Presentazione di PowerPoint

Laboratorio di Neurofarmacologia
Molecolare
Prof.ssa Patrizia Romualdi e Prof. Sanzio Candeletti
Collaboratori
Ricercatori
Dr.ssa Lucia Carboni
Assegnisti di ricerca
Dr.ssa Francesca Caputi
Dottorandi
Dr.ssa Martina Palmisano
Laureato frequentatore
Dr.ssa Daria Mazza
Linee di ricerca:
Ruolo di differenti sistemi endogeni peptidergici
nella:
 dipendenza da sostanze d’abuso
 modulazione della trasmissione nocicettiva in modelli
di dolore cronico neuropatico
 patologie del SNC quali Alzheimer, Parkinson
Ricerca Sperimentale Preclinica: in vitro ed
in vivo
COCAINA
9-THC
Farmacologia delle sostanze d’abuso
OPPIACEI
ALCOOL
MDMA (ECSTASY)
Sperimentazione in vitro ed in vivo
Trattamenti su
colture cellulari
Trattamenti acuti e
cronici nel ratto/topo
e prelievo delle aree
cerebrali interessate
TARGETS di ricerca:
Alterazioni a livello dei
meccanismi di trasduzione del
segnale (Western Blotting)
Alterazioni a livello
dell’espressione genica (Real
Time PCR)
Meccanismi epigenetici di
controllo dell’espressione
genica
 Modelli di dolore
neuropatico
Alterazioni dei livelli dei
neuropeptidi (RIA)
Meccanismi di trasduzione del segnale:
WESTERN BLOTTING
SDS-PAGE
ELECTRO-TRANSFER
METODO
IMMUNOENZIMATICO
Banda di CREB
Esempio di immuno-blot con relativa quantifica tramite analisi
statistica dei livelli di proteina fosfo-CREB
Fluorescenza
Real Time PCR
Cicli di amplificazione
Per ogni campione si ottiene una curva di amplificazione
il cui CT(=Threshold Cycle) è inversamente proporzionale alla quantità di template iniziale
Esempio di analisi quantitativa tramite PCR dei geni di interesse
in un modello di dolore neuropatico
vs sham
* p<0.05
Dunnett test
RELATIVE
GENE EXPRESSION
2.5
sham
CCI 7days
CCI 14days
2.0
*
*
1.5
1.0
0.5
0.0
NOP
ppN/OFQ
pDYN
pENK
Sham= falsamente operati
CCI 7days= operati e sacrificati al giorno 7
CCI 14days= operati e sacrificati al giorno 14
BDNF
Meccanismi epigenetici nella regolazione
dell’espressione genica
ORGANIZZAZIONE della CROMATINA
Regolazione della trascrizione
Esposizione
a sostanze
d’abuso
Esempio di analisi
statistica a seguito di
immuno-precipitazione con
l’anticorpo H3K4 tri-metilato
DOLORE CRONICO/NEUROPATICO
MODELLO ANIMALE:
Chronic Constriction Injury
(CCI)
MODULAZIONE DELLA TRASMISSIONE NOCICETTIVA
Test
analgesimetrici
VON FREY TEST
TAIL FLICK
HOT/COLD PLATE
Soglia
nocicettiva
PLANTAR TEST
PURIFICAZIONE E DOSAGGIO
RADIO-IMMUNOLOGICO
Colonnine Sep-Pak C18
Interpolazione dei dati
sulla curva di taratura
< radioattività (in cpm)
> ir-N/OF
PERFUSIONE
SPINALE
FRAZIONAMENTO DI
CELLULE DEL
SANGUE
REQUISITI necessari per iniziare l’anno di internato:
 numero massimo di esami rimanenti 4
 tirocinio iniziato o quasi concluso
 lavoro con animali da esperimento
DURATA DELL’INTERNATO: 1 ANNO CON FREQUENZA
GIORNALIERA
LISTE DISPONIBILI PRESSO I DOCENTI RESPONSABILI
DEL LABORATORIO (prendere contatti prima possibile)
[email protected]
[email protected]