Vettori e clonaggio
Clonaggio di un
frammento di DNA=
=produzione di molte copie
identiche del frammento di DNA
Vettori e clonaggio
Il frammento di DNA viene
inserito in una molecola-vettore
che può replicarsi quando è
inserita in una cellula ospite,
di solito un batterio
Vettori e clonaggio
-Enzimi di restrizione
-DNA ligasi
-Vettori
Vettori e clonaggio
Sistema di restrizione/metilazione
del DNA
Vettori e clonaggio
Frammenti di restrizione del DNA
genomico di adenovirus 2
Vettori e clonaggio
Reazione
ligasica di
frammenti di
restrizione
Vettori e clonaggio
Vettori
Plasmidi
Fagi
Cosmidi
YAC
BAC
Vettori e clonaggio
Plasmide
Molecola circolare di DNA a doppio
filamento, normalmente presente
nella cellula batterica, in grado
di replicarsi autonomamente
dal cromosoma.
Vettori e clonaggio
Vettori e clonaggio
Replicazione di un plasmide
Vettori e clonaggio
Clonaggio di
un frammento
di DNA in un
plasmide
Vettori e clonaggio
Formazione
di un plasmide
ricombinante
Vettori e clonaggio
Il marker di selezione permette
permette di selezionare le
cellule batteriche contenenti
il plasmide
Vettori e clonaggio
Clonaggio in un
plasmide e
selezione su un
terreno contenente
un antibiotico
Vettori e clonaggio
La possibilità di selezionare
i batteri trasformati è molto
importante perché la trasformazione
batterica è un processo
poco efficiente
Vettori e clonaggio
Clonaggio
di diversi
frammenti di
DNA in un
plasmide
Vettori e clonaggio
Regione di clonaggio (=polylinker):
regione che contiene una copia di
diversi siti di restrizione
Vettori e clonaggio
Vettori e clonaggio
Lunghezza massima del
DNA clonabile in un plasmide:
circa 20 Kb
Vettori e clonaggio
I virus sono piccoli parassiti
non in grado di replicarsi.
Dopo aver infettato una
cellula-ospite utilizzano i suoi
sistemi di replicazione e sintesi
delle proteine per riprodursi
Vettori e clonaggio
I batteriofagi (o fagi) sono virus
che infettano i batteri.
Vettori e clonaggio
Ciclo litico del fago T4
Vettori e clonaggio
Il fago più utilizzato in biologia
molecolare è il fago
Vettori e clonaggio
Ciclo
litico e
lisogenico
del fago
Vettori e clonaggio
Assemblaggio
di un fago
Vettori e clonaggio
Mappa del genoma del fago
Vettori e clonaggio
Clonaggio di
frammenti di
DNA nel
fago
Vettori e clonaggio
Formazione di cloni fagici
Vettori e clonaggio
L’infezione dei batteri con il fago
è circa 103 volte più efficiente
della trasformazione
con un plasmide
Vettori e clonaggio
Lunghezza del DNA
clonabile in un fago:
20-25 Kb
Vettori e clonaggio
Un cosmide è un plasmide
contenente la sequenza COS
dal fago
Vettori e clonaggio
Vettori e clonaggio
Clonaggio di
frammenti di
DNA in un
cosmide
Vettori e clonaggio
Lunghezza del DNA
clonabile in un cosmide:
circa 45 Kb
Vettori e clonaggio
YAC=yeast artificial chromosome
Vettori e clonaggio
Dimostrazione
sperimentale
degli elementi
funzionali di
un cromosoma
Vettori e clonaggio
Vettore YAC:
sequenze ARS
CEN
TEL
Vettori e clonaggio
Vettori e clonaggio
Lunghezza del DNA
clonabile in uno YAC:
fino a 1000 Kb
Vettori e clonaggio
Approximate Maximum Length of DNA That Can
Be Cloned in Vectors
Vector Type
Cloned DNA (kb)
Plasmid
20
λ phage
25
Cosmid
45
P1 phage
100
BAC (bacterial artificial chromosome)
300
YAC (yeast artificial chromosome)
1000
Vettori e clonaggio
Vettore di espressione
Vettori e clonaggio
