lez6

Sottofamiglia
Alphaherpesvirinae
Genere
Simplexvirus
Tipo
Herpes simplex
virus tipo 1
Herpes simplex
virus tipo 2
Varicellovirus
Virus Varicella
Zoster
150 nm
Cytomegalovirus
Citomegalovirus
Betaherpesvirinae
Roseolovirus
Capside icosaedrico
rivestito da involucro
Herpesvirus
umano 6
Herpesvirus
umano 7
Gammaherpesvirinae
Lymphocryptovirus
Rhadinovirus
EpsteinBarr
virus
Herpesvirus 8
associato1al
sarcoma di
Kaposi
HSV-1
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genoma
DNAds lineare(150
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con sequenze ripetute
Kb)
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Sequenze Uniche = U (L e S)
Sequenze Ripetute = R (L e S; T e I)
2
CICLO DI
REPLICAZIONE
Geni a - IE (ICP0, ICP4, ICP27)
Geni b - E
Sintesi del DNA
Geni g1 e g2
cascata di espressione genica
3
La replicazione del DNA virale avviene nel
nucleo per circolarizzazione e sintesi tramite
cerchio rotante
proteine beta
L’assemblaggio
della
particella
virale
avviene nel nucleo e l’acquisizione del
tegumento esterno avviene per gemmazione
sulla membrana nucleare
4
• farmaci inattivi (prodrug)
• Base della selettività:
convertiti nella forma attiva
dalla Timidina chinasi
virale, e successivamente da
chinasi cellulari
• L’incorporaazione
della
forma trifosfato porta alla
terminazione
dell’allungamento di catena
da
parte
della
DNA
polimerasi
From DeClercq Nature Reviews Drug Discovery 1, 13 (2002)
Blocco della replicazione del DNA virale
5
genoma di ADENOVIRUS
ds DNA lineare
(30-35 Kb)
Terminal protein
p55
5’
desossicitosina
ITR = Inverted Terminal Repeat
Trascrizione su
entrambi I filamenti
geni E (Early): E1A (transattivattore), E1B, E2A, E2B (DNA pol), E3, E4 (proteine
enzimatiche)
6
geni L (Late): L1, L2, L3, L4, L5 (proteine strutturali, 13 mRNA)
Replicazione del DNA virale
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DNA polimerasi virale
Replicazione
asimmetrica:
inizia al 3’ di uno dei filamenti
Primer: proteina terminale
p55 (sequenza ORI in ITR
al 3’ del filamento stampo)
l’elica di DNA dislocata forma un
“panhandle” via “inverted terminal
repeats” presenti al 3’ e 5’
associazione Pol--TP e ……
sintesi del filamento
complementare
7
From Flint et al. Principles of Virology (2000), ASM Press
- il virus si assembla
nel nucleo
- il rilascio avviene
per lisi della cellula
ospite
8
Genere:
ORTHOPOXVIRUS
- Virus del vaiolo umano
- Virus vaccino*
AVIPOXVIRUS
ENTOMOPOXVIRUS
LEPORIPOXVIRUS
*modello di studio
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NUCLEOIDE
1 molecola lineare DNAds
(180-200 kpb)
contiene circa 200 geni
sequenze ITR (terminali ripetute invertite)
legami fosfodiestere 3’-5’
scissi da endonucleasi virali durante la replicazione del genoma
Proteine del NUCLEOIDE (
Strutturali (simil-istone) associate
al DNA
Enzimi:
RNA polimerasi
Poliadenilato sintetasi
Metil-transferasi
Guanilil-transferasi
Trascrizione precoce nel core
mRNA senza introni- assenza di splicing
10
- Eparan solfato
- EGF (Epidermal Growth Factor)
- Endocitosi
Trascrizione precoce
nel core di:
-proteasi che rimuovono
il core (uncoating)
-DNA polimerasi virale
Trascrizione tardiva:
-proteine strutturali
- Uscita per lisi della cellula ospite
11
il vaiolo è debellato al livello mondiale
Dal 1979 il virus è
completamente
eradicato
In Italia la vaccinazione è stata sospesa
nel 1977 e definitivamente abrogata dal
1981
Centers for Disease Control and Prevention (Atlanta, USA)
Laboratorio di Ricerche Virologiche e Biotecnologiche (Novosibirsk, Russia)
12
Capside icosaedrico nudo
45 nm
72 capsomeri
formati da pentameri di VP1
+1 mol. VP2 o VP3 interna
DNA ds circolare (5.2 kbp)
legato a istoni cellulari (H2A, H2B, H3 e H4)
Minicromosoma con 24 nucleosomi
13
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SV40
Funzione delle Proteine
precoci: proteine (T, t) regolatorie e multifunzionali
T,t: reprime la sua stessa sintesi
transazione della trascrizione
T,t: attiva l’espressione dei geni tardivi da precoce a tardiva
T,t: essenziale per la replicazione del DNA virale
 interazione con pRB e p53 (induzione della fase S nella cellula ospite ed
inibizione dell’apoptosi cellulare
tardive: proteine strutturali (VP1, VP2, VP3)
trascritti primari da differenti ORF e
modificati da splicing
14
L1
L2
Capside icosaedrico nudo (55 nm)
L1,L2
DNA ds circolare (8000 bp)
legato a istoni cellulari
Specie-specifici
Tropismo per cellule dell’epitelio squamoso
15
rilascio del virus
strato granuloso
e corneo
strato spinoso
e granuloso
strato basale
trasmissione: diretta
(sessuale)
incapsidamento
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amplificazione
del genoma
insieme al
DNA cellulare
proliferazione
cellulare (E6, E7)
infezione produttiva in cellule
epiteliali differenziate
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E4
DNA virale
nuclei
16
Infezione produttiva
Il DNA del virus si
integra nel genoma della
cellula ospite
inattivazione del gene E2
CARCINOMA DELLA CERVICE
Risposta immunitaria
REGRESSIONE
incremento della trascrizione di E6
17 e E7
VLP
quadrivalente
vaccini profilattici
basati su HPV VLPs
Cervarix
L1 espresse in Baculovirus
adiuvante :Sali di alluminio
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bivalente
L1 espresse in Saccaromyces
Cerevisiae
Adiuvante :Sali di alluminio
azione crociata verso HPV 45 e 31
Efficaci al 99% sulla protezione da condilomi
18
Efficaci al 100% sull’incidenza di lesioni CIN2/ 3 pre-cancerose
virus
EPATITE B
Particella di DANE
(42 nm)
capside icosaedrico
rivestito da involucro
Genoma dsDNA circolare
incompleto
filamento negativo completo
3200 b
filamento positivo incompleto
50-80% del filamento
complementare
19
Regione preS/S
i peplomeri di HBV
Q ui ck Ti m e ™ e u n de co m p re ss or e T I FF ( N on c om pr es so ) s on o n ec es sa ri pe r v i su al i zz ar e q ue st '
Particella di DANE
(42 nm)
Large protein: Antigene Australia
HBsAg
20
Hepadnaviridae
Replicazione nucleare e citoplasmatica
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Nel citoplasma
-dopo la penetrazione il filamento
positivo viene completato ad opera
della DNA polimerasi virale
Nel nucleo
trascrizione di mRNA subgenomici
trascrizione di mRNA pre-genomico
Nel citoplasma
- retrotrascrizione dell’mRNA pre-genomico a DNA
21
Replicazione di HBV
attraverso un
intermedio ad RNA
fibronectina
Apolipoproteina H
5 mRNA = 900 - 3500 b
RNA 3500 b = pregenoma
Trascrizione inversa
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Vaccino contro HBV
a subunità
• antigene di superficie del virus dell Epatite B
(HbSAg)
• Prodotto in lievito (S. cerevisiae)
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