IMUBIND® Tissue Factor ELISA kit
IMUBIND® Tissue Factor ELISA kit è un test immunoenzimatico per la determinazione
quantitativa dell’attivatore del fattore tissutale umano (Tissue Factor, TF, apoproteina III) nel
plasma, nelle cellule surnatanti e nel tessuto estratto da tumori.
Il TF, indicato anche con il termine di tromboplastina tessutale, è una glicoproteina
transmembrana (47 kDa) ed è presente nelle membrane cellulari di molti organi (in particolare
cervello e polmone), negli strati sotto-intimali dei vasi sanguigni e nella placenta. Il TF è
espresso sulle superfici cellulari (endotelio, monociti circolanti, fibroblasti) solo in seguito ad
una lesione meccanica o biochimica (citochine, endotossine e complessi immuni) e la sua
esposizione rappresenta il principale meccanismo fisiologico di attivazione della coagulazione.
Il TF non è dotato di attività proteolitica ma è l’indispensabile cofattore per l’attività enzimatica
del fattore FVII/FVIIa con cui forma un complesso (la componente fosfolipidica della
tromboplastina tissutale funziona invece da superficie catalitica). Il complesso TF-FVIIa, in
presenza di ioni calcio, è in grado di attivare sia il fattore X (classica via estrinseca) sia il
fattore IX con conseguente trasformazione della protrombina in trombina.
La presenza di TF è stata riscontrata anche nelle cellule maligne di molte neoplasie; il
significato clinico dell’espressione del TF nei tumori sembra essere legato alla formazione locale
di fibrina: molte neoplasie maligne, infatti, sono associate a manifestazioni trombotiche.
IMUBIND® Tissue Factor ELISA kit utilizza, come anticorpo di cattura, un anticorpo
monoclonale di topo contro il TF umano. L’anticorpo riconosce e neutralizza la tromboplastina
da cervello umano. Il campioni è incubato nei micropozzetti con l’anticorpo adeso. Una volta
“catturato” il TF è determinato utilizzando un frammento di anticorpo biotinilato che ne
riconosce specificatamente il legame. Il successivo legame con l’enzima streptavidina,
coniugata con perossido di rafano (HRP), completa la formazione del complesso anticorpoenzima. L’aggiunta del substrato tetrametilbenzidina (TMB) e la sua reazione con la HRP
sviluppa una soluzione di colore blu. La sensibilità è aumentata aggiungendo acido solforico
(che funge anche da soluzione d’arresto) che induce un cambiamento di colore della soluzione
da blu a giallo. La concentrazione di TF è quantificata misurando le soluzioni campioni ad una
assorbanza di 450 nm e comparando il valore ottenuto con una curva di calibrazione. Il test
riconosce le forme TF-apo, TF e il complesso TF-VII ed è studiato per non avere interferenze
ne’ dagli altri fattori della coagulazione ne’ dagli inibitori dell’attività procoagulante. Nei
campioni il limite inferiore di determinazione è approssimativamente di 10 pg/ml.
Il kit IMUBIND® Tissue Factor ELISA kit è composto da:
•
micropozzetti rivestiti di Ab monoclonali
•
standard TF, da 0 a 1000 pg/mL
•
Ab di rilevazione, biotinilato TF F(ab’)2 anti-umano
•
enzima coniugato, streptavidina-HRP (60 µL)
•
enzima coniugato diluente
•
substrato TMB, 11 mL
•
tampone lavaggio (PBS con 0.1% Triton X-100)
6
6
2
1
1
1
1
x 16 (96 pozzetti)
flaconi
flaconi x 5.5 ml
flacone
flacone x 20 ml
flacone
pacchetto
Conservazione e stabilità dei reagenti
I reagenti sigillati sono stabili a 2-8°C fino alla data di scadenza stampata sull’etichetta del
flacone.
•
Conservare i reagenti ricostituiti a 2-8°C per 1 mese.
Codice
049845
Codice Nominale
Cocco
Caratteristiche principali
Test con metodica immunoenzimatica
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