Cosa ci aspettiamo scientificamente e terapeuticamente dalla ricerca sulle cellule staminali? Prof Luca Pierelli Dipartimento di Medicina Sperimentale – Universita’ Sapienza – Roma UOC Medicina Trasfusionale e Cellule Staminali Le cellule staminali umane etimologia del termine “Staminale” derivazione greca --> stamin-inos = trave, montante “Staminale” derivazione latina--> stamen-minis = relativo allo stame (il filo dell’ordito, anche riferibile allo stame della vita. Le Parche, secondo il mito, filavano il destino della vita) “Staminale” derivazione anglosassone--> staminal = cellula capostipite di un clone Le cellule staminali umane tipologie • Totipotent stem cells : zigote • Pluripotent stem cells : cellule staminali embrionali • Induced pluripotent stem cells : IPS mediante riprogrammazione dei geni Oct-3/4; SOX; Klf; Myc; Nanog; LIN28 • Adult, multipotent, oligopotent, monopotent Le cellule staminali umane tipologie CONCETTO DI STAMINALITA’ • • • • Capacita’ di autorinnovarsi Lunga sopravvivenza Ampio repertorio differenziativo Capacita’ di differenziare in elementi funzionalmente attivi Cellula Staminale Emopoietica nella configurazione di elementi monopotenti Figure 4. Stages of human yolk sac formation. (Top) The primary yolk sac (1°YSC) is formed 7–8 days postconception. Intermediate cells (IC; depicted as white cells) migrate from the endodermal (EL) layer (darkcol- ored cells) of the primary yolk sac to fill in the space between the endo- derm and trophoblastic basal lamina (TBL). (Middle) The secondary yolk sac (2°YSC) is formed by the remnants of the primary yolk sac following its collapse and fragmentation. (Bottom) By 12 days postconception, the secondary yolk sac has expanded to the edge of the embryonic disk, is lined by endoderm cells (dark cells), and protrudes into the exocelom (EXO). The mesoderm adjacent to the trophoblastic basal lamina (TBL) has differ- entiated into mesothelium (MESO). Hematopoietic activity will be present in yolk sac blood islands arising in the secondary yolk sac by week 3 of gestation. Reproduced with permission of F.F. Nogales (ed): The Human Yolk Sac and Yolk Sac Tumors, Berlin: Springer-Verlag, 1993, pp. 35–36. “Emopoiesi” ovvero la produzione delle cellule del sangue NASCITA SACCO VITELLINO FEGATO FETALE MILZA FETALE MILZA ADULTA MIDOLLO OSSEO TIMO 20 100 ETA’ GESTAZIONALE (giorni) 260 20 40 60 ETA’ (anni) DISTRIBUZIONE DEL MIDOLLO OSSEO NEI BAMBINI E NEGLI ADULTI Fegato Encefalo Cellule staminali nervose Muscolo striato Midollo osseo Osso Cellule ematiche Endotelio vascolare Cellule epiteliali Stroma midollare Adipociti Neuroni Muscolo cardiaco Esempio di plasticita’ staminale nei tessuti murini . Cellule della glia CD133+ da sangue di cordone Generazione di mioblasti da staminali umane CD133+ In presenza di desametazone ed idrocortisone Anti-Myosin D CD133+ da sangue di cordone Generazione di osteoblasti da staminali umane CD133+ in presenza di desametazone, ac. ascorbico e beta-glicerolfosfato Anti-Osteopontin CD133+ da sangue di cordone Generazione di precursori endoteliali da staminali umane CD133+ in presenza di EGF, VEGF, bFGF, IGF e acido ascorbico CD133+ da sangue di cordone Generazione di precursori cardiomiocitici da staminali umane CD133+ in presenza di 5-azacitidina Impiego clinico delle cellule staminali/progenitori CD34+ •Trapianto allogenico (leucemie acute, leucemie croniche, immunodeficienze, aplasie midollari, tesaurismosi, emoglobinopatie) Trapianto allogenico Chemioterapia d’ induzione della risposta Reinfusione di progenitori emopoietici HLA-compatibili Regime di condizionamento mieloablativo e/o immunosoppressivo Recupero emopoietico con chimerismo GVHD GVT Infusione linfociti del donatore F O L L O W U P Impiego clinico delle cellule staminali/progenitori CD34+ • Trapianto autologo (leucemie acute, mielomi, linfomi, carcinoma mammario, carcinoma ovarico, tumori germinali, malattie autoimmuni) Trapianto autologo Reinfusione di progenitori emopoietici Chemioterapia d’ induzione della risposta Recupero emopoietico Chemioterapia/chemioradioterapia ad alte dosi (6/7 volte le dosi convenzionali) F O L L O W U P Treatment of Terminal Leukemic Relapse by Total-Body Irradiation and Intravenous Infusion of Stored Autologous Bone Marrow Obtained during Remission Joseph J. McGovern, Jr., M.D.†, Paul S. Russell, M.D.‡, Leonard Atkins, M.D.§, Edward W. Webster, Ph.D.¶, Martha Duane, J. Worth Estes, and David Kelleher N Engl J Med 1959; 260:675-683April 2, 1959DOI: 10.1056/NEJM195904022601401 Br J Haematol. 1994 Jan;86(1):70-5. Haemopoietic reconstitution after autologous blood stem cell transplantation in patients with malignancies: a multicentre retrospective study. Pierelli L1, Iacone A, Quaglietta AM, Nicolucci A, Menichella G, Benedetti Panici P, D'Antonio D, De Laurenzi A, De Rosa L, Fioritoni G, et al. 5 Raccolta delle cellule staminali emopoietiche dal sangue cordonale Raccolta delle cellule staminali emopoietiche dal sangue midollare Raccolta delle cellule staminali emopoietiche dal sangue periferico 4 2 Europa: 2011 L’intero pianeta: 2006-2008 Biol Blood Marrow Transplant. 2008 Jun;14(6):641-50. doi: 10.1016/j.bbmt.2008.03.005. HLA-haploidentical bone marrow transplantation for hematologic malignancies using nonmyeloablative conditioning and high-dose, posttransplantation cyclophosphamide. Luznik L1, O'Donnell PV, Symons HJ, Chen AR, Leffell MS, Zahurak M, Gooley TA, Piantadosi S, Kaup M, Ambinder RF, Huff CA, Matsui W, Bolaños-Meade J, Borrello I, Powell JD, Harrington E, Warnock S, Flowers M, Brodsky RA, Sandmaier BM, Storb RF, Jones RJ, Fuchs EJ. 33 HSC Niche Cytokine receptor Vascular endothelium CXCR4 SDF-1 gradient Notch1/ Jagged1 VLA4/ VCAM1 Stromal cells c-Kit SCF Extracellular matrix proteins and soluble cytokines Mesenchimal Stem Cells Descritte nel 1970 Friedenstein e coll. Origine midollare Derivate da un progenitore non emopoietico Forma fibroblastoide Anni ‘80 Castro-Malaspina 0.01-01% cellule midollari Elementi cellulari in grado di produrre citochine stimolanti l’emopoiesi Denominate CFU-F Unità formanti colonie fibroblastoidi Multipotenza delle MSC MSC alla confluenza Osteogenesi Membrana di acido ialuronico Imbibita di midollo osseo (residuo dopo intervento chirurgico per condropatia in coltura rilascia nel tempo MSC MSC da SVF + scaffold di Fosfato Tri-calcico - Adipogenesi prima della colorazione MSC da SVF + scaffold di Fosfato Tri-calcico - Adipogenesi colorazione con Oil Red MSC da SVF + scaffold di Fosfato Tri-calcico - Osteogenesi MSC da SVF + scaffold di Fosfato Tri-calcico - Osteogenesi CELLULE MESEMCHIMALI STROMALI SORGENTI MSCs MSCs Cellule Stromali Mesenchimali MIDOLLO OSSEO TESSUTO ADIPOSO SANGUE CORDONALE GELATINA DI WHARTON PLACENTA POLPA DENTALE ( denti decidui ) TESSUTO CONNETTIVO TESSUTO OSSEO LIQUIDO SINOVIALE MULTIPOTENZIALITA’ DIFFERENZIATIVA MSCs MESODERMA Tessuto adiposo Tessuto osseo Tessuto cartilagineo Tessuto muscolare Tessuto connettivo ENDODERMA Fegato Polmone Pancreas Tratto gastro-intestinale Cellule Stromali Mesenchimali ECTODERMA Epidermide Neuroni ATTIVITA’ IMMUNOMODULATORIA SCARSA IMMUNOGENICITA’ Scarsa espressione di HLA ( Classe I e Classe II ) ATTIVITA’ IMMUNOMODULATORIA Attivazione Linfociti T reg SFUGGONO ALL’AGGRESSIONE DEL SISTEMA IMMUNITARIO DELL’OSPITE INIBIZIONE Proliferazione dei linfociti T ( Th1 e T killer ) Proliferazione dei linfociti B ( produzione di anticorpi ) Funzione delle APC Produzione di citochine APPLICAZIONI DELLE MSCS ORTOPEDIA Lesioni Osteocondrali Lesioni Articolari CHIRURGIA PLASTICA MSCs Cellule Mesenchimali Stromali Ulcere Croniche Ustioni Cicatrici Ricostruzione del seno CARDIOLOGIA Cardiomiopatie Infarto del miocardio ODONTOIATRIA Rigenerazione dentina Rigenerazione polpa dentale NEUROLOGIA Danni al midollo spinale Ischemia cerebrale Clinical Trials.gov 493 studies found for Mesenchymal Stem Cells Phase I / II 96 Bone and Cartilage disease 87 Neurological disease 73 Cardiovascular Disease 35 GVHD 31 Liver disease 29 Hematological diseases 27 Diabetes 23 Lung Disease 13 Chron’s disease 9 Kidney Disease 2 Lupus erythematosus 73 Other Phase III/IV 2 Bone and Cartilage disease Cotransplantation Tissue regeneration Immune regulation INDUCED PLURIPOTENT STEM CELLS ( iPSCs ) 20 06 In 2006, Sinhya Yamanaka dimostrated the possbility to reprogramming fibroblasts into pluripotent stem cells with only 4 factors (Oct4, Sox2, Klf4,c-Myc) Oct4/3, Sox2, Klf4, c-Myc (Yamanaka S, 2006) INDUCED PLURIPOTENT STEM CELLS ( iPSCs ) iPSCs : APPLICATIONS Lee G. Nature Methods 2010 iPSCs : CELL THERAPY STRATEGIES 1. iPSCs BASED THERAPY FOR NON GENETIC DISORDERS First clinical trial with iPSCS ( 2013) RPE iPSCs RETINAL PIGMENTED EPITHELIUM RETINA TRANSPLANT 2. iPSCs BASED THERAPY FOR GENETIC DISORDERS Generation of functional TISSUES from iPSCs iPSCs TOWARD THE CLINIC Utilizzo di strategie non integrative ( integrazione = mutazioni = tumorigenesi ) Utilizzo di prodotti xenofree < rischio di risposte immunologiche Protocolli altamente efficienti di differenziamento per la produzione di cellule funzionali e “safe” < rischio tumorigenicità Ottimizzazione dei metodi di delivery, integrazione e funzionalità delle cellule trapiantate nel tessuto ricevente Studi di “ long term safety” per escludere la formazione di teratoma e/o di cellule geneticamente instabili