COME E’ ORGANIZZATA UNA CELLULA? CITOPLASMA Citoplasma è tutta la regione compresa tra l’Involucro Nucleare e la Membrana Plasmatica Comprende gli organelli cellulari CITOSOL Citosol è la sostanza semifluida che si trova nel citoplasma Proteine, RNA, carboidrati, acidi grassi, altri composti organici, sali minerali e acqua. NON comprende gli organelli cellulari Nel Citosol • Avvengono la maggior parte delle reazioni metaboliche: Sintesi di zuccheri, aminoacidi e acidi grassi; glicolisi, sintesi e degradazione delle proteine. • È presente il Citoscheletro • Vi sono inclusioni prive di membrana: gocce lipidiche, depositi di glicogeno, granuli e pigmenti. RE, Golgi e Lisosomi Reticolo Endoplasmatico Labirinto di tubuli ramificati e cisterne appiattite Più di metà delle membrane della cellula Reticolo endoplasmatico Due categorie morfologiche e strutturali: • Reticolo endoplasmatico rugoso • Reticolo endoplasmatico liscio Morfologia del Reticolo Endoplasmatico Rugoso (RER) • • • • Cisterne appiattite ed impilate Particelle sulla superficie (ribosomi) Localizzazione perinucleare In continuità fisica con l’involucro nucleare Morfologia del RER (TEM) Funzione del Reticolo Endoplasmatico Rugoso (RER) Sintesi delle proteine che devono essere secrete o entrare in membrana plasmatica e varie membrane intracellulari (ER, Golgi e Lisosomi) 3 EVENTI : a) Traduzione degli RNA messaggeri in proteine b) Le proteine prodotte subiscono modificazioni post-traduzionali c) Le proteine vengono racchiuse in vescicole per lo smistamento Reticolo Endoplasmatico Rugoso Ribosomi Sintesi Proteine • 2 sub-unità Ribosomi – Maggiore e minore – Proteine e rRNA • Ribosomi liberi – Sintetizzano le proteine che rimangono nella cellula (Proteine citoplasmatiche o nucleari) • Associati col RER – Sintetizzano le proteine che devono essere secrete o inserite in membrana Struttura dei Ribosomi RNA ribosomiale (rRNA) Proteine ribosomiali Struttura dei Ribosomi Un complesso fatto da RNA e Proteine Genesi dei Ribosomi Si assemblano nel nucleolo Lavorano nel citoplasma Sintesi proteica Principali attori: • mRNA • tRNA • Ribosomi Sintesi proteica Tradurre un mRNA in una proteina 1 AUG AGG ACA ACU UAC AAG GAC CUG……… 1 -M---R---T---T---Y---K---D---L………… Codice Genetico Caratteristiche del mRNA Un cappuccio 5‘: consiste in un residuo terminale di 7-metilguanosina legato tramite un legame 5'-5'trifosfato al primo nucleotide del mRNA. La sua presenza è importante per il riconoscimento da parte del ribosoma e la protezione dalle RNasi. Sintesi proteica: inizio Protagonisti: • Subunità dei Ribosomi • mRNA • Fattori di inizio della traduzione: eIF • PABP Sintesi proteica Protagonisti: • Ribosomi • mRNA • tRNA • Fattori di allungamento: EF-Tu, EF-G… • Fattori di rilascio • GTP Legame dei primi due tRNA-AA al ribosoma Formazione del legame peptidico Formazione del legame peptidico Traslocazione del ribosoma sul mRNA Rilascio del tRNA scarico e reinizio Poliribosomi o Polisomi rersiae“liberi” ribosomi liberi I ribosomi si trovano nel citosol che aderenti alle membrane del reticolo a seconda del destino delle proteine prodotte. Come una proteina raggiunge la sua destinazione finale? Via co-traduzionale Via post-traduzionale Il destino è indicato da una parte della sequenza della proteina: PEPTIDE SEGNALE Via co-traduzionale Traduzione e Traslocazione avvengono contemporaneamente DESTINO DELLE PROTEINE PRODOTTE TRAMITE LA VIA COTRADUZIONALE • Proteine rilasciate esternamente alla cellula • Proteine della membrana plasmatica • Proteine residenti nel ER, golgi, lisosomi interne all’organello o nella loro membrana COME SI PRODUCE UNA PROTEINA INTERNA ALL’ORGANELLO TRAMITE LA VIA COTRADUZIONALE? Protagonisti: • Peptide segnale (che al termine viene rimosso) • SRP: proteina che riconosce il peptide segnale • Recettori di SRP • Traslocone • Chaperoni • ATP COME SI PRODUCE UNA PROTEINA DI MEMBRANA TRAMITE LA VIA COTRADUZIONALE? Sintesi e localizzazione di proteine di membrana tipo I: Estremità amino-terminale interna all’organello (peptide segnale iniziale + sequenza idrofobica interna) Sintesi e localizzazione di proteine di membrana tipo II: Estremità amino-terminale esterna all’organello (un solo peptide segnale interno contente una sequenza idrofobica) Sintesi e localizzazione di proteine di membrana legate al GPI Ancora GPI: glicosilfosfatidilinositolo Eventi che avvengono contemporaneamente o successivamente alla sintesi delle proteine - Formazione del corretto ripiegamento tridimensionale - Assemblaggio in proteine multimeriche - Modificazioni post-traduzionali: • Formazione di ponti disolfuro • N-glicosilazione Modificazioni post-traduzionali di proteine prodotte nel RE: Protagonisti: N-glicosilazione • Tre tipi di zuccheri: NAG, Mannosio e Glucosio • Asparagina (N-X-S/T) • Dolicolo (lipide) • Glicosil-trasferasi • Chaperoni: controllano la conformazione e danno l’OK per la rimozione dei glucosi e di un mannosio …continua nell’apparato di Golgi rersiae“liberi” ribosomi liberi I ribosomi si trovano nel citosol che aderenti alle membrane del reticolo a seconda del destino delle proteine prodotte. Cellule con molti ribosomi liberi • Globuli Rossi – Sintesi di Emoglobina • Cellule muscolari in differenziamento – Sintesi di Actina e Miosina • Cellule Nervose – Sintesi di Neurofilamenti • Cheratinociti della pelle – Produzione di Cheratina Cellule con molti ribosomi associati al RER • Il RER è presente in tutte le cellule (Mantenimento della membrana plasmatica, organelli intracellulari ed ECM) • Il RER è più abbondante nelle cellule in cui vi è attiva sintesi di proteine di membrana o rilasciate all’esterno • Prevalentemente nelle cellule secretorie Neuroni • Sintetizzano molti Neurotrasmettitori • Presentano strutture basofile nel citoplasma evidenziate dalla colorazione di Nissl (violetto di cresile) • Sono definite zolle di Nissl o sostanza tigroide • Sono zone del RER ricche in RNA Cellule Principali dello stomaco • Producono pepsinogeno, precursore della pepsina – Enzima proteolitico • Strutture basofile dovute ad abbondante RER Cellule Acinari Pancreatiche • Producono gli enzimi digestivi. • Organizzate in gruppi, detti Acini • La Secrezione Esocrina avviene al centro dell’acino Acino Cellule Acinari Pancreatiche Plasma cellule • Linfociti B attivati • Producono anticorpi circolanti Fibroblasti • Principale costituente del Tessuto Connettivo Osteoblasti • Cellule costituenti il tessuto osseo • Intensa basofilia Reticolo endoplasmatico liscio (REL) • Privo di Ribosomi • Canali anastomizzati (interconnessi) piuttosto che cisterne impilate Il REL è in continuità con il RER Funzioni del REL • Detossificazione – Aumenta negli epatociti dopo somministrazione di farmaci – Converte i farmaci lipo-solubili in prodotti di scarto idro-solubili, che vengono eliminati dai reni – Idrolasi, Ossidasi, – Metilasi (l’aggiunta di metili aiuta la loro secrezione, Es.: Arsenico) Funzioni del REL • Sintesi di Fosfolipidi per tutte le membrane cellulari • Produzione di Steroidi – Ghiandole Surrenali, Gonadi – Utilizzano il Colesterolo come molecola di partenza – Estrogeni, Testosterone, Cortisolo, Progesterone Intestino Tenue • Sintesi dei trigliceridi • Lipidi presenti nel cibo migrano lateralmente allo spazio extracellulare • Assorbiti e integrati nel REL Corticale del Surrene • Cellule secernenti cortisolo • Steroidi secreti per diffusione – No granuli Funzioni del REL • Metabolismo del Glicogeno • Interviene nella scissione del glicogeno (glucosio-6-fosfatasi) • Probabile partecipazione attiva anche nei processi di deposizione – Negli Epatociti (cellule fegato) Funzioni del REL • Regola la distribuzione intra- cellulare degli ioni Ca 2+ – Nelle cellule muscolari – Reticolo Sarcoplasmatico – I livelli di calcio regolano l’azione di proteine calcio-dipendenti coinvolti nella contrazione muscolare Reticolo Sarcoplasmatico • SER nel muscolo scheletrico • Rilascio di ioni calcio che stimolano la contrazione Flusso di vescicole da Reticolo Endoplasmatico all’apparato di Golgi