ESPERIENZA SCUOLA-LAVORO
LICEO SCIENTIFICO LEONARDO DA VINCI
PRESSO IL LABORATORIO DI GENETICA MEDICA A.O.U. “A. MEYER”
Periodo di frequenza: 10 gennaio 2011- 14 gennaio 2011
DIAGNOSI MOLECOLARE DI NEUTROPENIA CICLICA
La neutropenia ciclica (NC) è un disordine congenito dell'ematopoiesi, trasmesso come carattere
autosomico dominante, con penetranza completa, ma manifestazioni cliniche di diversa severità.
E' caratterizzata da importanti e regolari oscillazioni dei neutrofili ematici, da livelli quasi normali a
estremamente bassi, ad intervalli di circa 21 giorni.
Gli episodi ricorrenti di severa neutropenia portano a ripetute e a volte gravissime infezioni. I
sintomi più frequenti sono febbre ricorrente, gengivite, faringo-tonsillite, affaticamento, ulcere
orali, ascessi dentari e cellulite.
Il difetto genico nella neutropenia ciclica è localizzato nel cromosoma 19p13.3.15 che codifica per
l'elastasi neutrofila (ELA2). L'elastasi neutrofila è rilasciata dai neutrofili durante l'infiammazione e
causa la distruzione dei tessuti. La mutazione coinvolge il sito catalitico dell'enzima che può portare
all'incapacità degli inibitori di legare e quindi inattivare l'elastasi.
Questi pazienti sono sottoposti a terapia con il fattore stimolante le colonie granulocitarie (hrGCSF) che aumenta l'ampiezza delle oscillazioni dei neutrofili, accorciando la durata delle
neutropenia e modificando la lunghezza del ciclo da 21 a circa 14 giorni con conseguente
miglioramento clinico.
Fasi sperimentali eseguite direttamente dagli alunni:
1) Estrazione del DNA con BioRobot EZ1 (Qiagen)…….
2) Analisi della quantità e della purezza del DNA estratto con Nanodrop 2000……………
3) Amplificazione P.C.R. della porzione codificante del gene ELA2 (promotore ed esoni 1-5)
4) Rivelazione elettroforetica su gel di agarosio dei prodotti di amplificazione…………
5) Purificazione dei prodotti di amplificazione con metodo enzimatico EXOSAP-IT……..
6) Reazione di sequenza………….
7) Purificazione della reazione di sequenza………
8) Corsa elettroforetica dei prodotti di sequenza sul sequenziatore ABI Prism 3130XL Genetic
Analyser (Applied Biosystems)
9) Interpretazione dei dati …..
10) Refertazione dell’analisi molecolare…..
