Laboratorio di Neurofarmacologia Molecolare Prof.ssa Patrizia Romualdi e Prof. Sanzio Candeletti Collaboratori Ricercatori Dr.ssa Lucia Carboni Assegnisti di ricerca Dr.ssa Francesca Caputi Dottorandi Dr.ssa Martina Palmisano Laureato frequentatore Dr.ssa Daria Mazza Linee di ricerca: Ruolo di differenti sistemi endogeni peptidergici nella: dipendenza da sostanze d’abuso modulazione della trasmissione nocicettiva in modelli di dolore cronico neuropatico patologie del SNC quali Alzheimer, Parkinson Ricerca Sperimentale Preclinica: in vitro ed in vivo COCAINA 9-THC Farmacologia delle sostanze d’abuso OPPIACEI ALCOOL MDMA (ECSTASY) Sperimentazione in vitro ed in vivo Trattamenti su colture cellulari Trattamenti acuti e cronici nel ratto/topo e prelievo delle aree cerebrali interessate TARGETS di ricerca: Alterazioni a livello dei meccanismi di trasduzione del segnale (Western Blotting) Alterazioni a livello dell’espressione genica (Real Time PCR) Meccanismi epigenetici di controllo dell’espressione genica Modelli di dolore neuropatico Alterazioni dei livelli dei neuropeptidi (RIA) Meccanismi di trasduzione del segnale: WESTERN BLOTTING SDS-PAGE ELECTRO-TRANSFER METODO IMMUNOENZIMATICO Banda di CREB Esempio di immuno-blot con relativa quantifica tramite analisi statistica dei livelli di proteina fosfo-CREB Fluorescenza Real Time PCR Cicli di amplificazione Per ogni campione si ottiene una curva di amplificazione il cui CT(=Threshold Cycle) è inversamente proporzionale alla quantità di template iniziale Esempio di analisi quantitativa tramite PCR dei geni di interesse in un modello di dolore neuropatico vs sham * p<0.05 Dunnett test RELATIVE GENE EXPRESSION 2.5 sham CCI 7days CCI 14days 2.0 * * 1.5 1.0 0.5 0.0 NOP ppN/OFQ pDYN pENK Sham= falsamente operati CCI 7days= operati e sacrificati al giorno 7 CCI 14days= operati e sacrificati al giorno 14 BDNF Meccanismi epigenetici nella regolazione dell’espressione genica ORGANIZZAZIONE della CROMATINA Regolazione della trascrizione Esposizione a sostanze d’abuso Esempio di analisi statistica a seguito di immuno-precipitazione con l’anticorpo H3K4 tri-metilato DOLORE CRONICO/NEUROPATICO MODELLO ANIMALE: Chronic Constriction Injury (CCI) MODULAZIONE DELLA TRASMISSIONE NOCICETTIVA Test analgesimetrici VON FREY TEST TAIL FLICK HOT/COLD PLATE Soglia nocicettiva PLANTAR TEST PURIFICAZIONE E DOSAGGIO RADIO-IMMUNOLOGICO Colonnine Sep-Pak C18 Interpolazione dei dati sulla curva di taratura < radioattività (in cpm) > ir-N/OF PERFUSIONE SPINALE FRAZIONAMENTO DI CELLULE DEL SANGUE REQUISITI necessari per iniziare l’anno di internato: numero massimo di esami rimanenti 4 tirocinio iniziato o quasi concluso lavoro con animali da esperimento DURATA DELL’INTERNATO: 1 ANNO CON FREQUENZA GIORNALIERA LISTE DISPONIBILI PRESSO I DOCENTI RESPONSABILI DEL LABORATORIO (prendere contatti prima possibile) [email protected] [email protected]