METODOLOGIE BIOCHIMICHE
Paolo Iadarola
Dip. Biologia e Biotecnologie “L. Spallanzani”
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6 CREDITI
Metodi di estrazione di proteine ed enzimi da tessuti animali, vegetali e da cellule microbiche.
Processi di purificazione primaria. Metodi cromatografici: adsorbimento, ripartizione, scambio
ionico, gel filtrazione, affinità, interazione idrofobica. Gas-cromatografia, cromatografia con fluidi
nel loro stato supercritico. Chromatofocusing. HPLC, FPLC. Metodi elettroforetici: elettroforesi
mono e bidimensionale, isoelectrofocusing, elettroforesi capillare. Applicazione delle tecniche
spettroscopiche (U.V., visibile, fluorescenza, massa, N.M.R., E.S.R.) nel dosaggio quantitativo di
una proteina e in studi di proteomica. Determinazione della composizione aminoacidica di una
proteina e studio della sua struttura primaria. Uso di radioisotopi e metodi di rilevazione della
radioattività. Tecniche immunochimiche e radioimmunologiche.
Obiettivo del corso è quello di avvicinare lo studente alle metodologie necessarie alla purificazione
di una molecola biologica quale può essere una proteina con attività enzimatica. A tale scopo si
indica il procedimento da seguire per estrarre una proteina da un tessuto, eseguire la sua
purificazione attraverso metodiche cromatografiche e/o elettroforetiche ed infine caratterizzarla dal
punto di vista strutturale e funzionale.
L’esame consiste in una prova orale.
Testo di riferimento: Principles and techniques of practical biochemistry by K. Wilson and J.
Walker. 5th Edition. Cambridge University Press.
