Spettrofotometria
Il monocromatore
Spettrofotometro
ottica
Sorgente
di luce
fenditura
Prisma o
reticolo
Lungo il cammino ottico all’interno
del campione i fotoni vengono assorbiti
e l’intensità della luce cala in maniera
esponenziale con la lunghezza del
cammino ottico
Trasmittanza, T%,
Percentuale di luce, fotoni, che
raggiunge il rivelatore rispetto al
raggio non assorbito
lettura
Campione da
misurare
Rivelatore
fotometrico
[I]
[I0]
X, distanza percorsa all’interno del campione
Schema ottico di uno spettrofotometro
L’ASSORBANZA
Io
T% o
Abs log log
I
T%
T% o
100%
Abs log
log
1
T%
10%
T% o
100%
Abs log
log
2
T%
1%
T% o
100%
Abs log
log
3
T%
0,1%
La legge di Lambert-Beer stabilisce che la concentrazione di una
soluzione, contenente una sostanza capace di assorbire energia radiante,
risulta direttamente proporzionale all'Assorbanza della soluzione stessa ed
inversamente proporzionale al logaritmo della Trasmittanza percentuale.
Abs = e l c
e : coefficiente di estinzione
l : cammino ottico nella soluzione (1 cm)
c : concentrazione della sostanza
Abs
T%
Concentrazione della sostanza
Concentrazione della sostanza
Schema ottico di uno spettrofotometro
Spettro di assorbimento della fenolftaleina 10mg/l
In condizioni acide (------) e basiche (------)
e550nm1% = 1350
Assorbanza, Absu
1,2
0,9
0,6
0,3
0
350
430
510
590
Lunghezza d’onda, nm
670
750
