Effetti funzionali di mutazioni del gene MYH di incerto significato

Effetti funzionali di mutazioni del gene MYH di incerto significato patogenetico identificate in
pazienti affetti da MAP.
Sudio in collaborazione con l’Università di Pavia (Prof.ssa N. Ranzani) ed Università di Firenze
(Prof. M. Genuardi)
Studio dell’espressione e della localizzazione della proteina MYH mediante
immunofluorescenza su linee linfoblastoidi.
Le mutazioni di MYH possono determinare una riduzione, fino alla scomparsa, dell’espressione
della proteina, oppure un’alterata localizzazione intracellulare di una proteina normalmente
prodotta, la quale è generalmente concentrata nel nucleo (Tsai-Wu et al., 2000). Questa ipotesi sarà
valutata sui linfoblasti ottenuti dai pazienti mediante analisi in immunofluorescenza delle linee
linfoblastoidi utilizzando un anticorpo specifico per la porzione carbossi-terminale della proteina.
Lo svolgimento di questa parte del progetto avverrà in collaborazione con la Dr.ssa Margherita
Bignami, Istituto Superiore di Sanità.
Studio delle proprietà di legame della proteina MYH con substrati oligonucleotidici. La
proteina MYH verrà ottenuta mediante immunoprecipitazione a partire da estratti proteici delle
linee linfoblastoidi allestite al punto 2. La quantità di proteina MYH ottenuta verrà determinata
mediante Western blotting, e, successivamente, la proteina purificata sarà saggiata con gel mobility
shift assays dopo incubazione con diversi substrati oligonucleotidici a doppio filamento (contenenti
basi regolarmente appaiate o mismatch di tipo A:OH8G e A:G) e a diverse concentrazioni di NaCl
(Shinmura et al., 2000).