Colture cellulari UTILIZZO DELLE COLTURE CELLULARI • Elettrofisiologia • Studio dei recettori • Modelli di morte cellulare • Farmaci CELLULE CONNETTIVALI Fibroblasti Osteociti Condrociti Adipociti CELLULE MUSCOLARI Miocardiociti Cellule muscolari scheletriche Cellule muscolari lisce CELLULE NERVOSE Glia Neuroni CELLULE EPITELIALI Epatiche Alveolari Bronchiali Cutanee Vescicali Renali CELLULE VARIE Endocrine Tumorali Endoteliali FATTORI SPERIMENTALI CHE FAVORISCONO: La proliferazione: bassa densità cellulare bassa concentrazione di Ca++ fattori di crescita La differenziazione: alta densità cellulare alta concentrazione di Ca++ ormoni NGF COLTURE PRIMARIE (appena isolate) linee cellulari o sottocolture COLTURA CONTINUA O IMMORTALE (più facili da coltivare, instabili geneticamente, possono essere diverse dalle cellule di origine) COLTURE NEOPLASTICHE (elevata capacità di riproduzione, molto simili alle cellule da cui originano) Componenti del siero Albumina Funzioni note o presunte Trasporto molecole biologiche Fibronectina Adesione cellulare Alfa-2-macroglobulina Inibizione tripsina Transferrina Trasporto ferro Ormoni Controllo di funzioni metaboliche Fattori di crescita Insulin-like growth factors (IGF), platlet derived growth factor (PDGF), Somatomedina, Epidermal growth factor (EGF), Endothelial growth factor (EGF), fibroblast growth factor (FGF),ecc. Lipidi e acidi grassi, Minerali, Metaboliti, Polipeptidi ADESIONE CELLULARE • Polilisina • Collagene • Fibronectina PREPARAZIONE DI COLTURE • PRELIEVO TESSUTO (COLTURE PRIMARIE) • INCUBAZIONE • RIMOZIONE E LAVAGGIO • DISTRIBUZIONE SU PIASTRA (1.00010.000) • CRESCITA PLASTICHE PER COLTURE CELLULARI Per effettuare il conteggio: dopo aver pulito la camera, montata correttamente, depositato un dato volume di cellule, al microscopio si contano le cellule presenti nei quadrati delimitati da una doppia barra Resistenza elettrica Le cellule sono dei cattivi conduttori di elettricità e oppongono resistenza al passaggio della corrente elettrica. Il contatore Coulter è una apparecchiatura in cui una sospensione cellulare viene fatta passare attraverso una sottilissima fessura su entrambi i lati della quale sono posti degli elettrodi. Una cellula che si frapponga tra i due elettrodi impedisce il passaggio della corrente e determina una caduta di voltaggio che viene registrata sotto forma di un impulso la cui altezza è proporzionale al volume della cellula. Contando gli impulsi e la loro forma, tale sistema consente di determinare il numero e le dimensioni delle cellule presenti in una data sospensione. Non si distinguono le cellule vive da quella morte e i valori sono quindi riferiti a conte totali. Elutriator CONTAMINAZIONE • BATTERICA • VIRALE • MICOPLASMA Controllo della vitalità cellulare • Coloranti • Respirazione cellulare • Incorporazione timidina marcata • Incorporazione leucina marcata Dove trovare le linee cellulari •Produzione in laboratorio •Banche cellule–European Collection of Cell Culture www.ecacc.org.uk –AmericanTissueCultureCentre (USA) www.atcc.org –National Cell Culture Center (USA) www.nccc.com –German Collection of Microorganism and Cell Culture www.dsmz.de –IZS Centro Substrati Cellulari www.bs.izs.it –IST Servizio Biotecnologie www.biotech.ist.unige.it Conservazione di linee cellulari