Controllo della Scrapie Selezione genetica — Un nuovo strumento per l’allevatore Maggio 2005 1 Di che cosa parleremo Scrapie: Storia e distribuzione concetti base della malattia Genetica della Scrapie Come usare la genotipizzazione per la selezione genetica alla resistenza Le vostre domande 2 Storia e Distribuzione della Scrapie Descritta per la prima volta in Inghilterra nel XVIII secolo Diffusa in tutto il mondo, solamente l’Australia e la Nuova Zelanda vengono considerate “Scrapie Free” 3 Concetti Base della malattia Trasmissione e periodo d’incubazione Gli ovini e i caprini che sono suscettibili alla scrapie in genere si infettano da agnelli attrraverso il contatto con placente e liquidi fetali di pecore/capre infette – non necessariamente dalla propria madre In genere il periodo d’incubazione va da 2 a 5 anni Sempre mortale — non esistono cure o vaccini 4 La Scrapie e i montoni… I montoni prendono la scrapie I montoni infetti non sembrano in grado di trasmettere la scrapie La genetica del montone influenza la suscettibilità alla scrapie dei propri figli 5 Capre Ad oggi non sono stati identificati genotipi resistenti nelle capre. Pertanto, tutte le capre devono essere considerate suscettibili. 6 I segni clinici (variabili) sono: Modificazioni del comportamento Iperreattività ai rumori Prurito e grattamento Problemi neurologici Perdita della coordinazione Sbattimento delle labbra (nibble) alterazione dell’andatura (Bunny hopping/walking on eggshells) Perdita di peso Debolezza, incapacità ad alzarsi Morte, talvolta improvvisa 7 Diagnosi Animali morti Cervello (SNC) e tessuti linfatici Animali vivi Tessuti linfatici della terza palpebra (o tonsille) 8 Di che cosa tratteremo La Scrapie: Storia e Distribuzione Concetti base della Malattia Genetica della Scrapie Come si può usare la tipizzazione genetica negli allevamenti infetti e aderenti al piano Le vostre Domande 9 I genotipi che controllano la suscettibilità e la resistenza alla malattia sono LA cosa più importante che un allevatore deve sapere sulla genetica della scrapie! 10 La Genetica della Scrapie Obiettivo di questa presentazione è: Aiutare gli allevatori a capire come usare la genetica per proteggere i loro allevamenti dall’infezione da scrapie. Non vogliamo farvi diventare dei genetisti 11 La Scienza dietro la Genetica della Scrapie ci dice: Alcune pecore si ammalano più facilmente di altre ? ? La Genotipizzazione è usata per identificare i geni che controllano la suscettibilità o la resistenza alla scrapie 12 Cos’è la Genotipizzazione? La Genotipizzazione è un test del DNA Un semplice esame del sangue o di tessuti permette di determinare il genotipo degli ovini il genotipo non cambia mai. Un solo esame basta per tutta la vita. Può essere definito a qualsiasi età 13 Genotipizzazione E’ preferibile usare un sistema di identificazione permanente (microchip o 2 marche) sui capi da esaminare Il prelievo deve essere eseguito sotto il controllo di un veterinario riconosciuto Usare provette con EDTA e farle arrivare al Laboratorio prima possibile Il Genotipo rimane lo stesso per tutta la vita dell’animale 14 Genotipizzazione Una genotipizzazione viene riconosciuta ufficialmente se: il sangue è prelevato da un veterinario AUSL o riconosciuto Il capo è identificato ufficialmente Il campione è inviato al lab accompagnato dall’allegato IV del DM 17/12/2004 Il lab è stato riconosciuto dal Min.Salute 15 Laboratori che effettuano le genotipizzazioni Laboratorio Gruppi sanguigni di Cremona solo per allevamenti iscritti a libro genealogico IZSLER - Sezione di Modena Ovini della Regione Emilia-Romagna 16 Cos’è la Genotipizzazione? (cont.) Può capitare che un ovino già genotipizzato debba essere ricampionato: Problemi di identificazione dell’animale o del campione Campione non idoneo per l’esame (degradato) Errori nell’identificazione dell’animale Verifica sul genotipo effettuata per sorveglianza da parte della A.USL Il test del genotipo misura solo la suscettibilità e non se l’animale ha la scrapie 17 La teoria del prione La scrapie è causata dalla modificazione di una proteina prodotta naturalmente da c tutti gli animali (PrP ) in una proteina sc patologica (PrP ) che produce più copie di sé stessa, accumulandosi nelle cellule nervose e facendole morire (EST). A seconda della genetica dell’animale la c PrP risulta più o meno modificabile dalla sc PrP . 18 Le PrPC che ci interessano In particolare della proteina PrPc, composta da 254 aminoacidi, ci interessano quelli posti nelle posizioni 136, 154 e 171. A ogni aminoacido corrisponde una lettera C V136R154Q171 (VRQ) è la PrP più facilmente modificabile in PrPSC; C A136R154R171, (ARR) è la PrP più resistente alla modificazione in PrPSC. 19 Geni Ovini: Uno da ciascun genitore Ogni genitore dà una copia del gene che codifica la PrPc all’agnello. Il gene è in genere uno di questi tre: ARQ, VRQ, ARR, Quindi, ogni agnello porta due copie del gene. Le combinazioni possibili sono: ARQ/ARQ, ARR/ARQ, ARR/ARR, ARQ/VRQ, ARR/VRQ, VRQ/VRQ. I genotipi rari AHQ, ARH, ARK, ecc. sono considerati equivalenti all’ ARQ. 20 Combinazioni dei genotipi e suscettibilità alla scrapie ARR/ARR — sono resistenti (Classe I) ARR/ARQ— sono semi-resistenti (Classe II) ARQ/ARQ— sono suscettibili (Classe III) ARQ/VRQ— sono molto suscettibili (divieto di impiego come riproduttori) VRQ/VRQ— sono molto suscettibili (divieto di impiego come riproduttori) ARR/VRQ— sono poco suscettibili (divieto di impiego come riproduttori) 21 Classificazione dei riproduttori Classe Riproduttori 1° Classe 2° Classe 3° Classe Divieto d'impiego Genotipi ARR/ARR ARR/ARQ ARR/AHQ ARR/ARH ARQ/ARQ ARQ/AHQ ARQ/ARH ARH/AHQ AHQ/AHQ ARH/ARH VRQ/ARQ VRQ/AHQ VRQ/ARH ARR/VRQ VRQ/VRQ Note Genotipo resistente Genotipo semi-resistente Genotipi sensibili o rari Portatori allele VRQ 22 La ricerca ha dimostrato che: la Scrapie si diffonde alle pecore suscettibili e alle capre attraverso il contatto con la placenta ed i liquidi fetali infetti. ? ? Tutte le placente 171QR di pecore infette 171QQ esaminate sono risultate negative per scrapie, mentre le placente 171QQ di pecore infette 171QQ sono risultate positive. Pertanto, le placente ed i liquidi fetali 171QR di pecore infette non dovrebbero essere in grado di trasmettere la scrapie alle altre pecore suscettibili. 23 L’importanza del genotipo della placenta nella trasmissione della scrapie Gli agnelli hanno una combinazione del DNA della pecora e del montone; una pecora 171QQ (III) accoppiata ad un montone 171RR (I) produrrà un agnello 171QR (II) con fluidi e placenta 171QR (II). una pecora 171QQ (III) accoppiata ad un montone 171QQ (III) produrrà un agnello 171QQ (III) con fluidi e placenta 24 171QQ (III). feto 171QQ + placenta infetta da Scrapie = SCRAPIE 25 feto 171QR + placenta non infetta da Scrapie = STOP SCRAPIE 26 I genotipi che controllano la suscettibilità e la resistenza alla malattia sono LA cosa più importante che un allevatore deve sapere sulla genetica della scrapie! 27 Come l’allevatore può usare la Genotipizzazione per prevenire la Scrapie Selezionando montoni resistenti (171RR / I Classe) o semi-resistenti (171QR / II Classe) Ogni individuo riceve un gene da ciascun genitore. Montoni resistenti produrranno solamente agnelli resistenti (171RR) o semi-resistenti (171QR). Montoni semi-resistenti (171QR) produrranno agnelli resistenti, semi-resistenti o suscettibili a seconda del genotipo della pecora coperta. 28 Come l’allevatore può usare la Genotipizzazione per prevenire la Scrapie (cont.) Selezionando pecore resistenti (171RR / I Classe) o semi-resistenti (171QR / II Classe) Una pecora trasmetterà i suoi caratteri di resistenza/suscettibilità allo stesso modo del montone, ma solamente al suo agnello. La genotipizzazione delle pecore ha un basso costo/efficacia rispetto a quella del montone. In pratica è utile solo per le madri di montoni o quando si vuole accelerare al massimo la selezione (allevamento infetto). 29 Tabella di suscettibilità degli agnelli Montone Pecora I Classe I Classe I Classe II Classe II Classe III Classe x x x x x x x x Pecora Montone I Classe II Classe III Classe II Classe III Classe III Classe dà dà dà dà dà dà dà I Classe 100% 50% 0% 25% 0% 0% Agnello II Classe III Classe 0% 0% 50% 0% 100% 0% 50% 25% 50% 50% 0% 100% 30 Come l’allevatore può usare la Genotipizzazione per prevenire la Scrapie (cont.) La Genotipizzazione deve essere considerata come “uno” strumento non come “unico” strumento di prevenzione Il metodo più efficace per evitare l’introduzione della scrapie è quello di non comprare pecore Se il tuo sistema di allevamento richiede l’acquisto di pecore, compra pecore resistenti (classe I - 171RR) o semiresistenti (classe II - 171QR). 31 Come l’allevatore può usare la Genotipizzazione per prevenire la Scrapie (cont.) Se pensi che il tuo allevamento sia a rischio di scrapie perché negli anni hai comprato pecore da diversi greggi con stato sanitario sconosciuto e in particolare pecore di razze ad alta prevalenza (massesi, bergamasche, langhe) Considera di aderire al piano di selezione genetica per aumentare la resistenza del tuo gregge e inizia a comprare pecore di classe I o II e/o a ridurre il rischio di trasmissione delle pecore con genotipo ignoto usando montoni di classe I. 32 Il Piano regionale di selezione genetica per la resistenza alle EST negli ovini Il piano è obbligatorio per gli allevamenti iscritti ai Libri genealogici e per i greggi ad alto merito genetico. Tutti gli altri allevamenti ovini possono aderire volontariamente. 33 Obiettivi del piano Obiettivo generale del Piano è quello di incrementare la frequenza dei caratteri di resistenza genetica alle TSE nella popolazione ovina al fine di: a) contribuire alla tutela della salute umana ed animale; b) concorrere al controllo delle TSE degli ovini; c) concorrere alla creazione di aziende ovine a “basso rischio” di TSE. 34 Obiettivi del piano Obiettivi specifici del piano sono: a) eliminazione dell’allele VRQ dagli allevamenti aderenti al piano; b) incremento della frequenza dell’allele ARR negli allevamenti aderenti al Piano. c) aumento della disponibilità di montoni con genotipo resistente (ARR/ARR), utili anche per il ripopolamento degli allevamenti infetti; d) progressiva diminuzione della frequenza dell’allele ARQ negli allevamenti aderenti al piano. 35 Come funziona il piano Selezione genetica per linea maschile: tutti i montoni vengono tipizzati. I montoni con genotipo non idoneo (VRQ) vengono macellati con indennizzo. Limitazioni nell’introduzione (solo da allev. aderenti e per i primi 5 anni) e nell’utilizzo nel tempo (per i primi 7 anni) di montoni di classe III. Stesse regole per le pecore genotipizzate. 36 Schema di selezione Classificazione dei riproduttori La selezione avviene per linea maschile; per accelerare la selezione possono essere testate anche le femmine (gruppi di monta). Classe Riproduttori 1° Classe 2° Classe 3° Classe Divieto d'impiego Genotipi ARR/ARR ARR/ARQ ARR/AHQ ARR/ARH ARQ/ARQ ARQ/AHQ ARQ/ARH ARH/AHQ AHQ/AHQ ARH/ARH VRQ/ARQ VRQ/AHQ VRQ/ARH ARR/VRQ VRQ/VRQ Note Genotipo resistente Genotipo semi-resistente Genotipi sensibili o rari Portatori allele VRQ 37 Come funziona il piano (cont.) Tutti i riproduttori del gregge devono essere identificati in modo permanente (microchip); Tutti gli allevatori devono usufruire della consulenza di un veterinario riconosciuto 38 Schema di selezione Utilizzo dei riproduttori La Regione, su parere della Commissione, definisce se una razza ha frequenza di ARR superiore al 40%. Classe Riproduttori 1° Classe 2° Classe 3° Classe Divieto d'impiego Ignota Rimonta interna Rimonta esterna o fecondazione artificiale Da allevamenti con da allevamenti senza qualifica qualifica Autorizzato Autorizzato Autorizzato Autorizzato Autorizzato Autorizzato Autorizzato Autorizzato Vietato Vietato Vietato Vietato Vietato Vietato Vietato Montoni di III classe: introdotti solo nei primi 5 anni del piano utilizzabili solo nei primi 7 anni del piano 39 Compiti dell’allevatore Allevare e gestire i gruppi di monta Identificare (ID permanente) tutti i riproduttori ovini e caprini di età >6 mesi Segnalare alla AUSL i capi con sintomi sospetti e i morti Segnalare alla AUSL le introduzioni Introdurre ed utilizzare solamente montoni di genotipi ammessi dal piano 40 Compiti dell’allevatore Macellare i riproduttori dichiarati non idonei (indennizzo) Pulizia, disinfezione e raccolta delle placente Mantenere aggiornato il registro di stalla Aiutare il Servizio Veterinario A.USL nelle operazioni di verifica del piano Eseguire test del DNA aggiuntivi 41 Compiti della AUSL Identificare gli allevamenti aderenti al piano, raccogliere le domande. Effettuare i prelievi per la tipizzazione genetica dei montoni (veterinario riconosciuto). Assegnare le qualifiche sanitarie agli allevamenti aderenti al piano. Eseguire ispezioni semestrali per la verifica dell’ andamento del piano. Controlli a campione annuali. Predisporre le pratiche per l’indennizzo dei riproduttori non idonei macellati 42 Schema di selezione Qualifica degli allevamenti La AUSL sulla base della situazione genetica rilevata e sugli esiti delle ispezioni periodiche assegna una qualifica “di resistenza” all’allevamento. Livello resistenza Qualifica nazionale Criteri Dec.2003/100/CE Tutti i capi ARR/ARR Livello I Livello I Livello II Livello II Livello III Livello IV Livello V Livello II Tutti i montoni ARR/ARR e i restanti capi ARR/*** Tutti i montoni ARR/ARR Non previsto Tutti i montoni ARR/*** Non previsto Greggi aderenti al piano 43 Costi del piano Il SSN copre le spese relative alle analisi genetiche effettuate nelle aziende aderenti al piano. Il SSN indennizza (L.218/1988) i riproduttori (portatori dell’allele VRQ) delle aziende aderenti al piano macellati ai sensi del piano nazionale (DM 17/12/04). 44 Punti critici La formazione e l’informazione di allevatori e veterinari; La motivazione e la collaborazione degli allevatori; L’identificazione degli animali; Il ruolo del veterinario aziendale. 45 Conclusioni Alla tipizzazione genetica non consegue una diagnosi di scrapie; Il successo del piano deriverà dal numero di adesioni da parte di allevatori motivati; Risultati apprezzabili in tempi mediolunghi (5-7 anni). 46 Di che cosa abbiamo parlato la Scrapie: Storia e diffusione Concetti base sulla malattia Genetica della Scrapie Come usare la genotipizzazione per la selezione genetica verso la resistenza alle EST Di cosa parleremo ora: Le vostre domande più frequenti 56 Cosa succede se la scrapie viene diagnosticata nel mio gregge? - 1 In caso di diagnosi di scrapie su capi con sintomi sospetti, morti in stalla o macellati viene applicato il Regolamento CE 999/2001, come modificato dal Reg.CE 1492/2004, e dal DM 08/04/1999. Essi prevedono: sequestro dell’azienda e blocco delle movimentazioni; sequestro e distruzione del latte prodotto (con indennizzo) fino al completamento delle 48 Cosa succede se la scrapie viene diagnosticata nel mio gregge? - 2 poi: Abbattimento e distruzione (con indennizzo) di tutti i caprini presenti in azienda; genotipizzazione di tutti gli ovini presenti in azienda; abbattimento e distruzione (con indennizzo) di tutti i montoni, esclusi quelli di Classe I; abbattimento e distruzione (con indennizzo) di tutte le pecore, escluse quelle di classe I e II; 49 Cosa succede se la scrapie viene diagnosticata nel mio gregge? - 3 Dopo l’abbattimento, il ripopolamento potrà avvenire: solo con montoni di Classe I; solo con pecore di Classe I o di Classe II; le pecore di Classe II potranno lasciare l’azienda solo con destinazione macello; indagini per le EST a campione su animali macellati e test di tutti i morti in azienda; Restrizioni mantenute per tre anni. 50 Cosa succede se la scrapie viene diagnosticata nel mio gregge? Negli allevamenti aderenti al piano, soprattutto in quelli che hanno da tempo eliminato i montoni di Classe III gli abbattimenti in caso di scrapie riguarderanno una percentuale di animali decisamente inferiore a quella che dovrebbe essere abbattuta in un allevamento non aderente. In un allevamento di Livello I o II non verrebbe abbattuto neanche un ovino (solamente gli eventuali caprini presenti). 51 Riassumendo Domanda: Abbiamo capito che la scrapie è una malattia del sistema nervoso sempre mortale e che la probabilità di ammalarsi è controllata dalla genetica, ma vengono denunciati solamente poche decine di casi all’anno in Italia, perché tanta enfasi sulla sua eradicazione? 52 Riassumendo Risposta: La Scrapie costa diversi milioni di Euro agli allevatori a causa di mancate vendite, degli aumentati costi e mortalità legata alla malattia. La Scrapie è una Encefalopatia Spongiforme Trasmissibile (EST). I consumatori si aspettano l’eradicazione di tutte le TSE. Molti casi di scrapie non vengono diagnosticati. E’ provato che un piano di selezione genetica è un modo efficace per controllare questa malattia. 53 Riassumendo Domanda: Qual è la cosa più importante che dobbiamo conoscere sulla genetica della scrapie? Risposta: La suscettibilità dei diversi genotipi: ARR/ARR (Classe I) — sono resistenti ARR/ARQ (Classe II) — sono semi-resistenti ARQ/ARQ (Classe III) — sono molto suscettibili [ARQ=AHQ=ARH=ARK] I portatori di VRQ — sono talmente suscettibili che ne è vietato l’impiego come riproduttori 54 Riassumendo Domanda: Se il mio gregge è a rischio di scrapie perché ho comprato delle pecore, che cosa dovrei fare? Risposta: Se si considera il proprio gregge a rischio, diventa opportuno l’impiego di montoni di Classe I per aumentare la percentuale di agnelli geneticamente più resistenti alla scrapie. 55 Riassumendo Domanda: Se le mie pecore non hanno la scrapie devo comunque pensare di aderire al piano di selezione genetica? Risposta: Sì, soprattuto se: il tuo gregge è a rischio di scrapie perché: allevi una razza nella quale la scrapie si manifesta e hai comprato pecore da allevamenti con stato sanitario sconosciuto; Hai comprato pecore da un allevamento infetto; Hai osservato in passato segni clinici di scrapie nel tuo allevamento; • Gli altri allevatori richiedono riproduttori di genotipi resistenti alla scrapie. 62 Riassumendo Domanda: Se non ho la scrapie in allevamento, devo comunque aderire al piano di selezione genetica per la resistenza alla scrapie? Risposta: Sì, se sei iscritto a libro genealogico. No, se non sei iscritto a libro e non ti interessa vendere riproduttori ad altri allevamenti. Oppure i vantaggi legati alla selezione per altri tratti genetici superano quelli legati alla resistenza alla scrapie. Ad ogni modo prendi in considerazione di applicare tutte le pratiche per prevenire l’introduzione della scrapie nel tuo allevamento attraverso l’acquisto di riproduttori di classe I o classe II. 63 ????—Altre domande--???? For maggiori informazioni visita questi siti web: http://www.bs.izs.it/cerev/ http://www.izsto.it/ceaindice.htm 58 Produced by the National Scrapie Education Initiative. Fine Tradotto a cura della Commissione regionale dell’Emilia-Romagna. 59