Campioni:
LA CITOFLUORIMETRIA
NELLA DIAGNOSTICA DELLE MALATTIE
EMATOLOGICHE
•
•
•
•
•
•
Sangue periferico
Sangue midollare
Liquido pleurico
ascitico
pericardico
Sospensione cellulare da tessuto
Marcatori:
la nomenclatura CD
Si considera membro di un Cluster differentiation
un Marcatore di superficie che:
• identifica un particolare tipo cellulare o un
certo stadio differenziativo
• ha una struttura biochimica definita
• è riconosciuto da un gruppo di MoAb diversi
1
Marcatori B-lineage
TdT
CD79a
CD19
CD10
CD20
CD22
Cu
SmIg
Marcatori T-lineage
CD7
CD2
CD5
CD3
CD1
CD4
CD8
TdT
TCR
Marcatori granulocitopoiesi
CD34
CD13
CD33
CD117
CD11b
CD16
CD66b
CD66c
CD15
2
Marcatori monocitopoiesi
Marcatori eritrocitopoiesi
CD34
CD13
CD34
CD33
CD45
CD14
CD33
CD11b
CD71
CD16
CD105
CD66b
CD36
CD66c
GPA
CD15
Malattie onco-ematologiche:
classificazione
• Leucemie Acute
• Mieloblastica
• Linfoblastica
• Sindromi Mieloproliferative Croniche
• Leucemia Mieloide Cronica
• Trombocitemia essenziale
• Policitemia Vera
• Metaplasia Mieloide con Mielofibrosi
• Mielodisplasie
•
Sindromi Linfoproliferative Croniche:
• Leucemia Linfatica Cronica
• Linfomi di Hodgkin e non-Hodgkin
• Mieloma Multiplo
Leucemie acute
• Malattie neoplastiche solitamente acquisite
• Coinvolgimento della cellula staminale emopoietica o dei
suoi progenitori immaturi
• Proliferazione clonale di elementi cellulari immaturi nel
midollo osseo o, più raramente, in sedi extramidollari
• Alterata differenziazione e proliferazione degli stessi e
delle linee cellulari derivanti
• Andamento acuto
3
Classificazione
Morfologia … midollo normale
• Criteri morfologici
•
“
citochimici
•
“
immunofenotipici
•
“
citogenetici
Morfologia … leucemia acuta
mieloide
AML: Citofluorimetria
4
AML: Citofluorimetria
5
Gating
Espressione CD45
CD 45
ANTIGENE PAN LEUCOCITARIO, ovvero
ESPRESSO CON CARATTERISTICA
INTENSITA’ SU LEUCICITI PERIFERICI
MA ESPRESSO IN MODO ANOMALO
SU CELLULE BLASTICHE
Linfociti Monociti
Cellule
immatur
e
Eritrociti
ALL-T
Granulociti
maturi
Granulociti
immaturi
ALL-T
CD1a, CD2, CD3, cyCD3, CD4, CD5, CD7, CD8, TdT ,(CD34)
6
ALL-B, common
ALL-B, B matura
ALL-B, common
CD10, CD19, CD20, CD22, CD24, CD34, DR, IgM,
cyIgM, Kappa, lambda, TdT, (CD15)
ALL-B, B matura
CD10, CD19, CD20, CD22, CD24, CD34, DR, IgM,
cyIgM, Kappa, lambda, TdT
7
Differenziazione linfocitaria
Leucemia Linfatica Cronica
• Espansione di piccoli linfociti apparentemente maturi
• Accumulo nel sangue periferico, midollo osseo,
organi linfatici e, più raramente, extralinfatici
• Forma di leucemia di più frequente osservazione nei
paesi occidentali
(10-15 casi/ 100.000 abitanti /anno)
Morfologia su SVP
Morfologia su BM
8
CLL: citofluorimetria
CD5, CD23 positive B cells
Kappa light chain restriction
9
10
