8a_LAB_Cloning_PCR copy

Laboratorio di Biologia
Molecolare
Publio Virgilio Marone?
INGIRUMIMUSNOCTEETCONSUMIMURIGNI
INGIRUMIMUSNOCTEETCONSUMIMURIGNI
5’3’-
-3’
-5’
5’-
-3’
3’-
-5’
SIGNIFICATO DELLE SEQUENZE
PALINDROMICHE:
INTERAZIONI DNA-PROTEINE
SIGNIFICATO DELLE SEQUENZE
PALINDROMICHE
SIGNIFICATO DELLE SEQUENZE
PALINDROMICHE: STRUTTURE DI RNA
SIGNIFICATO DELLE SEQUENZE
PALINDROMICHE:
RESTRIZIONE E MODIFICAZIONE DEL DNA
5’-GAATTC-3’
3’-CTTAAG-5’
Restrizione e Modificazione del DNA
The Nobel Prize in Chemistry 1980
for his fundamental studies of the biochemistry of nucleic acids,
with particular regard to recombinant-DNA”
Paul Berg
1/2 of the prize
USA Stanford University Stanford, CA, USA
b. 1926
Berg was the first investigator to construct a recombinant-DNA molecule, i.e. a molecule containing parts of
DNA from different species, ……. His pioneering experiment has resulted in the development of a new
technology, often called genetic engineering or gene manipulation, which has already had important practical
applications, e.g. the manufacture of human hormone with the aid of bacteria. Berg performed his
experiment, however, as part of an incisive analysis of the chromosome of an ape virus (called SV 40) Viruses
contain DNA (or sometimes RNA, another nucleic acid). …….
Clonaggio del DNA:
selezione ed amplificazione in vivo
di geni o frammenti genici, inseriti in
appropriati
vettori di clonaggio
Plasmidi: pBR322*
*it was named eponymously after its Mexican creators, p standing for plasmid, and
BR for Bolivar and Rodriguez
Manipolazione del DNA: taglio e cucito
(le basi molecolari del clonaggio)
Clonaggio del DNA
Vettori di clonaggio di seconda generazione: pUC
Clonaggio del DNA:
selezione ed amplificazione in vivo
di geni o frammenti genici, inseriti in appropriati
vettori di clonaggio
PCR: selezione ed amplificazione in vitro
di frammenti di DNA