PCR - Istituto Garcia Marquez

PCR
DENATURAZIONE E ANNEALING
POLIMERIZZAZIONE
Figura: Reazione a catena della polimerasi (figura pagina precedente)
La reazione a catena della polimerasi (PCR) è una procedura mediante la quale è
possibile ottenere in tempi estremamente rapidi un gran numero di copie di un
frammento di DNA, utilizzando un enzima specifico, la polimerasi e una miscela di
nucleotidi liberi.
La PCR si svolge in tre fasi.
1) Durante la prima fase, o denaturazione, la molecola di DNA viene riscaldata e
scissa nei due filamenti complementari.
2) Nella seconda fase o annealing, brevi sequenze di DNA dette promotori o
primers, sintetizzate chimicamente, vengono aggiunte nella provetta di reazione; ad
una determinata temperatura, i primers si legano in punti specifici di ciascun
filamento di DNA.
3) Terza fase o polimerizzazione, l’enzima polimerasi catalizza il legame delle
sequenze primer con nucleotidi liberi; ciò avvia la progressiva formazione di un
nuovo filamento di DNA complementare a quello originario.
Per ogni ciclo della PCR, dunque, si ottengono due copie identiche del frammento
iniziale di DNA; la velocità della reazione è tale che in poche ore vengono sintetizzati
cento miliardi di molecole.
A cosa serve la PCR?
La PCR può essere utilizzata in un’ampia varietà di analisi tra cui:
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Test di paternità;
Studi di evoluzione e filogenesi;
Identificazione di malattie ereditarie;
Clonaggio di un gene;
Analisi di DNA antico;
Genotipizzazione di specifiche mutazioni e polimorfismi;
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