Lez 21-22
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Sequenze IRES virali IRES negli mRNA cellulari Strutture secondarie delle IRES Fattori trans-agenti delle IRES Ruolo delle IRES Meccanismi di traduzione negli eucarioti Regolazione della traduzione •generale •specifica Initiation Factors prokaryotes Activity eukaryotes IF3 eIF-1 Fidelity of AUG codon recognition IF1 eIF-1A Facilitate Met-tRNAiMet binding to small subunit eIF-2 Ternary complex formation eIF-2B (GEF) GTP/GDP exchange during eIF-2 recycling eIF-3 (12 subunits) Ribosome antiassociation, binding to 40S eIF-4F (4E, 4A, 4G) mRNA binding to 40S, RNA helicase activity IF2 eIF-4A ATPase-dependent RNA helicase eIF-4E 5' cap recognition eIF-4G Scaffold for of eIF-4E and -4A eIF-4B Stimulates helicase, binds with eIF-4F eIF-4H Similar to eIF4B eIF-5 Release of eIF-2 and eIF-3, GTPase eIF5B Subunit joining eIF-6 Ribosome subunit antiassociation Via delle MAP chinasi stress Chinasi di eIF2a Azione delle chinasi di eIF2a Risposta UPR (Unfolded Protein Response) Risposta UPR (Unfolded Protein Response) Interferenza dei virus nella traduzione negli eucarioti Meccanismi virali d'inibizione della fosforilazione di eIF2a Regolazione di eIF2a Fosforilazione su ser 51 in risposta a stress da parte di 4 chinasi: PKR, GCN2, PERK, HRI La fosforilazione impedisce il riciclo da parte di eIF2B La traduzione di alcuni mRNA è stimolata da bassi livelli di eIF2a attivo Molti virus hanno sistemi per impedire la fosforilazione di eIF2a eIF4F Fosforilazione di 4E-BP Regolazione di eIF4E Regolazione eIF4E Fosforilazione su ser 209 da parte di Mnk1 (e Mnk2) correlata con attivazione Mnk interagiscono con eIF4G e sono attivate dalla via delle MAP chinasi Doppio KO per Mnk1 e 2 è normale eIF4E è inibito dall’interazione con 4E-BP (1, 2 e 3) 4E-BP sono inibite da fosforilazione dipendente dalla via di mTOR Alterazione della traduzione da parte dei virus mTOR è un regolatore centrale Struttura di mTOR Inibizione della rapamicina mTOR è un regolatore centrale Complessi formati da mTOR Bersagli di mTOR mTOR regola l'inizio e l'allungamento Translation and oncogenesis • Hypertrophic nucleoli were a prominent feature of malignant cell • Ribosome alterations are associated with malignancies • Common cancer-related mutations are found in pathways feeding into the translation machinery • Translation initiation factors are frequently amplified or dysregulated in tumours Alterazione della traduzione e tumori Role of ribosome in tumorigenesis defective ribosome QUANTITATIVE/QUALITATIVE ALTERATIONOF TRANSLATION Translation initiation factors and cancers Traduzione e cancro Regolazione della traduzione •generale •specifica Transcriptional control Translational control gene mRNA protein •Slow •Lasting •Transcription-dependent •Rapid •Short-lived •Transcription-independent Indicazione di controllo traduzionale northern -Fe mRNA ferritina western +Fe -Fe ferritina actina mRNA actina +Fe METODI PER STUDIARE IL CONTROLLO TRADUZIONALE • Confronto tra la variazione della quantità di mRNA e quella del prodotto proteico gel poliacrilammide 2D (DIGE) western blot • Analisi della stabilità delle proteine mediante l'uso di inibitori della traduzione • Analisi della quantità di mRNA sui polisomi (distribuzione) Polysome analysis TOP mRNA translational control in cultured cells Meccanismi di regolazione traduzionale Meccanismi di regolazione traduzionale
