Levaduras en la producción del Aceto Balsamico Tradizionale Paolo Giudici Universidad de Modena y Reggio Emilia Jornada puertas abiertas: “Actualización en la elaboración de vinagres” Principali specie di lievito isolate da mosto cotto per la produzione di ABT Specie Zygosaccharomyces bailii Zygosaccharomyces rouxii Saccharomycodes ludwigii Zygosaccharomyces bisporus Zygosaccharomyces lentus Zygosaccharomyces mellis Zygosaccharomyces pseudorouxii Saccharomyces cerevisiae Candida stellata Candida lactis-condensi Hanseniaspora osmophila Hanseniaspora valbyensis Riferimento Turtura,1984; Giudici P., 1990; Giudici et al., 1992; Solieri et al. 2005a Solieri et al. 2005b Giudici P. 1990; Giudici et al., 1992; Solieri et al. 2005a; Solieri et al. 2005b Giudici P., 1990; Giudici et al., 1992; Solieri et al 2005a Turtura,1984; Giudici P., 1990; Solieri et al. 2005a; Solieri et al. 2005b Solieri et al. 2005a Solieri et al. 2005a; Solieri et al. 2005b Solieri et al. 2005a;Solieri et al. 2005b Solieri et al. 2005a; Solieri et al. 2005b Solieri et al. 2005a; Solieri et al. 2005b Solieri et al. 2005a; Solieri et al. 2005b Solieri et al. 2005a; Solieri et al. 2005b Solieri et al. 2005a; Solieri et al. 2005b 1 Zigosaccharomyces bailii Hanseniaspora osmophila Candida lactis-condensi Zygosaccharomyces pseudorouxii Zigosaccharomyces bisporus Saccharomyces cerevisiae Zigosaccharomyces mellis Hanseniaspora rabuliensi 2 Zygosaccharomyces rouxii Candida stellata Principali caratteri di fitness e di qualità impiegati nella selezione di lieviti starter per la produzione di ABT Caratteri di fitness Vigore fermentativo Basso tempo di generazione Potere alcoligeno Osmotolleranza Criotolleranza Tolleranza all’acido acetico Caratteri di qualità Metabolismo glucosofilo Alta produzione di acidità fissa Alta produzione di acido acet ico Stimolo alla crescita dei batteri acetici 3 Valutazione dell’energia fermentativa, del potere alcoligeno e degli zuccheri residui di dieci specie di lievito isolate da mosti cotti in fermentazione (dove più di un ceppo è presente i valori sono quelli medi) n° energia fermentativa * potere alcoligeno ** zuccheri residui*** ceppi g/100ml alcool v/v g/l specie Candida lactis-condensi 1 Candida stellata 2 Hanseniaspora osmophila 1 Hanseniaspora valbyensis 1 Saccharomyces cerevisiae 7 Zygosaccharomyces bailii 20 Zygosaccharomyces bisporus 1 Zygosaccharomyces mellis 3 350 g/l 1,8 1,8 1,4 1,1 2,0 0,6 0,5 0,4 0,3 0,4 Zygosaccharomyces pseudoruxii 4 1 Zygosaccharomyces rouxii 400 g/l 1,9 1,7 1,5 0,9 1,9 0,7 0,4 0,4 0,2 0,4 450 g/l 0,8 0,6 0,7 0,6 1,0 0,4 0,3 0,3 0,3 0,4 350 400 450 glu g/l g/l g/l cosio 7,4 8,2 7,3 171,7 7,3 7,8 6,8 151,8 5,0 5,3 4,4 98,5 5,4 5,2 4,0 101,2 8,6 8,2 5,9 42,3 7,0 7,2 5,9 138,6 5,8 6,1 4,6 155,8 5,7 6,0 5,7 175,6 6,3 6,5 6,3 159,9 5,3 5,7 5,3 160,6 fruttosio 1,4 9,7 133,9 127,3 96,4 15,0 51,1 35,8 29,8 53,2 *) energia fermentativa espressa come grammi di CO2 liberata per 100/ml di mosto dopo 48 ore. **) tenore alcolico raggiunto a fine fermentazione ***) zuccheri residui a fine fermentazione nella condizione con 350 g/l di zucchero iniziali Proprietà chimiche e microbiologiche di campioni di ABT Campioni Grado Brix Test Chimici pH Grado alcolico A B C D E F G 23.50 52.00 56.75 30.00 63.50 36 36.50 3.04 3.12 3.17 3.45 3.16 3.05 3.48 H I 28.75 28.25 L Isolamento dei Lieviti Acidità titolabile ufc ml-1 Isolati 7.00 5.00 2.50 8.90 0.30 7.00 9.60 2.59 1.51 1.53 1.18 1.49 1.29 1.30 2x102 3x104 6x104 17x106 77x104 50x105 14.5x106 3.48 2.45 11.60 2.20 1.08 3.96 14x102 13.5x102 30.75 2.37 0.7 5.08 3x103 M N 23.00 33.50 2.99 3.17 10.70 3.90 1.44 1.20 49x103 57x103 O 28.25 3.27 10.00 0.98 29x104 P 12.75 3.30 8.80 0.72 80x104 Q 44.00 3.09 4.30 1.44 26x104 R S 22.25 33.50 2.82 2.67 6.69 3.10 1.96 1.22 5x102 17x102 201, 202 301, 302, 303, 304, 305, 306 401, 402, 403, 404, 405, 406, 407, 408 501, 502, 503, 504, 505, 506, 507 601, 602, 603, 604, 605, 606, 607, 608, 701, 702, 703, 704, 705, 706, 707, 708 801, 804, 805, 806, 808, 802, 803, 807, 808, 809, 810 901, 902, 903, 904, 905, 906 1001, 1002, 1003, 1004, 1005, 1006, 1008, 1007 1101, 1102, 1103, 1104, 1105, 1106, 1107, 1108 1202, 1203, 1204, 1205, 1206, 1207, 1208 1301, 1302, 1303, 1304, 1305, 1306, 1307, 1308, 1309, 1310 1401, 1402, 1403, 1404, 1405, 1406, 1407, 1408, 1409 1501, 1502 1503, 1504 1505, 1506, 1507, 1508, 1509, 1510, 1511, 1512, 1513 1601, 1602, 1603, 1604, 1605, 1606, 1607, 1608, 1609, 1610 1801, 1802, 1803, 1804, 1805, 1806, 1807 1901, 1902, 1903, 1904, 1905, 1906 *espressi in acido acetico gr·100gr-1 prodotto 4 Amplificazione e restrizione delle regioni ITS Specie Ceppo Z. bailii Z. pseudorouxii Z. rouxii Z. mellis Z. bisporus S. cerevisiae C. stellata C. lactis-condensi H. osmophila H. valbyensis 700-100 700-100 Profilo di Restrizione HinfI 360-230-180 360-230-180 Amp* DBVPG 6920 ‡ 201 202 901 902 903 904 905 906 1001 1002 1003 1004 1005 1006 1008 1007 1202 1203 1204 1205 1206 1207 1208 1301 1302 1303 1304 1306 1307 1308 1309 1310 1601 1602 1603 1604 1605 1606 1607 1608 1609 1610 1801 1802 1803 1804 1805 1806 1807 1901 1902 1903 1904 1905 1906 301 302 303 304 305 306 601 602 603 604 605 606 607 608 CBS 732T 802 803 807 808 809 810 CBS 736T 401 402 403 404 405 406 407 408 CBS 702T 1101 1102 1103 1104 1105 1106 1107 1108 CBS 1171T 501 502 505 506 507 701 702 703 704 705 706 707 708 1401 1402 1403 1404 1405 1406 1407 1408 1409 1501 1503,1504 1505 1506 1507 1508 1509 1510 1512 1513 CBS 157T CECT11918T, § 503 504 804 CECT11877T, § 801 805 806 CECT11206T, ** 1305 CBS 479T 1502 1511 800 800 710(700) HaeIII † CfoI 310-280-110 310-280-110 480-390-250-210-170 500-350-250-220-150 360-350-280-200-180 750 780 800 800 820 820 880 880 400-230-100 400-230-100 560-200-90 550-200 700-120 700-120 320-220-180-145 320-220-180-145 360-250-150 360-250-150 400-270-180 350-280-150 390-230-180 390-230-180 370-370-140 370-370-140 290-200-170-90 290-200-180-90 350-250-210 280-200 310-280-110-90 310-280-110-90 385-365-210 385-365-210 800 490 490 480 480 775 750 730 730 310-230-170-120 470 460 440 440 480-130-105-90 460-140 730 730 480-150 250-240 240-230 250-220 250-220 385-385 370-370 260-230-170-110 260-230-170-110 390-360-150 210-205 220-210 180-120 180-120 290-160-140-100-75 270-200-140-130 620-110 620-110 Analisi delle regioni D1/D2 Numero del ceppo Numero di accesso Z. bisporus Z. mellis Z rouxii Z. pseudorouxii 201 1005 1601 1801 1103 401 808 301 AJ966343 AJ966520 AJ966521 AJ966522 AJ966523 AJ966344 AJ966519 AJ966342 S. cerevisiae C. stellata C. lactis-condensi H. osmophila H. valbyensis 601 507 804 801 1305 1502 AJ966517 AJ870460 AJ966340 AJ966518 AJ966524 AJ966341 Specie Z. bailii Identificazione mediante comparazione delle sequene D1/D2 del gene 26S Identity % 99% 99% 99% 100% 99% 98% 100% 99% 100% 100% 100% 100% 100% 100% Species (accession number) Z. bailii (U72161.1) Z. bisporus (U72162.1) Z. mellis (U72164.1) Z. rouxii (AJ783434.1) Z. rouxii (AJ783434.1)/ Z. pseudorouxii (AJ555406.1) Z. pseudorouxii (AJ555406.1) S. cerevisiae (Z73326) C. stellata (U45730.1) C. lactis-condensi (U45724.1) H. osmophila (U84228.1) H. valbyensis (U73596.1) 5 Ceppi non-Saccharomyces raggruppati mediante l’analisi di restrizione dell’mtDNA con l’enzima HinfI Specie Z. bailii Fonte di N° Isolati isolamento A H I M N Q R Z. pseudorouxii Z. mellis Z. rouxii Z. bisporus C. lactis-condensi C. stellata H. valbyensis H. osmophila S B E C G L G D P N 2 6 8 3 4 9 10 3 4 6 6 8 5 1 5 8 3 2 1 2 1 RFLP mtDNA Tipo N° profilo I I II II III III IV IV V VI VII VII VIII IX X XI XII XIII XIV XV XVI 1 1 1 2 1 1 2 1 1 1 2 1 1 1 2 1 1 1 Numero di campioni positivi ad ogni specie riscontrata Specie Z. bailii S. cerevisiae Z. pseudorouxii C. stellata Z. rouxii Z. mellis C. lactis-condensi Z. bisporus H. osmophila H. valbyensis Campioni Frequenza riferita al numero positivi totale di campioni 8 41.20% 4 23.40% 2 11.80% 2 11.80% 1 5.90% 1 5.90% 1 5.90% 1 5.90% 1 5.90% 1 5.90% 6