HIV – HCV

HIV – HCV - HBV
EPIDEMIOLOGIA,
PREVENZIONE E PROFILASSI
Diagnostica di Laboratorio
6 GIUGNO 2012
M. BONGERA
I° parte
DNA
Acido desossiribonucleico
RNA
Virus EPATITI
Virus AIDS
HBV HCV
HIV 1 -2
epatotropi
linfotropi
Definizione di virus Luria e Darnell (1968)
I virus sono entità, il cui genoma è un elemento di acido nucleico, DNA o RNA,
il quale si riproduce all’interno di cellule viventi usandone i sistemi enzimatici
per dirigere la sintesi di particelle specializzate, i virioni, che contengono il
genoma virale e lo trasferiscono ad altre cellule.
GENOMA
HBV-DNA
HCV-RNA
HIV-RNA
Reazione polimerasica
a catena
Ideata da Kary Mullis nel1983
1995
Premio Nobel per la Chimica.
PCR : procedure generali
campione
Estrazione
DNA/RNA
Se RNA
retrotrascrizione
immunoenzimatica
rivelazione
Gel elettroforesi
altro
amplificazione
Polymerase Chain Reaction : principio
CICLI TERMICI
1) denaturazioone
94-95°C
2) annealing
50-65°C
3) extension
72°C
Resa teorica di una reazione di PCR a partire
da una singola copia di DNA
Numero di cicli
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
Numero di molecole di amplificati
2
4
8
16
32
64
128
256
512
1.024
2.048
4.096
8.192
16.384
32.768
65.536
131.072
262.144
524.288
1.048.576
2.097.152
4.194.304
8.388.608
16.777.216
35.544.432
67.777.216
134.217.728
268.435.456
536.870.912
1.073.741.724
la PCR real time
E’ un’amplificazione di acidi nucleici durante la quale
i prodotti di PCR vengono rivelati e quantificati man
mano che si formano, in tempo reale.
Vengono quindi prodotti dati qualitativi e quantitativi
in contemporanea, attraverso la lettura di un segnale
fluorescente.
La fluorescenza viene emessa dal DNA in via di
formazione
All’aumentare del DNA amplificato, aumenta
proporzionalmente la fluorescenza
DNA
Fluorescenza
Real time PCR
DNA amplificato
CARICA VIRALE
quantità di virus presente nel sangue
viremia
ANALISI GENOTIPICHE
CARICA VIRALE
VIRAL LOAD.
Direttamente proporzionale al grado
di attività replicativa del virus .
UNITA’ DI MISURA
: UI/ml (S.I. WHO)
copie/ml
genomi eq/ml
Es. 1.000 UI/ml = 1X10^3 = 3 log UI/ml
10 UI/ml = 1x10^1 = 1 log UI/ml
CARICA VIRALE = riduzione PERIODO FINESTRA
• PERIODO DI TEMPO CHE INTERCORRE TRA L’INFEZIONE E LA
COMPARSA DEL PRIMO MARCATORE RILEVABILE CON I TEST
DI LABORATORIO
• Periodo finestra anticorpale
• Periodo finestra antigenico
Capobianchi, Ministero Salute 2012
TEST BIOMOLECOLARI HVB HCV HIV
• Approccio terapeutico : carica virale, genotipi
• Monitoraggio terapeutico: valutare la risposta alla
terapia
• Diagnosi : differenziare malattia/non malattia
• Screening : identificare soggetti con malattia/evento
in una popolazione di “ sani”
- donatori da sangue
terapia a base di interferone, nonché a un suo differente decorso e al
gradseverità (anche se questo aspetto non è ancora del tutto chiarito): il 2 e il 3
sono i genotipi più facili da trattare, mentre l'1 e il 4 sono i più resistenti; il
genotipo 1b, in particolare, è legato a una forma di infiammazione del fegato più
acuta dal decorso particolarmente aggressivo.