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DMK02-20 V02 Juillet 2008 JAK2 V617F MutaScreenTM Kit PROFILING LEUKEMIA Rilevazione della mutazione JAK2 V617F su DNA genomico isolato da sangue periferico di pazienti. JAK2 e Neoplasie Mieloproliferative I disordini mieloproliferativi (MPD) ora chiamati Neoplasie Mieloproliferative (MPN), secondo la classificazione WHO revisionata nel 2008 [2] comprendono un ampio spettro di malattie ematologiche maligne che alterano le cellule staminali ematopoietiche multipotenti. Policitemia Vera (PV), Trombocitemia Essenziale (ET) e Mielofibrosi Idiopatica (IMF) sono malattie caratterizzate da produzione cronica e iperattiva di cellule del sangue causata dalla ipersensibilità alle citochine. I disordini mieloproliferativi possono portare a trombosi o emorragie e possono evolvere in leucemia mieloide acuta. Nel 2005 è stata identificata una mutazione della Janus Tyrosin Chinasi 2 (JAK2 V617F) dal gruppo INSERM del Dr. Vainchenker presso l’Institut Gustave Roussy di Parigi [1]. Questa mutazione è stata rilevata in una grande percentuale di pazienti con PV, ET e meno frequentemente in pazienti con IMF. Questa mutazione acquisita riguarda il dominio pseudochinasi di JAK2 nelle cellule ematopoietiche ed è responsabile dell’attivazione costitutiva di vie metaboliche che portano alla proliferazione incontrollata delle cellule nei MPN. Questa scoperta costituisce un passo in avanti nella comprensione dello sviluppo dei MPN a livello molecolare e contribuisce alla formazione di un nuovo strumento molecolare di classificazione dei MPN e di miglioramento allo screening diagnostico2. Inoltre questo nuovo specifico marcatore molecolare potrebbe condurre allo sviluppo di nuove terapie mirate per pazienti con MPN negativi per BCR-ABL. Per quanto riguarda i pazienti sospetti di PV, l’individuazione della mutazione di JAK2 in quasi tutti i pazienti con PV, rende la misurazione della massa delle cellule rosse inutile ai fini dell’individuazione delle PV dalle policitemie secondarie o apparenti. Lo screening della mutazione V617F di JAK2 nel sangue periferico è perciò preferito come primo test per la valutazione di un paziente sospetto di PV3. Poichè la mutazione JAK2V617F si riscontra in circa il 50% dei pazienti sia con ET che con IMF, il pannello WHO propone in una recente pubblicazione2 di includere lo screening della mutazione nello schema diagnostico dei MPN e considera la presenza di JAK2V617F uno dei maggiori criteri per la diagnosi di MPN3. Saggio per la Rilevazione della Mutazione Accurato e Sensibile La tecnologia MutaScreenTM si basa su un’amplificazione in PCR a partire da DNA genomico con analisi specifica e sensibile della mutazione JAK2 V617F. Dopo l’estrazione del DNA da sangue periferico, il frammento che contiene al suo interno il sito della mutazione viene amplificato in Real Time PCR utilizzando una miscela di primer e probe specifici e ottimizzati. La rilevazione precisa e riproducibile della mutazione è possibile mediante un’unica reazione per campione, con una sola miscela di primer e probe. Il saggio JAK2 MutaScreenTM è significativamente migliore rispetto al sequenziamento, in termini di sensibilità, semplicità d’uso e tempo necessario per il completamento del test. Sono prodotti intesi per uso diagnostico in vitro. Identificazione del sito mutazionale di JAK2. Vantaggi Clinici • Diagnosi semplice di MPN • Criterio diagnostico maggiore per la diagnosi MPN in accordo con la classificazione WHO 2008 • Kit pronti all’uso marchiati CE per utilizzo IVD • Tecnologia standardizzata validata da studi internazionali Vantaggi di laboratorio • Kit completo di enzimi e controlli per l’analisi in Real Time PCR (504MSPP01EZCE) • Rilevazione sensibile e altamente specifica della mutazione V617F di JAK2 • Utilizzo di DNA genomico da campione di sangue periferico • Test rapido in un’unica reazione, meno di 3 ore di tempo di lavoro • Cut-off di positività (campione cut-off = 2% di allele mutato) • Compatibilità multipiattaforma • Stima del carico mutazionale dell’allele JAK2V617F con il kit 504MSPP03 • Sito di produzione e reagenti conformi all’ISO13485:2003 Ciascun MutaScreen™ Kit contiene: • 1 provetta con la miscela di primer e probe specifici per la rilevazione degli alleli di JAK2 sia mutato sia wild type • 1 provetta di DNA genomico JAK2 mutato come controllo positivo (100% dell’allele JAK2 V617F) • 1 provetta di DNA genomico JAK2 wild type come controllo negativo (0% dell’allele JAK2 V617F) • 1 provetta di campione di riferimento usato come soglia per la discriminazione tra campione negativo e a bassa positività ( 2% JAK2V617F). • il kit 504MSPP03CE contiene una serie di diluizioni di DNA genomico da utilizzare come scala di riferimento che forniscono una soluzione ideale per una rilevazione semiquantitativa della % di JAK2V617F (5%, 12,5%, 31%, 50%, 78% JAK2V617F) • il kit 504MSPP01EZCE contiene la master mix con Taq polimerasi per real time PCR Informazioni per gli ordini: Descrizione Bibliografia 1. James C. et al. A unique clonal JAK2 mutation leading to constitutive signalling causes Polycythaemia Vera. Nature (2005) 434: 1144-1148. 2. Tefferi A. et al. Classification and diagnosis of myeloproliferative neoplasms: The 2008 World Health Organization criteria and point-ofcare diagnostic algorithms. Leukemia (2008) 22: 14-22. 3. Patnaik MM. et al.The complete evaluation of erythrocytosis: congenital and acquired. Leukemia (2009) 1-11. Numero di campioni testati in duplicato Numero d’ordine JAK2MutaScreen™ EZ Kit 24* ° 504MSPP01EZCE JAK2MutaScreen™ Kit 24* 504MSPP01CE JAK2MutaScreen™ Mini Kit 6* 504MSPP02CE JAK2MutaScreen™ Kit + Reference Scale 14-20* 504MSPP03CE * dipende dello strumento di Real Time PCR utilizzato ° comprensivo di master mix con Taq polimerasi per real time PCR Ipsogen MutaScreen Kit è un marchio registrato Ipsogen. I nostri prodotti e le nostre tecnologie sono coperti da brevetti. Per maggiori informazioni visitate il sito : www.ipsogen.com/leukemia-products/healthcare-professionnals/product-portfolio/ IPSOGEN SA, MARSEILLE, FRANCE Tel: +33 (0)4 91 29 30 90 -Fax:+33 (0)4 91 29 30 99 - e-mail: [email protected] Prodotti distribuiti in esclusiva da Instrumentation Laboratory SpA - Viale Monza 338 - 20128 Milano, Italy - Informazioni: Tel. 02/2522344-264 - e-mail: [email protected] - Ordini: Tel. 02/2522804 - Fax 02/2522809 www.il-italia.it p/n 98087-48 Rev. 2 - 08/10 - © Copyright 2009 Ipsogen Perchè scegliere MutaScreen™ kit?
