Lezione di Anatomia Patologica
BIOLOGIA MOLECOLARE
NEL LINFONODO SENTINELLA
Luigia Macrì
Università degli Studi di Torino
AO-U San Giovanni Battista
di Torino
1. Cos’è il linfonodo sentinella?
Il Linfonodo Sentinella è il
primo linfonodo che riceve la
linfa da un tumore ed è quello
che più probabilmente viene
colonizzato
dalle
cellule
tumorali, dando origine alle
Linfonodo
Sentinella
“METASTASI” linfonodali.
2. Chi esamina il linfonodo sentinella?
L’ANATOMO PATOLOGO è il
medico che con un esame al
microscopio valuta la presenza
di metastasi nel Linfonodo
Sentinella.
3. Quando può essere esaminato?
La diagnosi al microscopio sul Linfonodo Sentinella, per
definire se ci sono o meno metastasi, viene effettuata
dall’anatomo patologo dopo
o durante l’intervento.
In questo caso si parla di esame intraoperatorio .
EE
2 mm
2 mm
ICC
LINFONODO SENTINELLA
FISSATO IN FORMALINA ED INCLUSO IN PARAFFINA
RIDUZIONE CON SEZIONI SERIATE
UN BLOCCHETTO IN PARAFFINA
J Clin Pathol 2004;57:695–701.
Le procedure anatomo-patologiche per la valutazione del LS
mancano di standardizzazione
•
•
•
•
•
riduzione macroscopica
utilizzo dell’esame al congelatore
numero di sezioni istologiche da esaminare
utilizzo di colorazioni ancillari
stesura del referto
STAGING
nella VALUTAZIONE CLASSICA DEL
LINFONODO SENTINELLA
Based on AJCC/UICC TNM, 7th edition
Protocol web posting date: October 2009
(sn): Valutato il solo linfonodo(i) sentinella. Se vengono asportati 6 o più linfonodi sentinella e/o
linfonodi non sentinella, questa sigla non dovrebbe essere utilizzata.
pN0
Istologicamente non metastasi in linfonodo regionale, non ulteriori
valutazioni per cellule tumorali isolate.
pN0(i–) Istologicamente non metastasi in linfonodo regionale, con
valutazione immunoistochimica negativa
pN0(i+) Gruppi di cellule maligne, o singole cellule, in linfonodo(i)
regionale(i) non più grandi di 0.2 mm, o meno di 200 cellule in una
singola sezione istologica (evidenziate da colorazione E/E o ICC, incluse
le cellule tumorali isolate)
pN1
pN1mi: MICROMETASTASI (più grandi di 0.2 mm e/o composte da più
di 200 cellule, ma nessuna metastasi più grande di 2.0 mm).
pN1 a: METASTASI interessanti da1 a 3 linfonodi ascellari, con almeno
una metastasi più grande di 2.0 mm
LINFONODO SENTINELLA
FISSATO IN FORMALINA ED INCLUSO IN PARAFFINA
RIDUZIONE CON SEZIONI SERIATE
UN BLOCCHETTO IN PARAFFINA
4. Nuove tecnologie
In questo caso l’anatomo patologo non cerca più le cellule tumorali al
microscopio, ma esegue indagini di biologia molecolare che permettono
valutare la presenza di molecole di RNA proprie delle cellule di tumori della
mammella (proteina CK19) nel Linfonodo Sentinella.
In particolare la metodica One Step Nucleic Acid Amplification (OSNA)
prevede l’uso di uno strumento automatizzato e di prodotti dedicati (kit).
OSNA
One Step Nucleic Acid Amplification
PROCEDURA AUTOMATIZZATA DI AMPLIFICAZIONE DEGLI
ACIDI NUCLEICI
VERIFICA LA PRESENZA DEL GENE DELLA CK19 NEL
TESSUTO LINFONODALE
CONSENTE UNA DIAGNOSI MOLECOLARE DEL
LINFONODO SENTINELLA INTRAOPERATORIA DEFINITIVA
FORNISCE UN RISULTATO DI NEGATIVO, MICROMETASTASI
O MACROMETASTASI
La diagnosi OSNA
SENTINELLA
CLASSICO
SENTINELLA
OSNA
Dimensioni delle metastasi
mRNA della CK19
Macro-Metastasi
++
5.000 copie
mRNA/µL – CK19
(1.0 x 108)
Micro-Metastasi
+
250 copie
mRNA/µL – CK19
ITC / background
(5.0
- x 106)
FLOW-CHART DIAGNOSTICA - MOLINETTE
Diagnosi di carcinoma
mammario
Valutazione ECOGRAFICA dei linfonodi
LNF non sospetti
LNF sospetti
Agoaspirato
LINFONODO SENTINELLA
negativo
positivo
Valutazione ICC della positività per CK-19
(sul tumore primitivo)
dissezione ascellare
CK-19 POSITIVO
CK-19 NEGATIVO
OSNA + Imprint
Metodica istologica standard
DIAGNOSI INTRAOPERATORIA SLN:
utilizzo dell’intero linfonodo
morfologica
EE
2 mm
2 mm
ICC
molecolare
IMPRINT
Interpretazione e diagnosi
Patologo
OSNA
2010: eseguiti 279 LS presso Breast Unit Molinette
OSNA
110 casi
Metodo
Tradizionale
169 casi
Macrometastasi
11%
20 %
Micrometastasi
18%
8%
71%
73%
ITC
Negativo
P<0.01
Macrometastasi
Cavo ascellare
positivo
Micrometastasi
Cavo ascellare
positivo
OSNA
42%
OSNA
22%
Metodo
Tradizionale
45%
Metodo
Tradizionale
22%
GRAZIE PER L’ATTENZIONE
