SPERIMENTAZIONE ANIMALE: LA FORMAZIONE DEGLI
OPERATORI PER IL BENESSERE DEGLI ANIMALI
Bologna, 14 Aprile 2011
Stabulazione, mantenimento, manipolazione e
contenzione degli animali da laboratorio
(piccoli roditori)
Luca Lorenzini
MVD, PhD
Dipartimento Scienze Mediche Veterinarie
Università di Bologna
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Introduzione
Stabulazione
Mantenimento
Manipolazione
Contenzione
Introduzione
1. Conoscenza della legge in
materia
2. Adeguata formazione di tutti gli
operatori
3. Conoscenza dell'animale
4. Controlli e Programmazione
Stabulazione
Introduzione
Mantenimento
Manipolazione
Introduzione
Contenzione
STANDARDIZZAZIONE
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•
•
1.
Intrinseca del soggetto (selezione e mantenimento)
2.
Delle procedure sperimentali (interventi diretti ed indiretti)
3.
Delle fonti di variabilità ambientale
Microambiente
– Temperatura, Umidità
– Gabbia-Lettiera
Macroambiente
– Luminosità
– Rumori
– Ventilazione
Stato sanitario
Alimentazione
Esigenze sociali specifiche di
specie
NON BENESSERE
(DISTRESS)
ALTERAZIONI COMPORTAMENTALI
RISULTATI SPERIMENTALI
ALTERAZIONI FUNZIONALI DEL S.N.A.
MODIFICHE DEL SISTEMA NEUROENDOCRINO
ALTERAZIONI DELLA RISPOSTA IMMUNITARIA
NON
AFFIDABILI e RIPRODUCIBILI
Introduzione
Stabulazione
Mantenimento
Manipolazione
Contenzione
Stabulazione
Tipi di stabulari
1. Convenzionali
2. Spf
3. Germ free
STABULARI A RISCHIO
Stabulari convenzionali con frequenti ingressi di personale
tecnico e ricercatori
In questo caso è l'uomo ad essere un potenziale pericolo:
calzari
camice
guanti
cuffia
maschera
Introduzione
Stabulazione
Mantenimento
Manipolazione
Contenzione
Stabulazione
CONDIZIONI AMBIENTALI
• RATTO
– Temperatura : 2024°°C
– Umidità relativa (%) :
50-60
– Ventilazione
(ricambi/h): 10-15
– Luce/Buio (h) : 12/1214/10
• TOPO
– Temperatura : 2225°°C
– Umidità relativa (%):
50-60
– Ventilazione
(ricambi/h): 15
– Luce/Buio (h) : 14/10
Introduzione
Stabulazione
Mantenimento
Manipolazione
Contenzione
Aumento di Temperatura ed Umidità
– Riduzione consumo di cibo
– Aumento consumo di acqua
– Aborto
– Calo frequenza accoppiamenti
– Aumento della suscettibilità alle infezioni veicolate dall'aria
Il microclima all'interno della gabbia è influenzato da:
– Tipo di gabbia
– Posizione della gabbia nel rack e nella stanza
– Sistema di ventilazione
– Sovraffollamento della gabbia
– Frequenza di pulizia delle gabbie
Stabulazione
Introduzione
Stabulazione
Mantenimento
Manipolazione
Contenzione
Stabulazione
CICLO giorno/notte
(12h/12h oppure 14h/10h)
Fondamentale per evitare alterazioni comportamentali ma anche in
moltissimi e fondamentali processi fisiologici (es/ Riproduzione!!!)
RUMORE
Topi e ratti sono disturbati da ultrasuoni (sup a 20 kHz) (attrezzature di
lavaggio)
Decibel : misura del livello di pressione sonora 10dB, 50dB (42dB per
ratti e topi)
140dB segnano la soglia del dolore
Radio e/o musica
Problemi riproduttivi
Introduzione
Stabulazione
Mantenimento
VENTILAZIONE
Adeguata a rimuovere eccessi di
calore (dagli animali e da eventuali
macchinari)
Adeguata a rimuovere eventuali
forme di inquinamento biologico e
chimico
Standard: 10-15 ricambi ogni ora
Livelli più bassi: per numero
piccolo di animali per stanza
Aria in ingresso deve provenire
dall’esterno
Non deve essere riciclata
Pressione positiva e/o negativa a
seconda delle necessità
sperimentali
Pulizia mensile dei filtri
Manipolazione
Contenzione
Stabulazione
Introduzione
Stabulazione
Mantenimento
Manipolazione
Contenzione
Stabulazione
Tipo di gabbia
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•
Materiale non-poroso, non-opaco, facilmente lavabile e
sterilizzabile in autoclave, con angoli smussati
Coperchio in metallo per alloggiare cibo ed acque
Coperchio superiore in plastica con/senza filtro per aria
Arricchimenti
-Carta
-NIDO
-Giochi
Tipo di segatura
Lettiere: segature o trucioli di
legno essiccato, e deresinato,
tutolo di mais macinato, carta.
-Da isolamento termico
-Assorbe le urine
-Aumenta la riproduttività
-Riduce gli odori
-Deve essere con ridotte
polveri (acari)
Introduzione
Stabulazione
Mantenimento
Manipolazione
• I ratti sono coprofagi
• Si nutrono ad libitum
• Pellet
Compressione abbassa carica batterica
Durezza lima i denti
Obbligo a mangiare tutto
Pellet con 20-27% proteine
• Livelli maggiori di proteine riducono
l’efficacia riproduttiva
• Ratti: 5 g per 100 gr di peso corporeo
al giorno
• Topo: 3-5 gr al giorno
Contenzione
Stabulazione
Introduzione
Stabulazione
Mantenimento
Manipolazione
Contenzione
Stabulazione
I ratti BEVONO 10ml per
100 gr di peso corporeo
al giorno
I topi 6-7 ml al giorno
Introduzione
Stabulazione
Mantenimento
Manipolazione
Contenzione
Valutazione benessere
A breve termine
A lungo termine
• Clinica
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– Stato pelle, pelo
– Tono muscolare
• Comportamento
– Aggressività
– Apatia
– Comport. specie-specifici
• Dati fisiologici
– Battito cardiaco
– Valori ematici
– temperatura
Riduzione riproduttività
Durata vita
Cambiamento peso
Pressione arteriosa
Sistema immunitario
Stereotipie
comportamentali
Introduzione
Stabulazione
Mantenimento
Manipolazione
Contenzione
RATTO:
SEGNI DI SOFFERENZA
PELO ARRUFFATO
PILOEREZIONE
DIMAGRAMENTO
ATROFIA MUSCOLARE
OCCHI INFOSSATI
SECREZIONE OCULO NASALE ROSSASTRA
AREA PERIANALE IMBRATTATA
DECUBITO PROLUNGATO
TACHIPNEA
ASSENZA DI COMPORTAMENTO ESPLORATIVO
TOPO:
ISOLAMENTO DAL GRUPPO
PELO OPACO E ARRUFFATO
OCCHI INFOSSATI
POSTURA CIFOTICA
TACHIPNEA
ESTREMITA’ (ARTI E CODA) PALLIDE O CIANOTICHE
ELEVATA MORTALITA’ NEONATALE
COMPORTAMENTI STEREOTIPATI
Introduzione
Stabulazione
Mantenimento
Manipolazione
Contenzione
Stereotipie:
Comportamenti relativamente invariati e ripetitivi
apparentemente privi di funzione
nel contesto i cui vengono espressi
Ringtail: formazioni circolari arrossate attorno alla coda
( Difficile termoregolazione)
Barbering: Rasatura del pelo senza lesioni della cute
(Noia, sovrafollamento, stress)
Introduzione
Stabulazione
Mantenimento
Manipolazione
Contenzione
Sessaggio
• ACCOPPIAMENTO E GRAVIDANZA
• La maggioranza delle femmine sono fertili entro la 6-8 settimana
– Separazione maschi/femmine della cucciolata entro la 5-6 settimana
• Metodi di accoppiamento:
– Monogamia
– Sistema Harem (2-3 femmine per maschio)
• L’accoppiamento avviene di notte
• La mattina è possibile identificare un plug che indica l’avvenuta
copulazioneper studi di sviluppo embrionale
• La gestazione dura 18-22 giorni con differenze tra i ceppi
Introduzione
Stabulazione
Mantenimento
Manipolazione
Contenzione
Sessaggio
• PERIODO POST-NATALE
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I topi nascono con orecchie ed occhi chiusi
I peli appaiono a 2d
Le orecchie si aprono a 3-5d
Gli occhi si aprono a 14d
Il topo mangia cibo solido a 16d ma viene allattato fino a 21d
Il sesso può essere determinato dagli 8-10 giorni mediante
osservazione della distanza uro-genitale
• Il topo può essere separato dalla madre dai 18d in poi
(solitamente a 28d)
Introduzione
Stabulazione
Mantenimento
SESSAGGIO
Manipolazione
Contenzione
Sessaggio
Introduzione
Stabulazione
-Microchip
Mantenimento
Manipolazione
Contenzione
Etichettatura
-Tagli alle orecchie/punching
-Tattoo
-Ear tag
-Amputazione delle falangi
Introduzione
Stabulazione
Mantenimento
Manipolazione
Contenzione
1.Come tirare fuori i topi dalle loro gabbie:
I topi prima mordono, poi guardano !
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Per rimuovere un topo dalla sua gabbia, afferralo alla base della
coda.
Tiralo fuori dalla gabbia e appoggialo sulla grata o su di una
superficie solida.
Non afferrare il topo dalla punta della coda, la cute si potrebbe
lesionare.
Non spostare un topo da un posto ad un altro tenendolo per la
coda: questo sistema serve solo per posizionarlo su di una
superficie solida, non per trasportarlo.
Maneggiare un topo al di fuori della stanza di stabulazione lo
rende più socievole e risulterà più facile lavorarci in laboratorio.
2.Come tirare fuori i ratti dalle loro gabbie:
I ratti prima guardano poi mordono...
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Passare qualche minuto a fraternizzare con lui renderà il tuo
ratto meno sospettoso e più predisposto alla cooperazione.
Per tirare fuori un ratto dalla sua gabbia passa la mano
attorno alla parte centrale del suo corpo e sollevalo.
Introduzione
Stabulazione
Mantenimento
Manipolazione
3. Metodi standard di contenzione
Tecnica standard di contenzione
Posiziona il tuo roditore sul coperchio della gabbia e
afferra la cosa con la mano “destra”.
Tira lentamente la coda permettendo all’animale di
aggrapparsi alle barre del coperchio.
Afferra in modo deciso la cute dietro il collo e tra le
orecchie con la mano “sinistra”
E’ importante avere una presa ferma per evitare che il
roditore possa girarsi e morderti.
Fare attenzione a NON esercitare una pressione troppo
forte sul coperchio o a NON “tirare” troppo la cute per
non causare difficoltà respiratorie all’animale
Contenzione
SEQUENZA DEI DIVERSI PASSAGGI
DA EFFETTUARE PER UNA CORRETTA
PRENSIONE DEL TOPO
[email protected]
Introduzione
Stabulazione
Mantenimento
Manipolazione
Contenzione
Metodo della contenzione ad “Hot Dog”
Usa la mano “sinistra”per afferrare il ratto nella parte alta del
corpo col pollice e l’indice.
Spingi il pollice sotto il mento per stabilizzare la testa.
NON applicare una pressione eccessiva nell’area del collo.
Introduzione
Stabulazione
Mantenimento
Manipolazione
Contenzione
3. Dispositivi per la contenzione
Esistono diversi dispositivi di
contenzione per i roditori, inclusi
scatole di plexiglas e coni di plastica
soffice.
Questi ultimi sono particolarmente utili
quando si lavora da soli e non c’è
nessuno che possa aiutarti nella
contenzione degli animali.
Introduzione
Stabulazione
Mantenimento
Manipolazione
3. Dispositivi per la contenzione
Contenzione
PRELIEVI EMATICI DA ANIMALE VIGILE
Prelievi ematici
Primo metodoVIGILI
SOMMINISTRAZIONI IN ANIMALI
Iniezione intramuscolo
Primo metodo
Secondo metodo
Iniettare lentamente
SOMMINISTRAZIONI IN ANIMALI VIGILI
Somministrazione sottocutanea
Prendere il topo/ratto per la collotta
Usare il pollice e l’indice per sollevare la cute del collo
TOPO
Pulire con alcool (etanolo 70%)
Inserire l’ago quasi orizzontale alla base della cute sollevata
Rivolto verso il dorso dell’animale
E’ possibile sentire l’ago tra le dita
Aspirare per valutare la presenza di sangue
Iniettare lentamente
RATTO
Volume massimo per un topo di 20-25g: 0.5-1.0
ml
Volume massimo per un rtto di 250g: 1.0-5.0 ml
SOMMINISTRAZIONI IN ANIMALI VIGILI
Gavage
PROCEDURA:
Inserire l’ago bottonuto nella bocca dell’animale alla sinistra
dei denti incisivi
Spingere gentilmente l’ago seguendo il palato fino ad
oltrepassare la lingua
Distendere il collo dell’animale tirando in dietro la testa
Se l’operazione è eseguita correttamente, l’ago scivola
nell’esofago per gravità
NON FORZARE l’introduzione dell’ago.
Se si incontra della resistenza, ripetere l’operazione
Iniettare lentamente
Introduzione
Stabulazione
Mantenimento
Manipolazione
Contenzione
Norme generali per il maneggiamento dei roditori da
laboratorio
- Corretta manipolazione = buona riuscita esperimento
- Evitare paure ed incertezze
- Valutare lo stato di salute dell’animale
-Evitare rumori improvvisi
-Usare sempre guanti
In caso di difficoltà:
La tecnica migliore è sempre quella che meglio conoscete!
Grazie per l’
l’attenzione!
SPERIMENTAZIONE ANIMALE: LA FORMAZIONE DEGLI
OPERATORI PER IL BENESSERE DEGLI ANIMALI
Bologna, 14 Aprile 2011
Stabulazione, mantenimento, manipolazione e
contenzione degli animali da laboratorio
(piccoli roditori)
Luca Lorenzini
MVD, PhD
Dipartimento Scienze Mediche Veterinarie
Università di Bologna
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CORRETTE MODALITA’ DI CONTEZIONE DELLA CAVIA
[email protected]
CAVIA
SEGNI DI SOFFERENZA
SCIALORREA/SANGUINAMENTO SPONTANEO (SCORBUTO)
INAPPETENZA
DIMAGRAMENTO
TACHIPNEA
VOCALIZZAZIONI CONTINUE
AGITAZIONE
AGGRESSIVITA’ VERSO I COSPECIFICI
AGGRESSIVITA’ VERSO L’UOMO
[email protected]
