GENEQUALITY CALR MUTATION Cod. 04-40 Kit per la rilevazione delle mutazioni nell’esone 9 del gene CALR INTRODUZIONE Le neoplasie mieloproliferative (MPN) sono causate dall’insorgenza di mutazioni nelle cellule staminali ematopoietiche. I soggetti con MPN mostrano caratteristiche cliniche e molecolari comuni che conducono a complicazioni tromboemboliche e un alto rischio di sviluppare leucemie. In pazienti con MPN che non presentano mutazioni nei geni JAK-2 e MPL sono state identificate differenti mutazioni somatiche localizzate nell’esone 9 del gene codificante la calreticulina (CALR). Le mutazioni a carico del geni CALR, JAK-2 e MPL sono mutuamente esclusive tra loro. CALR è una proteina multifunzionale altamente conservata. Le mutazioni nell’esone 9 sono localizzate nella regione C-terminale della proteina e conducono ad alterazioni nel folding delle proteine neo-sintetizzate e in differenti processi biologici tra cui la proliferazione cellulare, l’apoptosi e l’eliminazione di cellule immunogeniche. Le mutazioni nell’esone 9 del gene CALR sono molto numerose e di vario genere (delezioni, inserzioni e complessi di inserzioni + delezioni). Tra queste le più frequenti sono la mutazione di tipo 1 (delezione di 52 bp) e la mutazione di tipo 2 (inserzione di 5 bp). La metodica utilizzata nel kit consente la rilevazione delle mutazioni di tipo 1, di tipo 2 e le mutazioni rare che producono delezioni o inserzioni ≥4 bp rispetto alla sequenza WT. Per ulteriori approfondimenti diagnostici, vengono forniti nel dispositivo i primers per effettuare il sequenziamento bidirezionale dell’amplificato prodotto. CARATTERISTICHE TECNICHE Il dispositivo è in grado di rilevare mutazioni di tipo 1, di tipo 2 e le mutazioni rare che producono delezioni e/o inserzioni ≥4 bp rispetto alla sequenza WT. Accuratezza: 100%. Sensibilità Analitica: è stata determinata mediante l’amplificazione di diverse miscele di DNA mutato (DNA sintetico per la mutazione di tipo 1 e di tipo2) in differenti background di DNA wild-type. Da tali prove il sensibilità analitica è risultata essere pari al 10%. PROCEDURA ESTRAZIONE DNAESTRATTO AMPLIFICAZIONE unica mastermix pronta all’uso VISUALIZZAZIONE IN GEL DI AGAROSIO AL 4% INFORMAZIONI PER GLI ORDINI Cod Prod Confez. 04-40A GENEQUALITY CALR MUTATION GENEQUALITY CALR MUTATION amplification reagents 50 test 04-40R PRODOTTI CORRELATI Cod RQ-S51-48/96A RQ-S51S-48/96 Numero di test: 50 test. RQ-S81-48/96 Stabilità: 12 mesi. Materiale di partenza: DNA estratto da sangue periferico o midollare; granulociti. 50 test 04-26A-25/50 04-26R-25/50 Prod Confez. REALQUALITY RS-JAK-2 V617F REALQUALITY RS-JAK-2 V617F variante screening REALQUALITY RS-JAK-2 V617F Q GENEQUALITY JAK-2 GENEQUALITY JAK-2 amplification reagents 48/96 test 48/96 test 48/96 test 25/50 test 25/50 test Regione amplificata: esone 9 del gene CALR. Amplificazione: PCR single step. Controlli positivi: 3 controlli positivi (WT, mutazione di tipo 1 e di tipo 2). Rilevazione: gel di agarosio al 4%. Specificità analitica: assenza di appaiamenti aspecifici dei primers. REFERENZE Nangalia J, N Engl J Med. 2013; 369:2391-405. Klampfl T, N Engl J Med. 2013; 369:2379-90. Tefferi A, Leukemia 2014 Jan 20. Vannucchi AM, Leukemia 2014 Mar 12. Specificità diagnostica: 100%. Sensibilità diagnostica: 100%. GQ-CALR_techleaf_i20140925 AB ANALITICA srl Via Svizzera 16 – 35127 PADOVA – ITALIA Tel 049 761698 - Fax 049 8709510 e-mail: [email protected] www. abanalitica.it