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ALTERNANZA SCUOLA LAVORO DIPARTIMENTO SAFE - UNIFG FONDAMENTI DI BIOLOGIA MOLECOLARE PCR E APPLICAZIONI DOTT. LUCIANO BENEDUCE [email protected] BIOLOGIA MOLECOLARE Dal DNA alla proteina, molecole ed informazioni I «ferri del mestiere» della biologia molecolare fotocopiatrice (la PCR) forbici e colla (gli enzimi di restrizione) DAL DNA ALLA PROTEINA COME AVVIENE LA DUPLICAZIONE DEL DNA LA DNA POLIMERASI ENZIMI DI RESTRIZIONE PLAY LA PCR storia Importanza nella diagnostica molecolare Come funziona BIOLOGIA MOLECOLARE AL LAVORO Video PCR PLAY Video elettroforesi PLAY POSSIBILI GENI TARGET • Salmonella spp. : gene InvA • E. coli O157:H7: geni Stx1 ed Stx2 , gene Eae • Listeria monocytogenes: gene Hly • LAB produttori di amine biogene: geni Tdc, Hdc • Batteri ammonio-ossidanti: gene AmoA APPLICAZIONI DELLA PCR NELLA SICUREZZA ALIMENTARE La ricerca di microrganismi patogeni La determinazione di ogm negli alimenti Valutazione di possibile presenza di allergeni PCR QUANTITATIVA (REAL TIME PCR) • E' un metodo che abbina una normale PCR ad un sistema di lettura in tempo reale della fluorescenza emessa durante l'accumulo di prodotti PCR marcati • Si utilizzano delle chimiche che permettono di misurare la PCR in tempo reale • Si ottengono curve che, opportunamente analizzate, permettono di risalire alla concentraizone di DNA o RNA di partenza. COME FUNZIONA LA QPCR Video pcr quantitativa PLAY RICERCA DI ALLERGENI Multiplex pcr per la ricera di tracce di DNA di nocciole, noci, arachidi RICERCA DI MICRORGANISMI PATOGENI Salmonella negli alimenti e nelle acque RICERCA DI OGM NEGLI ALIMENTI Ricerca di geni del mais Bt in farine o alimenti COME QUANTIFICARE I PRODOTTI PCR GRAZIE PER L’ATTENZIONE
