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Lewin, IL GENE VIII, Zanichelli editore S.p.A. Copyright © 2006 Lewin, IL GENE VIII, Zanichelli editore S.p.A. Copyright © 2006 Trascrizione e traduzione sono contemporanee La sintesi dell’RNA avviene nella bolla di trascrizione Lewin, IL GENE VIII, Zanichelli editore S.p.A. Copyright © 2006 Lewin, IL GENE VIII, Zanichelli editore S.p.A. Copyright © 2006 La trascrizione altera la topologia L’RNA polimerasi di E. coli Le RNA polimerasi batteriche hanno cinque tipi di subunità w 1 nucleo enzimatico stabilita’ a2bb’ws Struttura dell’RNA polimerasi batterica e della polimerasi II eucariotica Le RNA polimerasi sono simili L’RNA polimerasi del fago T7 Lewin, IL GENE VIII, Zanichelli editore S.p.A. Copyright © 2006 Inibitori della trascrizione Inibitore Rifamicina Streptolidigina Actinomicina D a -Amanitina Enzima bersaglio oloenzima proc. nucleo enz. proc. pol I eucariotica pol II eucariotica Azione dell'inibitore lega b e inibisce inizio lega b e inibisce allungamento lega il DNA e inibisce allungamento lega la RNA polimerasi II La trascrizione può essere divisa in tre stadi: 1. Inizio 2. Allungamento 3. Terminazione Fasi della trascrizione Inizio della trascrizione Lewin, IL GENE VIII, Zanichelli editore S.p.A. Copyright © 2006 Lewin, IL GENE VIII, Zanichelli editore S.p.A. Copyright © 2006 Allungamento e terminazione Lewin, IL GENE VIII, Zanichelli editore S.p.A. Copyright © 2006 Lewin, IL GENE VIII, Zanichelli editore S.p.A. Copyright © 2006 I promotori procariotici Identificazione della “Pribnow box” presente nella maggiorparte dei promotori di E.coli fd ..TGCTTCTGACTATAATAGACAGGGTAAAGACCTGATTTTTGA T7 A3 AAGTAAACACGGTACGATGTACCACATGAAACGACAGTGAGT T7 A2 AGTAACATGCAGTAAGATACAAATCGCTAGGTAACACTAGCAG Lac-UV-5 l PR l PL GCTTCCGGCTCGTATAATGTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAA Tyr tRNA ..CGTCATTTGATATGATGCGCCCCGCTTCCCGATAAGGGAGCA Lac w.t. GCTTCCGGCTCGTATGTTGTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAA Consenso ACCTCTGGCGGTGATAATGGTTGCATGTACTAAGGAGGTTG... ACCACTGGCGGTGATACTGAGCACATCAGCAGGACGCACTGA T80A95T45A60A50T96 5-9 bp A/G Lewin, IL GENE VIII, Zanichelli editore S.p.A. Copyright © 2006 Un tipico promotore di E.coli è costituito da tre componenti: le sequenze consenso -35 e -10, e il sito d’inizio +1 -35 TTGACA Sequenza -35 16-19 basi -10 TATAAT Pribnow box 5-9 basi Sito di inizio della trascrizione Promotori procariotici
