of deterioration. The expiration date applies to the product in its intact container when stored as directed. Discard remaining portion of partially used ampule at end of workday. BactiDrop™ Oxidase (English) INTENDED USE Remel BactiDrop™ Oxidase is a reagent recommended for use in qualitative procedures for the detection of the enzyme cytochrome oxidase. SUMMARY AND EXPLANATION The oxidase test was originally devised to identify Neisseria species, but later was used to separate the Pseudomonadaceae from the oxidase-negative Enterobacteriaceae.1,2 Most gram-positive bacteria are oxidase-negative and many of the gram-negative bacilli, other than the Enterobacteriaceae, are variable.3 This formulation is based on the oxidase reagent formula of Kovacs.1 PRINCIPLE The oxidase test is based on the bacterial production of an intracellular oxidase enzyme. The oxidase reaction is due to the presence of a cytochrome oxidase system, which activates the oxidation of reduced cytochrome by molecular oxygen, which in turn acts as an electron acceptor in the terminal stage of the electron transfer system. Microorganisms which produce oxidase enzyme, when in the presence of atmospheric oxygen, cytochrome c, and phenylenediamine oxidase reagent, oxidize to form a purple colored compound, indophenol. Ascorbic acid is incorporated in the reagent as a reducing agent to reduce auto-oxidation and to improve stability.3 REAGENTS (CLASSICAL FORMULA)* N,N,N,N-tetramethyl-1,4-phenylenediamine (CAS 100-22-1) ................................................... 10.0 g Ascorbic Acid (CAS 50-81-7) ................................ 2.0 g Demineralized Water (CAS 7732-18-5) .......... 1000.0 ml *Adjusted as required to meet performance standards. PRECAUTIONS This product is For In Vitro Diagnostic Use and should be used by properly trained individuals. Precautions should be taken against the dangers of microbiological hazards by properly sterilizing specimens, containers, and media after use. Directions should be read and followed carefully. STORAGE This product is ready for use and no further preparation is necessary. Store product in its original container at 20-25°C until used. Do not freeze or overheat. Protect from light. PRODUCT DETERIORATION This product should not be used if (1) there is evidence of dehydration, (2) the color has changed, (3) the expiration date has passed, or (4) there are other signs SPECIMEN COLLECTION, STORAGE, TRANSPORT Specimens should be collected and handled following recommended guidelines.4 MATERIALS REQUIRED BUT NOT SUPPLIED (1) Loop sterilization device, (2) Inoculating loop, swabs, collection containers, (3) Incubators, alternative environmental systems, (4) Supplemental media, (5) Quality control organisms, (6) Whatman (No.1) filter paper or equivalent, (7) Platinum loop or needle, or wooden applicator stick. PROCEDURE Place dropper in the assembled, reusable ampule crusher provided. Hold the dropper/crusher in an upright position and lightly tap the bottom to dislodge any bubbles that may have formed. Grasp the middle of the dropper/crusher with the thumb and forefinger, and with the tip pointing away, press gently to crush the ampule. Invert dropper and squeeze slightly to dispense in a drop-wise fashion. Test Procedure: 1. Dispense 1-2 drops of reagent onto a strip of Whatman (No. 1) filter paper (or an equivalent). 2. Using a platinum loop or needle, or wooden applicator stick, smear the growth of an 18-24-hour old isolate onto the saturated filter paper. 3. Observe for color development within 10-30 seconds. INTERPRETATION Positive Test - Development of a violet to purple color within 10-30 seconds Negative Test - Delayed reaction or no color development within 10-30 seconds QUALITY CONTROL All lot numbers of BactiDrop™ Oxidase have been tested using the following quality control organisms and have been found to be acceptable. Testing of control organisms should be performed in accordance with established laboratory quality control procedures. If aberrant quality control results are noted, patient results should not be reported. CONTROL Neisseria sicca ATCC® 9913 INCUBATION RESULTS Aerobic, 30 Positive seconds @ 25°C Pasteurella multocida ATCC® 43137 Aerobic, 30 Positive seconds @ 25°C Positive Pseudomonas aeruginosa Aerobic, 30 seconds @ 25°C ATCC® 27853 Escherichia coli ATCC® 25922 Aerobic, 30 Negative seconds @ 25°C LIMITATIONS5 1. Select colonies for testing which have not been cultured on selective media or media containing glucose, as selective agents and fermentation may inhibit oxidase enzyme activity resulting in possible false-negative results. 2. Weak oxidase producers, such as Pasteurella, may appear negative within the time limits of the test. Results inconsistent with other biochemical reactions or with the organism should be repeated. 3. False negative results may occur if mixed cultures contain the two genera Pseudomonas and Neisseria. An inhibitory substance is produced by Pseudomonas species, which interferes with the production of oxidase by Neisseria species. 4. The oxidase reagent quickly auto-oxidizes and loses its sensitivity. Unused reagent should be discarded at the end of each workday. 5. The oxidase test is an oxidizing reaction; oxygen must reach the colonies for optimal results. 6. A platinum inoculating loop or needle, or a wooden applicator stick is recommended for use in oxidase testing.6 The presence of any trace of iron (nichrome) can catalyze an oxidase reaction, resulting in a false-positive reaction. BIBLIOGRAPHY 1. Kovacs, N. 1956. Nature. 178:703. 2. Cowan, S.T. and K.J. Steel. 1966. Manual for the Identification of Medical Bacteria. Cambridge University Press, Cambridge, UK. 3. Steel, K.J. 1962. J. Appl. Bacteriol. 25:445-455. 4. Murray, P.R., E.J. Baron, J.H. Jorgensen, M.A. Pfaller, and R.H. Yolken. 2003. Manual of Clinical Microbiology. 8th ed., Vol. 1. ASM, Washington, D.C. 5. MacFaddin, J.F. 2000. Biochemical Tests for Identification of Medical Bacteria. 3rd ed. Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, PA. 6. Steel, K.J. 1961. J. Gen. Microbiol. 25:297-306. PACKAGING BactiDrop™ Oxidase (0.75 ml/ampule): REF 21540............................................... 50 Ampules/Pk Symbol Legend REF Catalog Number IVD In Vitro Diagnostic Medical Device LAB For Laboratory Use Only Consult Instructions for Use (IFU) Temperature Limitation (Storage Temp.) LOT Batch Code (Lot Number) Use By (Expiration Date) EC REP European Authorized Representative BactiDrop™ is a trademark of Remel Inc. ATCC® is a registered trademark of American Type Culture Collection. CAS (Chemical Abstracts Service Registry No.) IFU 21540, Revised May 26, 2006 Printed in U.S.A. 12076 Santa Fe Drive, Lenexa, KS 66215, USA General Information: (800) 255-6730 Technical Service: (800) 447-3641 Order Entry: (800) 447-3635 Local/International Phone: (913) 888-0939 International Fax: (913) 895-4128 Website: www.remel.com Email: [email protected] BactiDrop™Oxydase (Français) INDICATION Le produit Oxydase BactiDrop™ de Remel est un réactif recommandé dans le cadre des procédures qualitatives de détection de l’enzyme cytochrome-oxydase. RÉSUMÉ ET EXPLICATION Au début , le test d’oxydase avait pour objet d’identifier toutes les espèces de Neisseria, mais il a fini par être utilisé pour distinguer les Pseudomonadaceae des Enterobacteriaceae négatives à l’oxydase.1,2 La plupart des bactéries à gram positif sont négatives à l’oxydase et un grand nombre de bacilles à gram négatif autres que les Enterobacteriaceae sont variables.3 Cette formulation s’appuie sur la formule de réactif oxydase de Kovacs.1 PRINCIPE Le test d’oxydase repose sur la production bactérienne d’une enzyme oxydase intra-cellulaire. La réaction à l’oxydase tient à la présence d’un système cytochromeoxydase qui active l’oxydation du cytochrome réduit par l’oxygène moléculaire qui, à son tour, agit comme électroaccepteur à la fin de la chaîne respiratoire. En présence d’oxygène atmosphérique, de cytochrome c et de réactif oxydase à base de phénylène-diamine, les microorganismes qui produisent l’enzyme oxydase s’oxydent pour former un composé de couleur violette, l’indophénol. De l’acide ascorbique est incorporé au réactif comme agent de réduction pour minimiser l’auto-oxydation et améliorer la stabilité.3 RÉACTIFS (FORMULE CLASSIQUE)* N,N,N,N-tétraméthyl-1,4-phénylène-diamine (CAS 100-22-1) ...................................................10,0 g Acide ascorbique (CAS 50-81-7) ..........................2,0 g Eau déminéralisée (CAS 7732-18-5) ..............1000,0 ml DÉTÉRIORATION DU PRODUIT Le produit ne doit pas être utilisé si (1) vous observez une déshydratation, (2) la couleur a changé, (3) la date de péremption est dépassée ou (4) d’autres signes de détérioration sont présents. La date de péremption s’applique au produit à condition que le récipient soit intact et qu’il soit stocké conformément aux instructions. À la fin de la journée de travail, le produit restant éventuellement dans l’ampoule doit être jeté. RECUEIL, STOCKAGE ET TRANSPORT DE PRÉLÈVEMENTS Les prélèvements doivent être recueillis et manipulés conformément aux recommandations en usage dans la profession.4 MATÉRIEL REQUIS NON FOURNI (1) Dispositif de stérilisation en boucle, (2) boucle à inoculation, écouvillon, récipients de prélèvement, (3) incubateurs, autres systèmes environnementaux, (4) milieux supplémentaires, (5) organismes de contrôle de qualité, (6) papier-filtre Whatman (n° 1) ou équivalent, (7) boucle ou aiguille en platine ou bâtonnet applicateur en bois. PROCÉDURE Placer le compte-gouttes dans le broyeur d’ampoules réutilisable fourni. Tenir bien droit l’ensemble comptegouttes/broyeur et tapoter légèrement le bas pour en déloger les bulles qui s’y sont éventuellement formées. Saisir l’ensemble compte-gouttes/broyeur par le milieu entre le pouce et l’index et, la pointe dirigée vers l’extérieur, appuyer doucement pour écraser l’ampoule. Retourner le compte-gouttes et appuyer sans excès pour dispenser les gouttes une à une. Procédure de l’analyse: 1. Verser 1 ou 2 gouttes de réactif sur une bande de papier-filtre Whatman nº 1 (ou équivalent). 2. À l’aide d’une boucle en platine ou d’une aiguille ou d’un bâtonnet applicateur en bois, étaler le résultat de croissance d’un isolat de 18 à 24 heures sur le papier-filtre saturé. *Avec compensations éventuelles pour satisfaire les normes de performance. 3. Observer l’apparition de couleur dans les 10 à 30 secondes. PRÉCAUTIONS Ce produit exclusivement destiné à un usage diagnostique in vitro ne doit être utilisé que par des personnes dûment formées. Toutes les précautions contre les risques microbiologiques doivent être prises et il est indispensable de bien stériliser les prélèvements, les récipients et les milieux moyens après usage. Toutes les instructions doivent être lues attentivement et soigneusement suivies. INTERPRÉTATION DU TEST Test Positif - Apparition de couleur allant du mauve au violet en 10 à 30 secondes Test Négatif - Réaction retardée ou aucune apparition de couleur dans les 10 à 30 secondes STOCKAGE Le produit est prêt à l’emploi et aucune préparation supplémentaire n’est nécessaire. Le conserver dans son conditionnement d’origine entre 20 et 25°C, jusqu’à son utilisation. Ne pas congeler ni surchauffer. Ne pas exposer à la lumière. CONTRÔLE QUALITÉ Tous les numéros de lots d’Oxydase BactiDrop™ ont été testés avec les organismes de contrôle de qualité suivants et reconnus acceptables. Les tests d’organismes de contrôle doivent satisfaire aux critères établis pour les procédures de contrôle qualité en laboratoire. En cas de résultats de contrôle qualité aberrants, Ne pas signaler les résultats du malade. CONTRÔLE Neisseria sicca ATCC® 9913 INCUBATION RÉSULTATS Aerobic, 30 Positive seconds @ 25°C Pasteurella multocida ATCC® 43137 Aerobic, 30 Positive seconds @ 25°C Pseudomonas aeruginosa ATCC® 27853 Escherichia coli ATCC® 25922 Aerobic, 30 Positive seconds @ 25°C Aerobic, 30 Negative seconds @ 25°C LIMITATIONS5 1. Sélectionner pour le test des colonies n’ayant pas été cultivées dans des milieux moyens sélectifs ou contenant du glucose, car les agents sélectifs et la fermentation risquent d’inhiber l’activité de l’enzyme oxydase, ce qui peut avoir pour conséquence des résultats faussement négatifs. 2. Les faibles producteurs d’oxydase, tels que Pasteurella, peuvent sembler négatifs dans le temps imparti au test, c’est pourquoi ce dernier doit être répété si les résultats obtenus ne concordent pas avec les autres réactions biochimiques ou sont anormaux pour l’organisme. 3. Des résultats faussement négatifs apparaissent parfois dans le cas de cultures non homogènes contenant les deux genres Pseudomonas et Neisseria. L’espèce Pseudomonas produit une substance inhibitricequi interfère avec la production d’oxydase par l’espèce Neisseria. 4. Le réactif oxydase subit une auto-oxydation rapide ainsi qu’une perte de sensibilité. Le réactif non utilisé doit être jeté à la fin de chaque jour de travail. 5. Le test d’oxydase consiste en une réaction d’oxydation; pour obtenir des résultats optimaux, il est indispensable que l’oxygène parvienne aux colonies. 6. Il est conseillé d’utiliser une boucle à inoculation en platine ou une aiguille ou un bâtonnet applicateur en bois pour le test.6 La présence de la moindre trace de fer (nichrome) peut catalyser une réaction à l’oxydase et entraîner des résultats faussement positifs. BIBLIOGRAPHIE 1. Kovacs, N. 1956. Nature. 178:703. 2. Cowan, S.T. and K.J. Steel. 1966. Manual for the Identification of Medical Bacteria. Cambridge University Press, Cambridge, UK. 3. Steel, K.J. 1962. J. Appl. Bacteriol. 25:445-455. 4. Murray, P.R., E.J. Baron, J.H. Jorgensen, M.A. Pfaller, and R.H. Yolken. 2003. Manual of Clinical Microbiology. 8th ed., Vol. 1. ASM, Washington, D.C. 5. MacFaddin, J.F. 2000. Biochemical Tests for Identification of Medical Bacteria. 3rd ed. Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, PA. 6. Steel, K.J. 1961. J. Gen. Microbiol. 25:297-306. CONDITIONNEMENT BactiDrop™ Oxydase (0,75 ml/ampoule): REF 21540.......................................50 ampoules/paquet Légende des Symboles REF Numéro de référence IVD Dispositif médical de diagnostic in vitro LAB Pour l ‘usage de laboratoire Lire les instructions avant utilisation (IFU = mode d’emploi) Limites de température (stockage) LOT Code de lot (numéro) À utiliser avant le (date de péremption) EC REP Représentant autorisé pour l'UE BactiDrop™ est une marque de commerce de Remel Inc. ATCC® est une marque déposée d’American Type Culture Collection. CAS (numéro de registre CAS). IFU 21540, révisé le 2006-05-26 Imprimé aux Etats-Unis 12076 Santa Fe Drive, Lenexa, KS 66215, États-Unis Renseignements: (800) 255-6730 Service technique: (800) 447-3641 Service commercial: (800) 447-3635 Téléphone local/international: +1 913 888-0939 Télécopie (international): + 1 913 895-4128 Site Web: www.remel.com E-mail: [email protected] BactiDrop™ Oxidase (Deutsch) INDIKATION BactiDrop™ Oxidase von Remel ist ein Reagens, das für die Verwendung in qualitativen Verfahren zum Nachweis von Zytochromoxidase empfohlen wird. ZUSAMMENFASSENDE ERKLÄRUNG Ursprünglich wurde der Oxidasenachweis für die Bestimmung aller Neisseria-Gattungen entwickelt, er wurde aber später ausschließlich zur Unterscheidung von Pseudomonadaceae und der oxidase-negativen Enterobacteriaceae verwendet.1,2 Die meisten grampositiven Bakterien sind oxidase-negativ und viele der gram-negativen Gattungen verhalten sich mit Ausnahme von Enterobacteriaceae nicht einheitlich.3 Diese Rezeptur beruht auf dem Oxidasereagens nach Kovacs.1 PRINZIP Der Oxidasenachweis beruht auf der Bakterienproduktion eines intrazellulären Oxidaseenzyms. Die Oxidasereaktion findet in der Gegenwart einer Zytochromoxidase statt, durch die die Oxidation von reduziertem Zytochrom durch molekulares Sauerstoff aktiviert wird. Letzteres wiederum übernimmt im letzten Stadium der Elektronenübertragungsreaktion die Rolle des Elektronenakzeptors. Mikroorganismen, die in der Gegenwart von Luftsauerstoff, Zytochrom c und dem Phenylendiaminoxidase-Reagens Oxidase bilden, werden zu einer violetten Verbindung, Indophenol, oxidiert. Darüber hinaus enthält das Reagens reduzierende Ascorbinsäure, um Autooxidationsvorgänge zu minimieren und die Stabilität zu erhöhen.3 REAGENZIEN (KLASSISCHE FORMEL)* N,N,N,N-Tetramethyl-1,4-phenylendiamin (CAS 100-22-1) ....................................................10,0 g Ascorbinsäure (CAS 50-81-7) ................................2,0 g Vollentsalztes Wasser (CAS 7732-18-5)..........1000,0 ml *Angepasst, um die Anforderungen erforderlicher Leistungsstandards zu erfüllen. VORSICHTSMASSNAHMEN Dieses Produkt ist zur In-vitro-Diagnostik vorgesehen und sollte von entsprechend geschulten Personen eingesetzt werden. Mikrobiologischen Gefahren sollte vorgebeugt werden, indem Proben, Behälter und Medien nach dem Gebrauch sterilisiert werden. Die gegebenen Anweisungen sollten aufmerksam gelesen und genau befolgt werden. LAGERUNG Dieses Produkt ist gebrauchsfertig. Das Produkt ist bis zur Verwendung bei 20-25°C in dem Originalbehälter aufzubewahren. Nicht einfrieren oder überhitzen. Vor Licht schützen. PRODUKTBEEINTRÄCHTIGUNG Dieses Produkt darf nicht angewendet werden, falls (1) Dehydrierung auftritt, (2) Farbveränderungen eingetreten sind, (3) das Verfallsdatum überschritten wurde oder (4) andere Anzeichen einer Beeinträchtigung des Produkts erkennbar sind. Das Verfallsdatum gilt unter der Voraussetzung, dass sich das Produkt im Originalbehälter befindet und gemäß den Anleitungen aufbewahrt wird. Reste teilweise verbrauchter Ampullen sind am Ende des Arbeitstages zu vernichten. PROBENENTNAHME, LAGERUNG UND TRANSPORT Die Probenentnahme und -handhabung sollte unter Berücksichtigung der folgenden empfohlenen Richtlinien durchgeführt werden.4 ERFORDERLICHE MATERIALIEN, DIE NICHT IM LIEFERUMFANG ENTHALTEN SIND (1) Sterilisationsgerät mit Schlinge (2) Inokulationsschlinge, Abstrichbesteck, Probenbehälter, (3) Inkubatoren, andere Klimasysteme, (4) zusätzliche Medien, (5) Kontrollorganismen, (6) Whatman-Filterpapier (Nr. 1) oder entsprechend, (7) Platinschlinge oder -nadel bzw. Abstrichtupfer mit Holzstiel. VERFAHREN Die Pipette in die mitgelieferte, vormontierte und wiederverwendbare Brechvorrichtung für Ampullen geben. Die Anordnung aus Pipette und Brechvorrichtung aufrecht halten und vorsichtig gegen den unteren Teil klopfen, um etwaige Blasen zu entfernen. Den mittleren Teil der Anordnung aus Pipette und Brechvorrichtung mit Daumen und Zeigefinger erfassen und die Ampulle vorsichtig durchbrechen. Die Ampulle sollte dabei vom Körper weg zeigen. Die Pipette umdrehen und leicht drücken, um die Flüssigkeit tropfenweise zu dosieren. Testverfahren: 1. Ein bis zwei Tropfen des Reagens auf einen Streifen Whatman-Filter (Nr. 1) oder einen vergleichbaren Filter geben. 2. Die Kultur eines 18 bis 24 Stunden alten Isolats mit einer Platinschlinge oder -nadel bzw. einem Abstrichtupfer mit Holzstiel auf dem gesättigten Filterpapier ausstreichen. 3. Für 10 bis 30 Sekunden auf Farbentwicklung prüfen. AUSWERTUNG DES TESTS Positiver Nachweis: Violette bis purpurrote Farbentwicklung innerhalb von 10 bis 30 Sekunden Negativer Nachweis: Keine Farbentwicklung innerhalb von 10 bis 30 Sekunden oder verspätete Farbentwicklung QUALITÄTSKONTROLLE Alle Chargen von BactiDrop™ Oxidase wurden mit den folgenden Kontrollorganismen geprüft und als tauglich befunden. Die im Rahmen der Qualitätssicherung durchgeführten Tests mit Kontrollorganismen sollten die Anforderungen anerkannter Qualitätssicherungsverfahren für Labore erfüllen. Treten im Rahmen der Qualitätssicherung abweichende Ergebnisse auf, sollten die Ergebnisse des Patienten nicht verwertet werden. KONTROLLE Neisseria sicca ATCC® 9913 INKUBATION aerob, 30 s bei 25 °C ERGEBNISSE positiv Pasteurella multocida ATCC® 43137 aerob, 30 s bei 25 °C positiv Pseudomonas aeruginosa ATCC® 27853 aerob, 30 s bei 25 °C positiv Escherichia coli ATCC® 25922 aerob, 30 s bei 25 °C negativ EINSCHLRÄNKUNGEN5 1. Verwenden Sie für den Nachweis Kolonien, die nicht auf selektiven oder glucose-haltigen Medien gezüchtet wurden, da die Oxidaseaktivität durch selektive Agenzien und Fermentationsprozesse gehemmt werden kann, was zu falsch-negativen Ergebnissen führen kann. 2. Organismen wie Pasteurella, die nur wenig Oxidase bilden, können in der für den Nachweis vorgegebenen begrenzten Zeit negativ ausfallen. Testergebnisse, die mit anderen biochemischen Reaktionen oder dem Organismus in Widerspruch stehen, sollten wiederholt werden. 3. Mischkulturen, die sowohl Pseudomonas als auch Neisseria enthalten, können zu falsch-negativen Ergebnissen führen. Die Gattung Pseudomonasbildet einen Hemmstoff, der die durch Neisseriaverursachte Oxidaseproduktion beeinträchtigt. 4. Das Oxidasereagens wird schnell autooxidiert und verliert seine Empfindlichkeit. Reagenzreste sollten am Ende eines Arbeitstages entsorgt werden. 5. Da der Oxidasenachweis auf einer Oxidationsreaktion beruht, müssen die Kolonien zum Erzielen optimaler Ergebnisse mit ausreichend Sauerstoff versorgt werden. 6. Für Oxidasenachweise sollte eine Platinöse oder nadel bzw. ein Abstrichtupfer mit Holzstiel verwendet werden.6 Die Gegenwart von Eisenspuren (Nichrom) kann eine Oxidasereaktion katalysieren und somit zu einer falsch-negativen Reaktion führen. BIBLIOGRAPHIE 1. Kovacs, N. 1956. Nature. 178:703. 2. Cowan, S.T. and K.J. Steel. 1966. Manual for the Identification of Medical Bacteria. Cambridge University Press, Cambridge, UK. 3. Steel, K.J. 1962. J. Appl. Bacteriol. 25:445-455. 4. Murray, P.R., E.J. Baron, J.H. Jorgensen, M.A. Pfaller, and R.H. Yolken. 2003. Manual of Clinical Microbiology. 8th ed., Vol. 1. ASM, Washington, D.C. 5. MacFaddin, J.F. 2000. Biochemical Tests for Identification of Medical Bacteria. 3rd ed. Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, PA. 6. Steel, K.J. 1961. J. Gen. Microbiol. 25:297-306. VERPACKUNG BactiDrop™ Oxidase (0,75 ml/Ampulle): REF 21540........................................... 50 Ampullen/Pkg. Verwendete Symbole REF Katalognummer IVD In-Vitro-Diagnostikum LAB Für Laborgebrauch In der Packungsbeilage (IFU) nachlesen Temperatureinschränkungen (Lagertemperatur) LOT Chargencode (Lotnummer) “Verwendbar bis” (Verfallsdatum) EC REP Autorisierte Vertretung für U-Länder BactiDrop™ ist ein Warenzeichen von Remel Inc. ATCC® ist ein eingetragenes Warenzeichen von American Type Culture Collection. CAS (Chemical Abstracts Service) IFU 21540, Version vom 2006-05-26 Gedruckt in den USA 12076 Santa Fe Drive, Lenexa, KS 66215, USA Allgemeine Informationen: (800) 255-6730 Technischer Service: (800) 447-3641 Bestellannahme: (800) 447-3635 Lokale/Internationale Telefon-Nr.: (913) 888-0939 Internationale Fax-Nr.: (913) 895-4128 Website: www.remel.com Email: [email protected] BactiDrop™ Oxidase (Italiano) USO PREVISTO BactiDrop™ Oxidase di Remel è un reagente raccomandato per l’uso in procedure qualitative per il rilevamento dell’enzima citocromo-ossidasi. DESCRIZIONE DEL PRODOTTO Il test dell’ossidasi è stato originariamente concepito per identificare tutte le specie di Neisseria, ma successivamente è stato usato per separare le Pseudomonadaceae dalle Enterobacteriaceae1,2 a ossidasi negativa. Gran parte dei batteri gram-positivi sono ossidasi negativi e numerosi batteri gram-negativi, diversi dalle Enterobacteriaceae, sono variabili.3 Questa formula è basata sulla formula del reagente per ossidasi di Kovacs.1 PRINCIPIO Il test dell’ossidasi si basa sulla produzione batterica di un enzima per ossidasi intracellulare. La reazione all’ossidasi è dovuta alla presenza di un sistema di citocromo-ossidasi che attiva l’ossidazione del citocromo ridotto tramite ossigeno molecolare, che a sua volta funge da accettore di elettroni nello stadio terminale del sistema di trasferimento degli elettroni. Microrganismi che producono l’enzima per ossidasi, quando sono in presenza di ossigeno atmosferico, citocromo c e del reagente per ossidasi fenilenediamina, si ossidano formando un composto color porpora, l'indofenolo. L’acido ascorbico è incorporato nel reagente come agente riducente per ridurre l’auto-ossidazione e migliorare la stabilità .3 REAGENTI (FORMULA CLASSICA)* N,N,N,N-tetrametile-1,4-fenilenediamina (CAS 100-22-1) ................................................... 10.0 g Acido Ascorbico (CAS 50-81-7) ............................ 2.0 g Acqua Demineralizzata (CAS 7732-18-5) ....... 1000.0 ml *La formulazione è regolata in base ai criteri di esecuzione richiesti. PRECAUZIONI Il prodotto è indicato esclusivamente per Uso diagnostico in vitro e deve essere utilizzato solo da personale competente ed esperto. Si raccomanda di adottare le dovute precauzioni contro eventuali rischi microbiologici sterilizzando opportunamente dopo l'uso campioni, contenitori e strumenti. Leggere con attenzione le istruzioni contenute in questo documento e attenervisi scrupolosamente. CONDIZIONI DI CONSERVAZIONE Questo prodotto è pronto per l'uso e non necessita di ulteriore preparazione. Conservare il prodotto nel suo contenitore originale ad una temperatura di 20-25°C fino al momento dell'utilizzo. Non congelare né surriscaldare. Proteggere il prodotto dalla luce. DETERIORAMENTO DEL PRODOTTO Non utilizzare il prodotto (1) in presenza di segni evidenti di disidratazione, (2) se ha cambiato colore, (3) oltre la data di scadenza o (4) in presenza di altri segni di deterioramento. La data di scadenza del prodotto è considerata valida se il contenitore è integro e se il prodotto viene conservato secondo le indicazioni. Gettare la parte restante della fiala parzialmente utilizzata alla fine del giorno di lavoro. RACCOLTA, CONSERVAZIONE E TRASPORTO DEI CAMPIONI Prelevare e trattare i campioni attenendosi le linee guida raccomandate.4 MATERIALE NECESSARIO MA NON FORNITO (1) Dispositivo di sterilizzazione per anse, (2) ansa per inoculo, tampone, contenitori di raccolta, (3) termostato o sistemi per la formazione di atmosfere modificate, (4) terreni di coltura supplementari, (5) microrganismi per il controllo qualità, (6) carta da filtro Whatman (n. 1) o equivalente, (7) ansa o ago in platino o bastoncino applicatore in legno. PROCEDIMENTO Posizionare il contagocce nello strumento aprifiale montato e riutilizzabile fornito in dotazione. Tenere il contagocce/strumento aprifiale in posizione verticale e picchiettare leggermente la parte inferiore per eliminare eventuali bolle. Afferrare la parte centrale del contagocce/ strumento aprifiale con il pollice e l’indice e, con la punta orientata verso l’esterno, premere delicatamente per aprire la fiala. Capovolgere il contagocce e premere leggermente per una distribuzione goccia a goccia. Procedura del test: 1. Applicare 1-2 gocce di reagente su una striscia di carta da filtro Whatman (n. 1) (o equivalente). 2. Con un’ansa o un ago di platino o con un bastoncino applicatore in legno, strisciare la crescita del ceppo batterico isolato vecchio di 18-24 ore sulla carta da filtro satura. 3. Osservare lo sviluppo del colore entro 10-30 secondi. INTERPRETAZIONE DEL TEST Test Positivo - Sviluppo di un colore da violetto a porpora entro 10-30 secondi Test Negativo - Reazione ritardata o nessuno sviluppo di colorazione entro 10-30 secondi CONTROLLO QUALITÀ Ogni lotto di BactiDrop™ Oxidase è stato sottoposto a controllo qualità con i microrganismi di seguito indicati ottenendo risultati ritenuti soddisfacenti. I test di controllo qualità devono essere eseguiti in conformità con le procedure di controllo qualità definite dal laboratorio. Se i test di controllo qualità forniscono risultati aberranti, i risultati ottenuti con i campioni in esame non devono essere refertati. CONTROLLO Neisseria sicca ATCC® 9913 INCUBAZIONE Aerobica, 30 secondi a 25 °C RISULTATO Positivo Pasteurella multocida ATCC® 43137 Aerobica, 30 secondi a 25 °C Positivo Pseudomonas aeruginosa ATCC® 27853 Aerobica, 30 secondi a 25 °C Positivo Escherichia coli ATCC® 25922 Aerobica, 30 secondi a 25 °C Negativo LIMITAZIONI5 1. Selezionare colonie da sottoporre a test non coltivate su terreni selettivi o terreni contenenti glucosio, poiché gli agenti selettivi e la fermentazione possono inibire l’attività dell’enzima per ossidasi producendo possibili risultati falsonegativi. 2. Inefficaci produttori di ossidasi, quali ad es. Pasteurella, possono sembrare negativi entro i limiti di tempo del test. I risultati incompatibili con altre reazioni biochimiche o con il microrganismo devono essere ripetuti. 3. Se le colture contengono i due generi Pseudomonas e Neisseria, si possono ottenere risultati falso-negativi. La specie Pseudomonas produce una sostanza inibitoria che interferisce con la produzione di ossidasi da parte della specie Neisseria. 4. Il reagente dell’ossidasi si auto-ossida rapidamente perdendo sensibilità. Un reagente inutilizzato deve essere gettato alla fine del giorno di lavoro. 5. Il test dell’ossidasi è una reazioni ossidante; per ottenere risultati ottimali, l’ossigeno deve raggiungere le colonie. 6. Si raccomanda di usare un’ansa o un ago di inoculazione al platino o un bastoncino applicatore in legno per il test dell’ossidasi.6 La presenza di tracce di ferro (nicromo) può catalizzare una reazione all’ossidasi, producendo una reazione falso-positiva. BIBLIOGRAFIA 1. Kovacs, N. 1956. Nature. 178:703. 2. Cowan, S.T. and K.J. Steel. 1966. Manual for the Identification of Medical Bacteria. Cambridge University Press, Cambridge, UK. 3. Steel, K.J. 1962. J. Appl. Bacteriol. 25:445-455. 4. Murray, P.R., E.J. Baron, J.H. Jorgensen, M.A. Pfaller, and R.H. Yolken. 2003. Manual of Clinical Microbiology. 8th ed., Vol. 1. ASM, Washington, D.C. 5. MacFaddin, J.F. 2000. Biochemical Tests for Identification of Medical Bacteria. 3rd ed. Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, PA. 6. Steel, K.J. 1961. J. Gen. Microbiol. 25:297-306. CONFEZIONE BactiDrop™ Oxidase (0,75 ml/fiala): REF 21540..........................................50 fiale/confezione Spiegazioni dei Simboli REF Codice numero IVD Dispositivo per uso diagnostico in vitro LAB Per uso del laboratorio Consultare le istruzioni per l'uso (IFU) Limitazioni per temperatura (Temp. di conservazione) LOT Codice lotto (Numero Lotto) Da utilizzare entro (data di scadenza) EC REP Rappresentante autorizzato per l'Europa BactiDrop™ è un marchio di fabbrica di Remel Inc. ATCC® è un marchio registrato di American Type Culture Collection. CAS (Numero del registro del Chemical Abstract Service) IFU 21540, data ultima revisione: 2006-05-26 Stampato negli U.S.A. 12076 Santa Fe Drive, Lenexa, KS 66215, USA Informazioni generali: (800) 255-6730 Assistenza tecnica: (800) 447-3641 Per ordinazioni: (800) 447-3635 N. di telefono nazionale/internazionale: (913) 888-0939 Fax internazionale: (913) 895-4128 Sito Internet: www.remel.com E-mail: [email protected] (Español) DETERIORO DEL PRODUCTO Este producto no debe utilizarse si (1) hay pruebas de deshidratación, (2) el color ha cambiado, (3) la fecha de caducidad ha pasado ó (4) hay otros signos de deterioro. La fecha de caducidad se refiere a este producto cuando está en su envase intacto y se almacena según las instrucciones. Desechar la porción restante de la ampolla parcialmente utilizada al final del día de trabajo. USO PREVISTO BactiDrop™ Oxidase de Remel está recomendada en procedimientos cualitativos, para la detección de la enzima citocromo oxidasa. OBTENCIÓN, ALMACENAMIENTO Y TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS Las muestras se deben usar y manipular de acuerdo con las siguientes recomendaciones.4 BactiDrop™ Oxidase RESUMEN Y EXPLICACIÓN La prueba de oxidasa se diseñó originalmente para identificar todas las especies de Neisseria, pero después se utilizó para separar Pseudomonadaceae de Enterobacteriaceae oxidasa negativas.1,2 La mayoría de las bacterias grampositivas son oxidasa negativas y muchos de los bacilos gramnegativos, aparte de Enterobacteriaceae, son variables.3 Esta formulación se basa en la fórmula del reactivo oxidasa de Kovacs.1 PRINCIPIO La prueba de oxidasa se basa en la producción bacteriana de una enzima oxidasa intracelular. La reacción de oxidasa se debe a la presencia de un sistema citocromo oxidasa que activa la oxidación de citocromo reducido con oxígeno molecular, que a su vez actúa como aceptor de electrones en la etapa terminal del sistema de transferencia de electrones. Los microorganismos que producen enzima oxidasa, en presencia de oxígeno atmosférico, citocromo C y reactivo fenilendiamina oxidasa, dan una reacción de oxidación para formar un compuesto de color púrpura, indofenol. El ácido ascórbico se incorpora en el reactivo como agente reductor, para reducir la autoxidación y mejorar la estabilidad.3 REACTIVOS (FÓRMULA CLÁSICA)* N,N,N,N-tetrametil-1,4-fenilenediamina (CAS 100-22-1) ...................................................10,0 g Ácido ascórbico (CAS 50-81-7).............................2,0 g Agua desmineralizada (CAS 7732-18-5) ........1000,0 ml *Ajustado según necesidades para cumplir los estándares de funcionamiento. PRECAUCIONES Este producto sólo es para uso diagnóstico in vitro y debe ser utilizado por personal con la formación adecuada. Se tomarán precauciones frente a los riesgos microbiológicos, esterilizando correctamente las muestras, envases y medios después de su uso. Se deben leer y seguir atentamente las instrucciones. ALMACENAMIENTO Este producto está listo para su uso y no se necestia más preparación. Guardar el producto en su envase original a 20-25ºC hasta que se use. No congelar ni sobrecalentar. Protegerlo de la luz. MATERIALES NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS (1) Asa para esterilización, (2) asa de inoculación, torunda y envases para recogidas, (3) incubadoras, sistemas ambientales alternativos, (4) medio complementario, (5) microorganismos para el control de calidad, (6) papel de filtro Whatman (Nº 1) o equivalente, y (7) asa o aguja de platino o varilla aplicadora de madera. PROCEDIMIENTO Colocar el cuentagotas en el triturador de la ampolla reutilizable, que se suministra ya montado. Mantener el cuentagotas/triturador en posición vertical y golpear suavemente la base para desprender las burbujas que pudieran haberse formado. Sujetar la parte media del cuentagotas/triturador con el pulgar y el índice y, apartando la punta, presionar suavemente para triturar la ampolla. Invertir el cuentagotas y apretar suavemente para dispensar gota a gota. Procedimiento de análisis: 1. Dispensar 1 a 2 gotas de reactivo en una tira de papel de filtro Whatman (Nº 1) (o equivalente). 2. Con un asa o aguja de platino, o con una varilla aplicadora de madera, hacer un frotis en el papel de filtro saturado con un aislado de 18 a 24 horas. 3. Observar el desarrollo de color al cabo de 10 a 30 segundos. INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS Prueba Positiva: Aparición de un color violeta o púrpura antes de 10 a 30 segundos Prueba Negativa: Reacción diferida o sin cambio de color en 10 a 30 segundos CONTROL DE CALIDAD Todos los lotes de BactiDrop™ Oxidase se han estudiado usando los siguientes microorganismos de control de calidad, y los resultados son aceptables. El estudio de los microorganismos de control se debe realizar de acuerdo con los procedimientos de control de calidad establecidos en el laboratorio. Si se observan resultados anómalos en el control de calidad, no se informará de los resultados de ese paciente. CONTROL Neisseria sicca ATCC® 9913 INCUBACIÓN Aerobiosis, 30 segundos a 25°C RESULTADOS Positivo Pseudomonas aeruginosa ATCC® 27853 Aerobiosis, 30 segundos a 25°C Positivo Pasteurella multocida ATCC® 43137 Aerobiosis, 30 segundos a 25°C Positivo Escherichia coli ATCC® 25922 Aerobiosis, 30 segundos a 25°C Negativo LIMITACIONES5 1. Seleccionar para el estudio colonias que no se hayan cultivado en un medio selectivo o en un medio con glucosa, ya que los agentes selectivos y la fermentación pueden inhibir la actividad de la enzima oxidasa y dar resultados falsos negativos. 2. 3. 4. Los productores débiles de oxidasa, como Pasteurella, pueden aparecer negativos en los límites de tiempo de la prueba. Se deben repetir los resultados no compatibles con otras reacciones bioquímicas o con el microorganismo. Pueden darse resultados falsos negativos si los cultivos mixtos contienen los dos géneros Pseudomonas y Neisseria. Las especies de Pseudomonas producen una sustancia inhibitoria que interfiere con la producción de oxidasa por las especies de Neisseria. El reactivo oxidasa se autooxida rápidamente y pierde su sensibilidad. Los reactivos no utilizados deben desecharse al final de cada jornada. 5. La prueba de oxidasa es una reacción de oxidación; para obtener resultados óptimos, el oxígeno debe alcanzar las colonias. 6. Para la prueba de oxidasa se recomienda usar un asa o aguja de platino, o una varilla aplicadora de madera.6 La presencia de restos de hierro (nicromo) puede catalizar una reacción de oxidación y dar un resultado falso positivo. BIBLIOGRAFÍA 1. Kovacs, N. 1956. Nature. 178:703. 2. Cowan, S.T. and K.J. Steel. 1966. Manual for the Identification of Medical Bacteria. Cambridge University Press, Cambridge, UK. 3. Steel, K.J. 1962. J. Appl. Bacteriol. 25:445-455. 4. Murray, P.R., E.J. Baron, J.H. Jorgensen, M.A. Pfaller, and R.H. Yolken. 2003. Manual of Clinical Microbiology. 8th ed., Vol. 1. ASM, Washington, D.C. 5. MacFaddin, J.F. 2000. Biochemical Tests for Identification of Medical Bacteria. 3rd ed. Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, PA. 6. Steel, K.J. 1961. J. Gen. Microbiol. 25:297-306. ENVASADO BactiDrop™ Oxidase (0,75 ml/ampolla): REF 21540....................................... 50 ampollas/envase Símbolos REF Número de catálogo IVD Dispositivo médico para diagnóstico in vitro LAB Para el uso del laboratorio Consulte las instrucciones de uso Límite de temperatura (Temp. de almacenamiento) LOT Código de lote (Número de lote) Fecha de caducidad EC REP Representante autorizado en Europa BactiDrop™ es una marca comercial de Remel Inc. ATCC® es una marca registrada de American Type Culture Collection. CAS (Nº del Chemical Abstracts Service Registry) IFU 21540, Revisado el 2006-05-26 Impreso en los EE.UU. 12076 Santa Fe Drive, Lenexa, KS 66215, EE.UU. Información General: (800) 255-6730 Servicio Técnico: (800) 447-3641 Pedidos: (800) 447-3635 Teléfono nacional/internacional: (913) 888-0939 Fax internacional: (913) 895-4128 Internet: www.remel.com Correo electrónico: [email protected]