IMUBIND TFPI ELISA
IMUBIND TFPI ELISA Kit è un test immunoenzimatico “a sandwich” per la misurazione
quantitativa del Tissue Factor Pathway Inhibitor (TFPI) nel plasma e nel surnatante di
colture cellulari.
Il TFPI è una serin-proteasi caratterizzata dalla presenza di tre domini di tipo Kunitz
ripetuti in tandem (KI, KII, KIII) ed è l’unico inibitore fisiologico del complesso TFVIIa. Il 75% del TFPI è localizzato sulla superficie endoteliale, il 10% è presente nelle
piastrine, la restante porzione circola nel plasma in forma libera o legata a
lipoproteine. L’attività inibitoria è esercitata dalla porzione libera del TFPI. Il
meccanismo di inibizione da parte del TFPI avviene in due fasi: il TFPI si lega al FXa,
tramite il dominio KII, e ne inibisce l’attività; il complesso TFPI-Xa, in presenza di ioni
calcio, si lega e neutralizza l’attività catalitica del complesso VIIa-TF, formando un
complesso quaternario TF-VIIa-TFPI-FXa privo di attività enzimatica.
Il test IMUBIND TFPI ELISA è un “sandwich” ELISA che utilizza un anticorpo
policlonale di coniglio diretto contro il TFPI umano. La specificità per il riconoscimento
delle varie forme di TFPI (nativo, complessato e troncato) è stata confermata
utilizzando il test di immunofissazione. I campioni sono incubati in micropozzetti preadesi con l’anticorpo di cattura. Il TFPI è determinato utilizzando un frammento di
anticorpo monoclonale biotinilato che riconosce specificatamente il dominio Kunitz 1.
Il successivo legame con l’enzima streptavidina coniugata con perossido di rafano
(HRP) completa la formazione del complesso anticorpo-enzima. L’aggiunta del
substrato tetrametilbenzidina (TMB) e la sua conseguente reazione con la HRP dà
luogo allo sviluppo di una soluzione di colore blu. L’aggiunta di acido solforico arresta
la reazione e induce un cambiamento del colore della soluzione dal blu al giallo. La
concentrazione di TFPI è quantificata misurando ad una assorbanza di 450 nm le
soluzioni colorate dei campioni e comparando il valore ottenuto con una curva di
standard.
Il kit IMUBIND TFPI ELISA è composto da:
•
micropozzetti rivestiti di anticorpi
•
tampone lavaggio
•
standard, 5 ng/mL
•
plasma carente
•
plasma di riferimento
•
diluente campione
•
Ab di rilevazione, biotinilato mAb
•
enzima coniugato SA- HRP
•
tampone coniugato
•
substrato
•
soluzione d’arresto
12 x 8 (96 pozzetti)
1 flacone x 50 ml (20x)
2 flaconi
1 flacone x 0.5 ml
1 flacone x 0.5 ml
1 flacone x 20 ml
2 flaconi x 5.5 ml
1 flacone x 60 µL (100x)
1 flacone x 15 ml
1 flacone x 12 ml
1 flacone x 6 ml
Conservazione e stabilità dei reagenti:
I reagenti sigillati sono stabili a 2-8°C fino alla data di scadenza stampata sulle
etichette dei flaconi. Per la conservazione dei reagenti ricostituiti fare riferimento al
foglietto illustrativo.
Codice
049ADG849
Codice nominale
MONICA
Caratteristiche principali:
•
Metodica immunoenzimatica “a sandwich”
