RICERCA DI ANTICORPI PER BORDER DISEASE VIRUS (BDV) IN OVINI SICILIANI
ANTIBODY SURVEY TO BORDER DISEASE VIRUS (BDV) IN SICILIAN SHEEP
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Bottari T., 1Foti M., 1Rinaldo D., 1Fisichella V., 2Di Pietro S., 3Buonavoglia D.
Dipartimento di Sanità Pubblica Veterinaria – 2Dipartimento di Scienze Mediche Veterinarie - Facoltà di
Medicina Veterinaria, Polo Universitario dell’Annunziata 98168 Messina
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Dipartimento di Sanità e Benessere degli Animali - Facoltà di Medicina Veterinaria -Bari
Parole chiave: Border disease virus, ovini, sieroneutralizzazione, Sicilia
Summary
Border Disease is a disease of sheep caused by a pestivirus characterized by abortions, infertility and retarded
growth. The related economic losses lead to follow an early diagnosis and an infection monitoring especially in
Sicily which rural economy is mainly based on sheep and goats breedings. The aim of the study reported here
was to evaluate the presence of antibody to BDV in sheep breading in Sicily.
600 serum samples coming from 12 sheep farms were screened. The detection of antibodies was made by
seroneutralization test using PEB cell line (Bovine Embryonal Lung). Cells were maintained in D-MEM medium
with 10% fetal bovine serum. 207 specimens (34,5%) were positive. In 9 farms (75%) positive animals were
detected with percentages ranging from 12 to 45%.
Our results let us to suppose a wide spread of BDV in Sicilian flocks and to suggest that such virus must be
considered by veterinary practioners as a possible cause of neonatal pathology in sheep.
Introduzione
II virus della Border Disease (BDV), con il virus della Peste Suina Classica (HCV) ed il virus della Diarrea
Virale Bovina (BVDV), appartiene alla famiglia Flaviviridae, genere Pestivirus (Nettleton, 1990; Plant et al.,
1973; Edwards et al, 1988).
La Border Disease è una malattia degli ovini caratterizzata da aborti, infertilità, ritardo della crescita ed
immunosoppressione descritta per la prima volta al confine tra l'Inghilterra e il Galles nel 1959 (Hughes et al.,
1959). BDV può causare infezione transplacentare e quindi nascita di agnelli persistentemente infetti. La
malattia, che in Europa è abbastanza diffusa, è stata riscontrata in Norvegia (Loken e Barlow, 1981), Germania
(Schaarschmidt et al. 2000; Bogel, 1964; Liess et al., 1982; Wolf & Buttner, 1994), Svizzera (Cravero et al.,
1975; Thur et al. 1997), Francia (Bregère-Picon et al., 1984) Grecia (Spais et al., 1975), Nuova Zelanda
(Manktelow et al., 1969), Australia (French e Snowdon, 1964), U.S.A. (Osburn et al., 1973) e Canada (PhysickSheard, 1980). La malattia è stata segnalata per la prima volta in Italia da Buonavoglia et al. nel 1991 e trova
maggiore diffusione nelle regioni meridionali e insulari (Martella et al., 2000).
I danni ingenti causati dal virus BD hanno indotto gli addetti ai lavori a mettere a punto sistemi diagnostici rapidi
ed efficaci per un precoce monitoraggio dell’infezione nelle aree ad attitudine zootecnica, quale potrebbe essere
la Sicilia. Obiettivo del presente lavoro è quello di valutare la diffusione del virus BD nella popolazione ovina
siciliana mediante monitoraggio sierologico basato sulla ricerca di anticorpi per BDV con il test di
sieroneutralizzazione.
Materiali e metodi
Emosieri - Sono stati saggiati 600 emosieri di ovini, di età compresa tra 6 mesi e 7 anni, appartenenti a 12
allevamenti presenti nel territorio di 4 province siciliane: Messina, Catania, Palermo ed Enna. I sieri sono stati
inattivati a 58° C per 45’ e conservati a –20° C fino al momento dell’uso.
Colture cellulari – E’ stata utilizzata una linea cellulare semi-continua di Polmone Embrionale Bovino (PEB)
(fig.1). Le cellule sono state coltivate in terreno D-MEM (Dulbecco-Minimal Essential Medium) con aggiunta
del 10 % di siero fetale bovino (FCS - GIBCO).
Figura 1. Linea cellulare semi-continua di Polmone Embrionale Bovino (PEB) prima dell’infezione.
Virus – E’ stato utilizzato un ceppo citopatogeno di BVDV (NADL). Quattro-cinque giorni p.i., il virus
determina effetto citopatico, caratterizzato da vacuolizzazione citoplasmatica seguita da arrotondamento e lisi
cellulare (fig.2). Il titolo infettante del virus è stato determinato mediante il metodo della diluizione limite in
micropiastra.
Figura 2 . Linea cellulare semi-continua di Polmone Embrionale Bovino (PEB) in quarta giornata p.i.
Sieroneutralizzazione - Gli emosieri in esame sono stati diluiti per raddoppio da 1/2 a 1/256 in piastre per
microtitolazione a 96 pozzetti, utilizzando terreno D-MEM. Ad ogni diluizione dei sieri sono state aggiunte 100
TCID50 del virus e, dopo 1 ora di contatto a temperatura ambiente, ad ogni miscela siero/virus sono state
aggiunte le cellule PEB appena tripsinizzate. Le piastre sono state incubate a 37°C in termostato a CO2 ed
osservate giornalmente per l’evidenziazione di un eventuale effetto citopatico.
Risultati
Tabella 1 – tabella riassuntiva
totale
N. positivi
% positivi
N. negativi
% negativi
N. allevamenti
12
9
75
3
25
N. emosieri
600
207
34,5
393
65,5
I risultati degli esami sierologici effettuati sono riportati nella tabella 1. Delle 12 aziende esaminate 9, pari al
75%, presentavano soggetti sieropositivi. In queste aziende la percentuale di positività oscillava dal 12 al 42 %.
In totale 207 ovini, pari al 34,5 % degli animali esaminati, sono risultati sieropositivi. Le percentuali di positività
non presentavano differenze significative tra le province siciliane saggiate né nelle diverse fasce di età
considerate.
Conclusioni
La sieroprevalenza riscontrata nei soggetti esaminati e soprattutto l'alta percentuale di allevamenti colpiti (75%)
lascia supporre una larga diffusione della Border Disease in Sicilia. Analogamente a quanto riportato da
Tegtmeier et al. (2000), non si evidenzia nessuna relazione tra la percentuale di infezioni rilevate e l’età degli
animali.
Considerato che la Border Disease spesso decorre in forma subclinica e tenuto conto delle difficoltà nel mettere
in evidenza il virus per le sue particolari caratteristiche intrinseche, notevole importanza spetta al controllo
sierologico sistematico e continuo sul territorio e soprattutto in Sicilia. È necessario prestare particolare
attenzione ai soggetti sieronegativi i quali, se immunotolleranti, rappresentano il principale veicolo di diffusione
del virus nell’allevamento (Sawyer M.M. 1992). Il monitoraggio sierologico, per la sua semplicità di esecuzione
e per i costi relativamente contenuti, rappresenta, al momento, il modo più efficace per circoscrivere, il più
rapidamente possibile, focolai di infezione che, altrimenti, potrebbero assumere proporzioni preoccupanti e
mettere in crisi l’ovinicoltura.
I risultati preliminari della presente nota sottolineano l’importanza della Border Disease nella patologia
neonatale degli agnelli e lanciano un messaggio ai liberi professionisti che operano nel settore ovi-caprino in
Italia Meridionale.
Bibliografia
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
Bogel K. Uber die verbreitung eines der Mucosal-Dìsease Gruppe in Shafherden Suddutsclands.
Zenthl.Vet.Med.,2B , 687-692, (1964).
Brugère-Picoux J., Maes H., Moussa A., Russo P., Parodi A.L. Identification de la "Border Disease" ou
"Maladie de la Frontière chez le mouton en France" Bull. Acad. Vet. de France,55 , 555, (1984).
Buonavoglia C., Tempesta M., Marsilio F., Buonavoglia D., Gatti A,, Sandss J.J., Compagnucci M.
Border Disease degli ovi-caprini: nota sull’isolamento e caratterizzazione del virus in Italia O.D.V. 12,
47-49, (1991).
Cravero G.C., Fatzer R., Frankhauser R., Border-Krankheit (hipomielogenesis congenita ) bei Lammern
in der Schweitz. Schweitz Arch. Tierheìlkd., 117-119,{1975).
Darcel C.Le Q., Avery R.T., Baìnborough A.R. Congenital trembling in lambs. Can. J. Camp. Med.
Vet., 25, 132, (1961).
Edwards S., Sands J.J,, Harkness J.W. The application of monoclonal antibody panels to charactere
pestivirus isolates from ruminantes in Greit Britain. Arch.Vìrol., 102, 197-206, (1988).
French E.L., Snowdon W.A, Mucosal Disease in Australian cattle. Austr. Vet. J., 40, 99, (1964).
Hughes L.E., Kershaw G.F., Shaw I..G. “B” or Border Disease. An undescribed disease of sheep. Vet.
Rec.,71, 313-317, (1959).
Liess B., Blindow H., Orban S., Sasse-Patrer B., Frey M. R., Timm D. Aborte, totgeburten, klimmern
lammersterben in zwei schafhrerden nordewest-deutschlands: “Border Disease in der Bundesrepublik?“.
Dtsch. Tierarztl. Wschr., 89, 611, (1982).
Loken T., Barlow R.M. Border diseases in Norway. Acta Vet. Scand., 22, 137-139, (1981).
Manktelow B.W., Porter W.L., Lewis K.H.C. Hairy shaker disease of lambs. N.Z. Vet. J., 17, 245,
(1969).
Martella V., Pratelli A., Bollo E., Buonavoglia D., Perillo A., Greco G., Guarda F., Buonavoglia C.
Rilievi virologici ed istopatologici in agnelli e capretti con infezione da Pestivirus Large An. Rev.,2 , 7377, (2000).
Nettleton P.F. Pestivirus infections in ruminants other than cattle. Rev. Sci. Tech. Off. Int. Epiz., 9, 131150, (1990).
Osburn B.I., Clarke G.L., Steward W.C. Border disease-like syndrome in lambs. Antibodies to hog
cholera and bovine viral diarrhoea viruses. J. Am. Vet. Med. Assoc., 163, 1165-1167, (1973).
Phisick-Sheard P.W., Hopkins J.B., O'Connor R.D. A Border Disease-like Syndrome in a Southern
Ontario sheep flock. Can. Vet. J., 21, 52, (1980).
Plant J.W., Littlejohns I.R., Gardiner A.C., Vantsis J.T., Huck R.A. Immunological relationship between
Border Disease, Mucosal Disease and Swine Fever. Vet. Rec., 92, 455, (1973).
17. Sawyer M.M. "Border Disease of sheep: the disease in the newborn, adolescent and adult" Comp.
Immun. Microbiol. Infect. Dis. 15, 171-177, (1992).
18. Schaarschmidt U., Schirrmeier H., Strebelow G., Wolf G. Detection of border diseases virus in a sheep
flock in Saxony. Berl Munch Tierarzil Wochenschr, 113, 284-288, (2000).
19. Spais A.G., Papadopoulos O., Vantsis J.T. An extensive outbreak of Border Disease in Greece (a
preliminary report ). Proc. 20th Words Veterinary Congress,Tthessaloniki., 622, (1975).
20. Tegtmeier C., Stryhn H., Utthenta I., Kjeldsen A.M., Nielsen T.K. Seroprevalence of Border Diseases in
Danish sheep and goats. Acta Vet. Scand., 339-344 (2000).
21. Thur B., Hilbe M., Strasser M., Ehrensperger F. Immunohistochemical diagnosis of pestivirus infection
associated with bovine and ovine abortion and perinatal death Am. J. Vet. Res., 58 , 1371-1375, (1997).
22. Wolf. G., Buttner M. Clinical aspects and diagnosis of border diseases. Tierarzil Prax., 22 , 35-38,
(1994).
