2.3 Transgenesi

Transgenesi
Sostituzione di un gene, knockout di un gene, aggiunta di un gene
Generazione di organismi transgenici
Figure 8-64 Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)
Sostituzione di un gene in un topo
1 volta su 1000 un
gene mutato
sostituisce per
ricombinazione
omologa una delle
copie del gene
normale
Figure 8-65 Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)
Topi transgenici ingegnerizzati in modo da esprimere una DNA
elicasi coinvolta nella trascrizione e nel riparo (Xpd) mutante
mostrano invecchiamento prematuro
Risultato: Un accumulo di mutazioni nel DNA può contribuire al
processo di invecchiamento nel topo come nell’uomo
Figure 8-66 Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)
Mutanti condizionali: Un enzima di ricombinazione sito-specifica può essere
usato per rimuovere un gene specifico da tessuti particolari di topo
Figure 5-79 Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)
Figure 5-79a Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)
Figure 5-79b Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)
L’interferenza da RNA (RNAi) è un metodo semplice e
rapido per controllare la funzione dei geni
•
L’RNAi sfrutta un meccanismo naturale usato in molti vegetali,
animali, funghi e protozoi per proteggere se stessi da virus ed
elementi trasponibili;
•
La tecnica introduce in una cellula o in un organismo una
molecola di RNA a doppio filamento la cui sequenza
nucleotidica corrisponde a quella di una parte del gene da
inattivare.
•
La RNAi è usata per inattivare geni in linee cellulari di
Drosophila e di mammifero
L’interferenza da RNA
Distruzione mRNA complementari
Silenziamento mediato da
cromatina
Figure 7-115 Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)
L’RNAi è stata utilizzata anche per studiare la funzione dei geni nel
nematode C.elegans
Figure 8-69a Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)
A) Embrione di C. elegans wt
poco dopo la fecondazione
dell’uovo. Il pronucleo
dell’uovo e quello dello
spermatozoo sono migrati
e si sono uniti nella metà
posteriore dell’embrione.
A
B
B) Embrione del verme allo
stesso stadio in cui un
gene coinvolto nella
divisione cellulare è stato
inattivato con RNAi. I due
pronuclei non sono riusciti
a migrare
Figure 8-69b,c Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)