L
VALORI DI RIFERIMENTO
PREPARAZIONE:
Tutti i reagenti sono pronti all’uso.
CONSERVAZIONE E STABILITA’
Tutti i componenti del kit sono stabili fino alla data di scadenza
indicata sull’etichetta se conservati ben chiusi a 2-8°C,protetti dalla
luce e se si evitano contaminazioni durante l’uso.
Non utilizzare i reagenti oltre la data di scadenza.
Una volta aperto il flacone,il reagente è stabile per 60 gg. se
conservato ben chiuso a 2-8°C, protetto dalla luce e se si evitano
contaminazioni durante l’uso.
Segnali di deterioramento dei reagenti:
-presenza di particelle e torbidità;
-assorbanza del bianco (A) a 405 nm ≥0.50.
Siero o plasma:
fino a 90 U/L
Urine:
fino a 450 U/L
Questi valori sono orientativi;ciascun laboratorio dovrebbe stabilire
un proprio intervallo di riferimento.
CARATTERISTICHE DEL METODO
1. Range di misura: dal limite di detenzione di 1 U/L al limite di
linearità di 2000 U/L. Se i valori ottenuti sono superiori al limite
di linearità,diluire il campione 1/2 con NaCl 9 g/L e moltiplicare
il risultato per 2.
2.
MATERIALE ADDIZIONALE
-Spettrofotometro o colorimetro che misuri a 405 nm.
-Bagno termostatico a 37°C.
-Cuvette con cammino ottico di 1 cm.
-Attrezzatura generale di laboratorio.
Precisione:
Media(U/L)
SD
CV (%)
2.
3.
CAMPIONI
-Siero o plasma. Usare eparina come anticoagulante.
-Urine.Portare a pH di circa 7.0 prima della conservazione.
Stabilità: 1 mese a 2-8°C.
Intra-assay (n=20)
61.2
165
1.00
2.44
1.64
1.47
Inter-assay (n=20)
65.1
172
2.84
4.57
4.36
2.65
Sensibilità : 1 U/L= 0.0003 ∆A/min.
Accuratezza: i risultati ottenuti con i reagenti di questo kit non
mostrano differenze sistematiche se comparati con altri
reagenti in commercio .
I risultati delle caratteristiche dipendono dall’analizzatore utilizzato.
1
Rev. 0 Ed. 2005
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INTERFERENZE
L’emolisi interferisce sui risultati.
L’attività enzimatica dell’ α-amilasi dipende dalla temperatura,per cui
le determinazioni condotte a temperature < 37°C o > 37°C possono
causare un’ apparente diminuzione o aumento dei livelli di AMS.
Un elenco di farmaci ed altre sostanze che interferiscono con la
determinazione dell’acido urico è stato riportato in letteratura da
Young e al.
NOTE
1. L’attività enzimatica dell’ α-amilasi dipende dalla temperatura,per
cui le determinazioni condotte a temperature < 37°C o > 37°C
possono causare un’ apparente diminuzione o aumento dei livelli di
AMS.
2. La saliva e il sudore contengono α-amilasi.Evitare di pipettare con
la bocca e il contatto della pelle con i reagenti o il materiale usato nel
dosaggio.
3. Sono disponibili su richiesta le metodiche applicative per i più
diffusi analizzatori automatici.
4. Contiene potassio tiocianato. Evitare inalazione, il contatto con
pelle e occhi. Se accade, lavare con abbondante acqua e consultare
un dottore.
BIBLIOGRAFIA
1.Ying Foo A. et al- Amylase measurement with 2-chloro-4-nitrophenyl
maltotrioside as substrate.Clin. Chim. 272,1998; 137-147.
2.Schultz A. Uric.Kaplan A et al. Clin. Chem.The C.V. Mosby
Co.St.Louis.Toronto.Princeton 1984 ; 1112-1116.
th
3.Young DS. Effects of drugs on clin. Lab. test, 4 ed. AACC Press, 1995
4.Young DS. Effects of disease on clin. Lab. test, 4th ed. AACC Press, 2001.
5.Burtis A. et al. Tietz Textbook of Clin. Chem.,3rd ed. AACC 1999.
6.Tietz N.W. et al. Clin. Guide to Lab.Tests,3rd ed. AACC 1995.
CONFEZIONE AMILASI
Ref.:
CH-102
Cont
CH-05
: 2 x 50 mL
: 20 X 2 mL
SIMBOLI GRAFICI ADOTTATI
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Fabbricante
Utilizzare entro
Dispositivo medico-diagnostico in vitro
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