Insegnamento: BIOLOGIA DEI MICRORGANISMI (cod. 69153) (n. 6 CFU; 6 CFU; 60 ore) A.A. 2014-2015 Corso di laurea: Tecnologie alimentari (8528) Scuola di Agraria e Medicina Veterinaria - Campus di Cesena Prof. Fausto Gardini OBIETTIVI FORMATIVI: Al termine del corso, lo studente conosce le caratteristiche a livello strutturale, fisiologico e metabolico delle specie microbiche di interesse alimentare, ne conosce gli aspetti genetici e le relazioni fra genotipo e fenotipo. Inoltre le caratteristiche fisiologiche dei principali gruppi di microorganismi che svolgono un ruolo importante nei processi fermentativi, nella degradazione e nell’insorgenza di tossinfezioni associate al consumo di alimenti . LEZIONI Temi e competenze acquisite Temi e competenze acquisite 1 La cellula microbica Acquisizione di conoscenze circa: a. Struttura cellulare degli organismi viventi b. Organizzazione della cellula batterica c. Organi fondamentali della cellula Argomenti Argomenti Presentazione del corso e inquadramento della materia Struttura e funzione di delle strutture cellulari microbiche Contenuti specifici Contenuti specifici Campo di azione della microbiologia, definizioni generali. Cos'è un microorganismo. Composizione e funzioni generali della cellula microbica. Cellule eucariote e cellule procariote: differenze e caratteristiche in comune. Morfologia delle cellule batteriche; la parete cellulare, peptigoglicano. Colorazione di Gram: batteri Gram+ e batteri Gram-; membrana esterna e spazio periplasmatico dei batteri Gram-. Membrana plasmatica: funzioni strutturali e funzioni. Proteine di membrana e fluidità. Ore Ore 1 2 3 Strati esterni (S-layer, capsule e 2 polisaccaritidi). Organi di movimento. Tassia dei microorganismi. Citoplasma. Ribosomi. Produzione di endospore. Morfologia delle cellule eucariote. Parete, cloroplasti, mitocondri. Nucleo e cromosomi. Ipotesi endosimbiontica. Reticolo endoplasmatico, apparato del Golgi. Flagelli e cilia Crescita microbica e sistemi di trasporto Acquisizione di conoscenze circa: a. Moltiplicazione microbica b. Relazioni fra microorganismi e l’ambiente esterno c. Produzione di energia d. Interazione fra la cellula e l’ambiente esterno Metabolismo microbico Acquisizione di conoscenze circa: Principi della moltiplicazione microbica e fattori che la influenzano Acquisizione ed utilizzo dei principi nutrizionali da parte della cellula Produzione di energia ed attività biosintetiche a. Biochimica della produzione di energia b. Utilizzo delle sostanze fondamentali per la crescita microbica c. Vie anaboliche e vie cataboliche Respirazione e fermentazione Terreni di coltura: definizione, classificazione, preparazione. Conteggio dei microrganismi. Curva di crescita microbica: fase lag, fase esponenziale, fase stazionaria e fase di morte. Crescita diauxica, chemostati. Concetto di omeostasi. Principali fattori che influenzano la crescita microbica: temperatura, pH, aw, ossigeno Componenti chimici. Energia (fototrofia, chemiotrofia, litotrofia). Sostanza organica (autotrofi, eterotrofi). Fattori di crescita. Sistemi di trasporto (primario, secondario, traslocazione di gruppo) Processi energetici. Fermentazione e respirazione. Trasporto elettronico, potenziale di ossidoriduzione e bioenergetica. Trasporatori di membrana (NADH, chinoni, citocromi, proteine Fe S, flavoproteine. Forza Proton Motrice, ATP, CoA. Generazione di FPM. Ruolo della ATPasi Intermedi chiave. Gluconeogenesi. Ciclo di Calvin. Assimilazione dell'azoto. Assimilazione dello zolfo. Assimilazione del fosforo. Biosintesi degli aminoacidi. Biosintesi dei nucleotidi 2 Glicolisi. Via di Entner Doudoroff. Ossidazione dei pentoso fosfati. Fermentazioni: omolattica, etero lattica, alcoolica, acido mista, butandiolica, acetica, butirrica, dei bifidobatteri, propionica, omoacetica, 1 2 2 1 2 2 3 Genetica batterica (6) Acquisizione di conoscenze circa: a. Organizzazione del genoma batterico b. Trasmissione dell’informazione genetica c. Relazione fra genotipo e fenotipo d. Scambi di materile genetico nei batteri I virus Acquisizione di conoscenze circa: Organizzazione degli acidi nucleici e dell’informazione genetica Funzioni e trasmissione del patrimonio genetico Caratteristiche delle particelle virali a. Definizione e struttura ei virus b. Fagi virulenti e fagi temperati Tassonomia e classificazione (5) Acquisizione di conoscenze circa: a. Concetto di specie fra i procarioti Criteri della tassonomia microbica reazione di Stickland. Respirazione aerobica ed anaerobica. Ciclo di Krebs. Vie anapleorotiche e via del gliossilato. Catabolismo delle macromolecole Genoma batterico e nucleoide. Organizzazione del cromosoma. 2 1 1 Elementi genetici accessori (mobili) nei batteri. Plasmidi, trasposoni, integroni, sequenze di inserzione, genomi virali. Replicazione, trascrizione e traduzione dell'informazione genetica. Modalità di replicazione del cromosoma: replisoma, enzimi coinvolti. 1 Trascrizione: fasi, ruolo di mRNA e fattori sigma. Traduzione: tRNA, codice genetico, sintesi proteica, ribosomi. Ruolo e funzioni degli operoni. Regolazione della trascrizione. Mutazioni e mutagenesi. Ricombinazione. Trasferimento genetico orizzontale: trasformazione, trasduzione, coniugazione Struttura virale, materiale genetico dei virus. Replicazione virale: fasi. Proteine virali. Virus batterici (fagi). Fagi virulenti e fagi temperati. Caratteristiche della lisogenia 1 Filogenesi. Metodi per la classificazione: genotipo e fenotipo. Definizione delle specie in campo microbico. Classificazione di Bacteria. Principali Phyla (Proteobacteria, Firmicutes, Actinobacteria). 1 2 1 1 1 1 0.5 b. Cenni di tassonomia microbica c. Caratteristiche dei principali gruppi batterici di interesse alimentare Laboratorio (20) Acquisizione di conoscenze circa: a. Manipolazione dei microorganismi b. Metodiche di conteggio c. Preparazione ed utilizzo di terreni colturali Caratteristiche dei principali gruppi microbici Esercitazioni svolte nel laboratorio didattico dagli studenti Caratteristiche e collocazione dei principali gruppi microbici batterici : Pseudomonadacee, Enterobacteriacee, Batteri acetici, Acinetobacter e Chromobacterium, Vibrio e Photobacterium, batteri lattici, Bacillus, Clostridi, Stafilococchi, Micrococchi, Listeria, Corineformi, batteri propionici, bifidobatteri. Classificazione dei funghi: lieviti e muffe. Riproduzione sessuale e riproduzione asessuale; ascomiceti e basidiomiceti. Curva di crescita microbica: numerazione e determinazione delle fasi di crescita di colture tramite metodi diretti (conteggio in camera di Burker, conteggio in piastra) e metodi indiretti (misura della densità ottica). Campionamento di un alimento tramite metodo di semina in piastra sia per sia per inclusione che per spatolamento superficiale. Conteggi e individuazione del carico microbico nel campione per i diversi gruppi microbici. Tecniche di isolamento di microrganismi su piastra; purificazione degli isolati e loro caratterizzazione Visione al microscopio (morfologia cellulare) e test della catalasi. Prove di fermentazione: lieviti maltosio + o- 2.5 1 5 5 5 5