La citofluorimetria nella diagnostica delle malattie ematologiche
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Campioni: LA CITOFLUORIMETRIA NELLA DIAGNOSTICA DELLE MALATTIE EMATOLOGICHE • • • • • • Sangue periferico Sangue midollare Liquido pleurico ascitico pericardico Sospensione cellulare da tessuto Marcatori: la nomenclatura CD Si considera membro di un Cluster differentiation un Marcatore di superficie che: • identifica un particolare tipo cellulare o un certo stadio differenziativo • ha una struttura biochimica definita • è riconosciuto da un gruppo di MoAb diversi 1 Marcatori B-lineage TdT CD79a CD19 CD10 CD20 CD22 Cu SmIg Marcatori T-lineage CD7 CD2 CD5 CD3 CD1 CD4 CD8 TdT TCR Marcatori granulocitopoiesi CD34 CD13 CD33 CD117 CD11b CD16 CD66b CD66c CD15 2 Marcatori monocitopoiesi Marcatori eritrocitopoiesi CD34 CD13 CD34 CD33 CD45 CD14 CD33 CD11b CD71 CD16 CD105 CD66b CD36 CD66c GPA CD15 Malattie onco-ematologiche: classificazione • Leucemie Acute • Mieloblastica • Linfoblastica • Sindromi Mieloproliferative Croniche • Leucemia Mieloide Cronica • Trombocitemia essenziale • Policitemia Vera • Metaplasia Mieloide con Mielofibrosi • Mielodisplasie • Sindromi Linfoproliferative Croniche: • Leucemia Linfatica Cronica • Linfomi di Hodgkin e non-Hodgkin • Mieloma Multiplo Leucemie acute • Malattie neoplastiche solitamente acquisite • Coinvolgimento della cellula staminale emopoietica o dei suoi progenitori immaturi • Proliferazione clonale di elementi cellulari immaturi nel midollo osseo o, più raramente, in sedi extramidollari • Alterata differenziazione e proliferazione degli stessi e delle linee cellulari derivanti • Andamento acuto 3 Classificazione Morfologia … midollo normale • Criteri morfologici • “ citochimici • “ immunofenotipici • “ citogenetici Morfologia … leucemia acuta mieloide AML: Citofluorimetria 4 AML: Citofluorimetria 5 Gating Espressione CD45 CD 45 ANTIGENE PAN LEUCOCITARIO, ovvero ESPRESSO CON CARATTERISTICA INTENSITA’ SU LEUCICITI PERIFERICI MA ESPRESSO IN MODO ANOMALO SU CELLULE BLASTICHE Linfociti Monociti Cellule immatur e Eritrociti ALL-T Granulociti maturi Granulociti immaturi ALL-T CD1a, CD2, CD3, cyCD3, CD4, CD5, CD7, CD8, TdT ,(CD34) 6 ALL-B, common ALL-B, B matura ALL-B, common CD10, CD19, CD20, CD22, CD24, CD34, DR, IgM, cyIgM, Kappa, lambda, TdT, (CD15) ALL-B, B matura CD10, CD19, CD20, CD22, CD24, CD34, DR, IgM, cyIgM, Kappa, lambda, TdT 7 Differenziazione linfocitaria Leucemia Linfatica Cronica • Espansione di piccoli linfociti apparentemente maturi • Accumulo nel sangue periferico, midollo osseo, organi linfatici e, più raramente, extralinfatici • Forma di leucemia di più frequente osservazione nei paesi occidentali (10-15 casi/ 100.000 abitanti /anno) Morfologia su SVP Morfologia su BM 8 CLL: citofluorimetria CD5, CD23 positive B cells Kappa light chain restriction 9 10
