Saggio per la rilevazione della fenciclidina DRI

Saggio per la rilevazione della fenciclidina DRI®
Per uso diagnostico in vitro
10014673 (3 x 18 mL)
0160 (100 mL Kit)
0161 (500 mL Kit)
The Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Programs: Final Guidelines,
(Linee direttive inderogabili per i programmi di test tossicologici sui luoghi di lavoro federali linee direttive finali) raccomandano di refrigerare i campioni non sottoposti al primo test entro 7
giorni dalla data di arrivo al laboratorio in unità di refrigerazione sicure.
I campioni con un intervallo del pH compreso tra 3 e 11 sono idonei per il test.
Uso previsto
Il saggio per il rilevamento della fenciclidina DRI è indicato per la determinazione qualitativa o
semi-quantitativa della fenciclidina nell'urina umana.
Il saggio garantisce unicamente un risultato analitico preliminare. Utilizzare un metodo chimico
alternativo più specifico a conferma del risultato analitico. La gas cromatografia/spettrometria
di massa (GC/MS) costituisce il metodo di conferma d'elezione.1,2 Avvalersi di considerazioni
cliniche e del giudizio professionale per interpretare i risultati di qualsiasi test sull'uso o l'abuso
di droghe soprattutto quando si utilizzano risultati positivi preliminari.
Riepilogo e presentazione del test
La fenciclidina (Phencyclidine, PCP) resa in origine disponibile quale agente anestetico per
uso chirurgico, è stata bandita dall'uso clinico per gli effetti collaterali avversi manifestati
sia durante l'intervento chirurgico sia durante il periodo di convalescenza.3 L'uso illecito del
farmaco produce sintomi clinici che vanno dallo stato confusionale al disorientamento, dallo
stordimento al coma e finanche alla morte per overdose.4,5
Usare la massima cura per mantenere i campioni pipettati privi di grossi residui; centrifugare
i campioni particolarmente torbidi prima dell'analisi. La diluizione dei campioni di urina può
inficiare i risultati del test. Se si sospetta la contraffazione del campione, raccogliere un altro
campione da saggiare e inviare entrambi i campioni al laboratorio per l'analisi.
Trattare tutti i campioni di urina come materiale potenzialmente infetto.
Procedimento
Per l'esecuzione del saggio si possono usare analizzatori in grado di mantenere una temperatura
costante, di pipettare i campioni, miscelare i reagenti e misurare i tassi enzimatici a 340 nm e i
tempi di reazione con accuratezza.
Prima di eseguire il saggio, consultare i parametri chimici riportati nelle istruzioni di ciascun
analizzatore per l'applicazione desiderata.
Il saggio per la fenciclidina DRI® è un saggio immunoenzimatico in fase omogenea che utilizza
reagenti liquidi pronti per l'uso.6 Il saggio si basa sulla concorrenza tra la sostanza psicotropa
(droga) marcata con un enzima glucosio-6-fosfato deidrogenasi (G6PD) e quella contenuta nel
campione di urine per un quantitativo determinato di siti di legame di uno specifico anticorpo. Se
il campione non contiene droga, l'anticorpo specifico si lega alla sostanza psicotropa marcata
con la G6PD inibendo l'attività enzimatica. Questo fenomeno crea una relazione diretta tra la
concentrazione della droga nell'urina e l'attività enzimatica. L'attività G6PD viene determinata
mediante spettrofotometria a 340 nm misurando la sua abilità di convertire il NAD (nicotinammide
adenina dinucleotide) in NADH.
Controllo della qualità e calibrazione
Reagenti
Analisi qualitativa
Per l'analisi qualitativa dei campioni, utilizzare il calibratore multidroga da 25 ng/mL come
livello di cutoff. Il calibratore multidroga per urine 2 DRI che contiene 25 ng/mL di fenciclidina,
è utilizzato quale riferimento di cutoff per distinguere i campioni “positivi” da quelli “negativi”.
Reagente enzima-coniugato.
Contiene fenciclidina marcata con glucosio-6-fosfato deidrogenasi (G6PD) in tampone Tris con
azoturo di sodio come conservante.
Analisi semi-quantitativa
Per l'analisi semi-quantitativa, utilizzare tutti i calibratori.
Materiali aggiuntivi occorrenti (venduti separatamente):
Risultati qualitativi
Un campione in cui si rileva una variazione del valore di assorbanza (∆A) uguale o superiore al
valore ottenuto con il calibratore di cutoff è considerato positivo. Un campione che rilevi una
variazione del valore di assorbanza (∆A) inferiore al valore ottenuto con il calibratore di cutoff
è considerato negativo.
Reagente anticorpo/substrato.
Contiene anticorpi monoclonali anti-fenciclidina, glucosio-6-fosfato (G6P), e il nicotinammide
adenina dinucleotide (NAD) in tampone Tris con azoturo di sodio come conservante.
1664 1388 1588 1589 1591 1592 1594 1595 1597 1598 DOAT-2
DOAT-3
DOAT-4
DOAT-5
Descrizione del kit
Calibratore negativo DRI, 10 mL
Calibratore negativo DRI, 25 mL
Calibratore multidroga 1 DRI, 10 mL
Calibratore multidroga 1 DRI, 25 mL
Calibratore multidroga 2 DRI, 10 mL
Calibratore multidroga 2 DRI, 25 mL
Calibratore multidroga 3 DRI, 10 mL
Calibratore multidroga 3 DRI, 25 mL
Calibratore multidroga 4 DRI, 10 mL
Calibratore multidroga 4 DRI, 25 mL
MAS® DOA Total – Livello 2, 6 x 18 mL
MAS® DOA Total – Livello 3, 6 x 18 mL
MAS® DOA Total – Livello 4, 6 x 18 mL
MAS® DOA Total – Livello 5, 6 x 18 mL
Precauzioni e avvertenze
1.Questo test è unicamente per uso diagnostico in vitro. I reagenti sono dannosi se ingeriti.
2.I reagenti utilizzati nei componenti del saggio contengono ≤0,09% di azoturo di sodio.
Evitare il contatto con la pelle e le membrane mucose. Lavare le aree colpite con acqua
abbondante. Richiedere immediatamente l'aiuto di un medico se il prodotto è stato
posto a contatto con gli occhi o se è stato ingerito. L'azoturo di sodio può reagire con il
piombo o il rame delle condutture e formare azoturi metallici potenzialmente esplosivi.
Nello smaltire i reagenti aver cura di sciacquare sempre con acqua abbondante onde
prevenirne l'accumulo. Pulire le superfici metalliche esposte con idrossido di sodio al
10%.
3.Non utilizzare i reagenti oltre la data di scadenza.
La buona pratica di laboratorio raccomanda di utilizzare campioni di controllo per assicurare
la corretta esecuzione del saggio. Utilizzare controlli prossimi al calibratore di cutoff per
convalidare la calibrazione. I risultati del controllo devono ricadere entro intervalli prestabiliti,
determinati dalle procedure e dalle linee direttive del laboratorio. Se ricadono esternamente
agli intervalli predefiniti, il saggio deve essere considerato non valido. Tutti i requisiti di controllo
della qualità devono essere eseguiti in osservanza dei requisiti locali, regionali e statali o dei
requisiti di accreditamento vigenti. Ogni laboratorio deve stabilire un proprio protocollo di
calibrazione e di controllo.
Risultati e valori attesi
Risultati semi-quantitativi
Una stima approssimativa della concentrazione della sostanza psicotropa nei campioni può
essere ottenuta eseguendo una curva standard con tutti i calibratori e quantificando i campioni
esterni alla curva standard.
Limitazioni
1. Un risultato positivo di questo saggio è unicamente indicativo della presenza di fenciclidina
e non è necessariamente correlato con l'entità degli effetti fisiologici e psicologici.
2. Un risultato positivo del saggio deve essere confermato da un altro metodo non
immunologico quale una gascromatografia (GC), una cromatografia su strato sottile (TLC,
thin-layer chromatography) o una gascromatografia/spettrometria di massa (GC/MS).
3. Il test è indicato per l'uso unicamente con urina umana.
4. Vi è inoltre la possibilità che altre sostanze e/o fattori (ad es. tecnici o procedurali) non
elencati nella tabella delle specificità possano interferire con il test causando dei falsi
risultati.
Caratteristiche prestazionali tipiche
I risultati prestazionali ottenuti sull'analizzatore Hitachi 717 sono riportati in basso.7 I risultati
conseguiti nel proprio laboratorio potrebbero differire.
Precisione
Sono stati saggiati il negativo, il controllo da 20 ng/mL, il calibratore da 25 ng/mL, il controllo da
35 ng/mL e il calibratore da 100 ng/mL ottenendo i seguenti risultati:
Preparazione e conservazione dei reagenti
I reagenti sono pronti per l'uso. Non richiedono alcuna preparazione. Tutti i componenti del saggio,
conservati alla temperatura di 2–8 °C sono stabili fino alla data di scadenza indicata sull'etichetta.
Raccolta e manipolazione del campione
Raccogliere i campioni di urina in contenitori puliti di vetro o di plastica. Si consiglia di saggiare
campioni freschi di urina.
Intrasequenza (n=20 )
Calibratore o controllo
Media ± SD
(mA/min)
% CV
Intersequenza (n=12)
Media ± SD
(mA/min)
% CV
Negativo
315 ± 2,5
0,8
316 ± 1,9
0,6
20 ng/mL
378 ± 2,3
0,6
380 ± 3,4
0,9
25 ng/mL
400 ± 2,0
0,5
400 ± 2,4
0,6
35 ng/mL
426 ± 1,3
0,3
425 ± 4,3
1,0
100 ng/mL
502 ± 2,0
0,4
501 ± 4,5
0,9
Bibliografia
Sensibilità
La sensibilità, definita come la minima concentrazione differenziabile dall'urina negativa con il
95% di confidenza, è di 5 ng/mL.
1. Urine Testing for Drugs of Abuse. National Institute on Drug Abuse (NIDA) Research
Monograph 73 (1986).
2. Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Programs. National Institute
on Drug Abuse. Federal Register 53, No 69, pp 11970 (1988).
3. Ober RE, Gwynn GW, Chang T, McCarthy DA and AJ Glazko, Metabolism of Sernyl.
Federation Proc 22, 539 (1963).
4. Burns RS and SE Lerner. Perspectives: Acute Phencyclidine Intoxication.
Clin Toxi 9, 477 (1976).
5. Lundberg GC, Gupta RC and SH Montgomery. Phencyclidine: Patterns Seen in Street Drug
Analysis. Clin Toxi 9, 503 (1976).
6. Rubenstein KE, Schneider RS and EF Ullman. Homogeneous Enzyme Immunoassay:
A New Immunochemical Technique. Biochem Biophys Res Commun 47, 846 (1972).
7. Data on file at Microgenics, a part of Thermo Fisher Scientific.
Accuratezza
Duecentootto (208) campioni clinici di urina sono stati saggiati con un saggio immunoenzimatico
(EIA) disponibile in commercio e con il saggio per la fenciclidina DRI. È stato rilevato un
accordo del 100% tra i due metodi. Novantacinque (95) campioni erano positivi e centotredici
(113) risultavano negativi con entrambi i saggi. Inoltre, la positività di tutti i novantacinque (95)
campioni positivi è stata confermata dal metodo della gas-cromatografia/spettrometria di
massa (GC/MS).
Specificità
Alcune sostanze potenzialmente interferenti sono state saggiate per la cross-reattività nel
saggio. I composti elencati nella tabella seguente hanno prodotto un risultato negativo alla
concentrazione saggiata.
Composto
1-Piperidina-cicloesano
carbonitrile (PCC)
Concentrazioni saggiate (ng/mL)
100.000
Acido acetilsalicilico
1.000.000
Amobarbital
1.000.000
Anfetamina
1.000.000
Bromfeniramina
Clorfeniramina
Destrometorfano
Difenidramina
EMDP
Fenobarbital
50.000
50.000
1.000.000
100.000
100.000
1.000.000
Imipramina
500.000
Ketamina
100.000
Meperidina
Metadone
Metaqualone
Metronidazolo
Morfina
50.000
1.000.000
100.000
1.000.000
200.000
Naltrexone
10.000
N-etil-1-fenilcicloesilamina
(etilciclidina, PCE)
50.000
Orfenadrina
Oxazepam
Paracetamolo
Prometazina
200.000
100.000
1.000.000
100.000
Tioridazina
80.000
Triprolidina
10.000
Microgenics Corporation
46360 Fremont Blvd.
Fremont, CA 94538-6406 USA
Servizio di assistenza tecnica
e alla clientela negli USA:
1-800-232-3342
Per gli aggiornamenti del foglio illustrativo, visitare:
www.thermoscientific.com/diagnostics
Negli altri paesi:
Rivolgersi al rappresentante Thermo Fisher Scientific di zona.
0141-5_IT
2012 05
2
Thermo Fisher Scientific Oy
Ratastie 2, P.O. Box 100
01621 Vantaa, Finland
Tel: +358-9-329100
Fax: +358-9-32910300