Saggio per gli oppiacei DRI

Saggio per gli oppiacei DRI®
Per uso diagnostico in vitro
10014601 (3 x 18 mL)
0135 (100 mL Kit)
0136 (500 mL Kit)
Uso previsto
Il saggio per gli oppiacei DRI è un saggio immunoenzimatico in fase omogenea indicato per la
determinazione qualitativa o semi-quantitativa degli oppiacei nell'urina umana con un calibratore
di cut off di 300 ng/mL o di 2.000 ng/mL.
Il saggio garantisce soltanto un risultato analitico preliminare. Utilizzare un metodo chimico
alternativo più specifico a conferma del risultato analitico. La gas cromatografia/spettrometria
di massa (GC/MS) costituisce il metodo di conferma d'elezione.1,2 Avvalersi di considerazioni
cliniche e del giudizio professionale per interpretare i risultati di qualsiasi test sulle droghe
d'abuso soprattutto quando si utilizzano risultati positivi preliminari.
Riepilogo e presentazione del test
Gli oppiacei, come la morfina e la codeina, sono alcaloidi dell'oppio facilmente reperibili in natura
e diffusamente utilizzati come analgesici. Benché i tossicomani abusino di regola di morfina e
codeina, un altro oppiaceo, l'eroina, viene sintetizzato dalla morfina ed è il più comune oppiaceo
d'abuso. Se ingerita o iniettata, l'eroina viene metabolizzata nella molecola 6-monoacetil morfina,
che reidrolizzata produce nuovamente morfina. Gli oppiacei sono rapidamente metabolizzati
dall'organismo ed escreti con l'urina, consentendo di rilevare l'uso recente di morfina, codeina
e/o eroina.
Il saggio per gli oppiacei DRI è un saggio immunoenzimatico in fase omogenea3 che utilizza
reagenti liquidi pronti per l'uso. Il saggio utilizza anticorpi monoclonali in grado di rilevare gli
oppiacei contenuti nell'urina. Il saggio si basa sulla concorrenza tra la sostanza stupefacente
marcata con un enzima glucosio-6-fosfato deidrogenasi (G6PD) e quella libera contenuta nel
campione di urina per un quantitativo determinato di siti di legame specifici dell'anticorpo. Se
il campione non contiene droga libera, l'anticorpo specifico si lega alla sostanza stupefacente
marcata con la G6PD inibendo l'attività enzimatica. Questo fenomeno crea una relazione diretta
tra la concentrazione della droga nell'urina e l'attività enzimatica. L'attività della G6PD viene
determinata mediante spettrofotometria a 340 nm misurando la sua abilità di convertire il NAD
(nicotinammide adenina dinucleotide) in NADH.
Reagenti
Reagente anticorpo/substrato
Contiene l'anticorpo monoclonale antimorfina, glucosio-6-fosfato (G6P), e il nicotinammide
adenina dinucleotide (NAD) in tampone Tris con azoturo di sodio come conservante.
Reagente enzima-coniugato
Contiene morfina marcata con glucosio-6-fosfato deidrogenasi (G6PD) in tampone Tris con
azoturo di sodio come conservante.
Materiali aggiuntivi occorrenti (venduti separatamente):
Descrizione del kit
Utilizzare con cutoff di 2.000 ng/mL
1664
Calibratore negativo DRI, 10 mL
1388
Calibratore negativo DRI, 25 mL
1588 Calibratore multidroga DRI 1, 10 mL
1589
Calibratore multidroga DRI 1, 25 mL
1591
Calibratore multidroga DRI 2, 10 mL
1592
Calibratore multidroga DRI 2, 25 mL
1594
Calibratore multidroga DRI 3, 10 mL
1595
Calibratore multidroga DRI 3, 25 mL
1597
Calibratore multidroga DRI 4, 10 mL
1598
Calibratore multidroga DRI 4, 25 mL
DOAT-2MAS® DOA Total – Livello 4, 6 x 18 mL
DOAT-3MAS® DOA Total – Livello 5, 6 x 18 mL
Utilizzare con cutoff di 300 ng/mL
1664
Calibratore negativo DRI, 10 mL
1388
Calibratore negativo DRI, 25 mL
1609
Calibratore per gli oppiacei DRI 1, 25 mL
0034
Calibratore urina basso DRI, 5 mL
1610
Calibratore per gli oppiacei DRI 3, 25 mL
0036
Calibratore per l'urina alto DRI, 5 mL
DOAT-4MAS® DOA Total – Livello 2, 6 x 18 mL
DOAT-5MAS® DOA Total – Livello 3, 6 x 18 mL
Precauzioni e avvertenze
1.
PERICOLO: Questo test è unicamente per uso diagnostico in vitro. I reagenti sono
dannosi se ingeriti.
2.I reagenti utilizzati nei componenti del saggio contengono ≤ 0,09% di sodio azide, ≤ 0,2%
di albumina sierica bovina (BSA) e ≤ 0,5% di anticorpo specifico del farmaco.Evitare il
contatto con la pelle e le membrane mucose. Lavare le aree colpite con acqua abbondante.
Richiedere immediatamente l'aiuto di un medico se il prodotto è stato posto a contatto con
gli occhi o se è stato ingerito. L'azoturo di sodio può reagire con il piombo o il rame delle
condutture e formare azoturi metallici potenzialmente esplosivi. Nello smaltire i reagenti
aver cura di sciacquare sempre con acqua abbondante onde prevenirne l'accumulo. Pulire
le superfici metalliche esposte con idrossido di sodio al 10%.
3.Non utilizzare i reagenti oltre la data di scadenza.
H317 - Può provocare una reazione allergica cutanea.
H334 - Può provocare sintomi allergici o asmatici o difficoltà respiratorie se inalato.
Evitare di respirare la polvere o i vapori. Gli indumenti da lavoro contaminati non devono essere
portati fuori dal luogo di lavoro. Indossare guanti protettivi/Proteggere gli occhi/il viso. In caso di
ventilazione insufficiente utilizzare un apparecchio respiratorio. In caso di contatto con la pelle:
lavare abbondantemente con acqua e sapone. IN CASO DI INALAZIONE: se la respirazione è
difficile, trasportare l’infortunato all’aria aperta e mantenerlo a riposo in posizione che favorisca
la respirazione. In caso di irritazione o eruzione della pelle: consultare un medico. In caso
di sintomi respiratori: contattare un CENTRO ANTIVELENI o un medico. Lavare gli indumenti
contaminati prima di indossarli nuovamente. Smaltire il prodotto/recipiente in apposite aree in
conformità alle norme locali, regionali, nazionali e internazionali.
Preparazione e conservazione dei reagenti
I reagenti sono pronti per l'uso. Non richiedono alcuna preparazione. Tutti i componenti del saggio,
conservati alla temperatura di 2–8 °C sono stabili fino alla data di scadenza indicata sull'etichetta.
Raccolta e manipolazione del campione
Raccogliere i campioni di urina in contenitori puliti di vetro o di plastica. Si consiglia di saggiare
campioni freschi di urina.
The Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Programs: Final Guidelines,
(Linee direttive inderogabili per i programmi di test tossicologici sui luoghi di lavoro federali linee direttive finali) raccomandano di refrigerare i campioni non saggiati entro 7 giorni dalla
data di arrivo al laboratorio in unità di refrigerazione sicure.
I campioni con un intervallo del pH compreso tra 3 e 11 sono idonei per il test.
Usare la massima cura per mantenere i campioni pipettati privi di grossi residui. Centrifugare
i campioni particolarmente torbidi prima dell'analisi. La diluizione dei campioni di urina può
inficiare i risultati del test. Se si sospetta la contraffazione del campione, raccogliere un altro
campione da saggiare e inviare entrambi i campioni al laboratorio per l'analisi.
Trattare tutti i campioni di urina come materiale potenzialmente infetto.
Procedimento
Per l'esecuzione del saggio si possono usare analizzatori in grado di mantenere una temperatura
costante, di pipettare i campioni, miscelare i reagenti e misurare i tassi enzimatici a 340 nm e i
tempi di reazione con accuratezza.
Prima di eseguire il saggio, consultare i parametri chimici riportati nelle istruzioni di ciascun
analizzatore per l'applicazione desiderata.
Controllo della qualità e calibrazione
La buona pratica di laboratorio raccomanda di utilizzare campioni di controllo per assicurare
la corretta esecuzione del saggio. Utilizzare controlli prossimi al calibratore di cutoff per
convalidare la calibrazione. I risultati del controllo devono ricadere entro intervalli prestabiliti,
determinati dal laboratorio. Se ricadono esternamente agli intervalli predefiniti, il saggio deve
essere considerato non valido. Tutti i requisiti di controllo di qualità devono essere eseguiti
in conformità con i regolamenti locali, regionali e/o statali o con i requisiti di accreditamento
vigenti.
Analisi qualitativa
Per l'analisi qualitativa dei campioni, utilizzare il calibratore da 300 ng/mL o da 2.000 ng/mL come
livello di cutoff per distinguere i campioni "positivi" da quelli "negativi". Il calibratore per oppiacei
basso per urina DRI contiene 300 ng/mL di morfina. Il calibratore multidroga DRI 2 contiene 2.000
ng/mL di morfina.
Analisi semi-quantitativa
Per l'analisi semi-quantitativa, utilizzare tutti i calibratori.
Risultati e valori attesi
Risultati qualitativi
Un campione in cui si rileva una variazione del valore di assorbanza (∆A) uguale o superiore al
valore ottenuto con il calibratore di cutoff è considerato positivo. Un campione che rilevi una
variazione del valore di assorbanza (∆A) inferiore al valore ottenuto con il calibratore di cutoff è
considerato negativo.
Risultati semi-quantitativi
Una stima approssimativa della concentrazione dell'oppiaceo nei campioni può essere ottenuta
eseguendo una curva standard con tutti i calibratori e quantificando i campioni esterni alla
curva standard. Fare riferimento alla documentazione protocollare specifica dell'analizzatore.
Limitazioni
Qualitativo
La concordanza complessiva tra il saggio per gli oppiacei DRI su Hitachi 717 e la GC/MS era
del 96,1% per il cutoff di 300 ng/mL, con accordo del 100,0% (91 su 91) per i campioni positivi e del 92,0% (81 su 88) per i campioni negativi. La concordanza complessiva per il cutoff
2.000 ng/mL era del 97,5% con accordo del 100,0% (89 su 89) per i campioni positivi e del 94,6%
(70 su 74) per quelli negativi.
Saggio qualitativo per gli oppiacei
Saggio qualitativo per gli oppiacei
DRI, cutoff 2.000 ng/mL
DRI, cutoff 300 ng/mL
1.Un risultato positivo di questo saggio è unicamente indicativo della presenza di oppiacei
e non è necessariamente correlato con l'entità degli effetti fisiologici e psicologici.
2. Un risultato positivo del saggio deve essere confermato da un altro metodo non
immunologico quale una gas-cromatografia (GC), una cromatografia su strato sottile
(TLC, thin-layer chromatography) o una gascromatografia/spettrometria di massa
(GC/MS).
3. Il test è indicato per l'uso unicamente con urina umana.
4. Vi è inoltre la possibilità che altre sostanze e/o fattori (ad es. tecnici o procedurali) non
elencati nella tabella delle specificità possano interferire con il test causando dei falsi
risultati.
+
Caratteristiche prestazionali tipiche
Hitachi 717
I risultati prestazionali ottenuti sull'analizzatore Hitachi 717 sono riportati in basso.4 I risultati
conseguiti nel vostro laboratorio potrebbero differire.
-
+
+
91
7
-
0
81
Hitachi 717
Hitachi 717 qualitativo
Saggio semi-quantitativo per gli
oppiacei DRI, cutoff 300 ng/mL
Precisione totale
% CV
Controllo basso (225 ng/mL)
374 + 2,2
0,6
374 + 2,6
0,7
Composto
Cutoff
401 + 2,3
0,6
401 + 3,2
0,8
Acetone
1.000 mg/dL
Emoglobina
Controllo alto (375 ng/mL)
421 + 2,4
0,6
421 + 3,0
0,7
Acido ascorbico
1.500 mg/dL
Etanolo
Utilizzando il calibratore di
cutoff da 2.000 ng/mL
Precisione intrasequenza
Media + SD
(mA/min)
Controllo basso (1.500 ng/mL)
Media + SD
(mA/min)
-
+
89
4
-
0
70
Saggio semi-quantitativo per gli
oppiacei DRI, cutoff 2.000 ng/mL
Media + SD
(Standard
Deviation,
deviazione
standard)
(mA/min)
Utilizzando il calibratore di
cutoff da 300 ng/mL
GC/MS
Semi-quantitativo
La concordanza complessiva tra il saggio per gli oppiacei DRI su Hitachi 717 e la GC/MS era
del 95,5% per il cutoff di 300 ng/mL, con accordo del 98,8% (90 su 91) per i campioni positivi
e del 92,0% (81 su 88) per i campioni negativi. La concordanza complessiva per il cutoff
2.000 ng/mL era del 98,2% con accordo del 100,0% (89 su 89) per i campioni positivi e del 95,9%
(71 su 74) per quelli negativi.
Precisione
Le tabelle seguenti riepilogano i risultati sulla precisione ottenuti testando il calibratore di
300 ng/mL, il calibratore da 2.000 ng/mL e i rispettivi controlli alto e basso.
Precisione intrasequenza
GC/MS
+
% CV
Hitachi 717
Precisione totale
GC/MS
-
+
+
90
7
-
1
81
Hitachi 717
Concentrazione
GC/MS
-
+
89
3
-
0
71
Composto
Concentrazione
300 mg/dL
1%
Acido ossalico
100 mg/dL
Galattosio
10 mg/dL
Albumina sierica
umana (HSA)
500 mg/dL
Glucosio
3 g/dL
% CV
Media + SD
(mA/min)
% CV
Aspirina
100 µg/mL
Ibuprofene
100 µg/mL
458 + 2,6
0,6
458 + 3,6
0,8
Caffeina
100 µg/mL
Paracetamolo
100 µg/mL
Cutoff
486 + 3,2
0,7
486 + 4,3
0,9
Cloruro di sodio
Riboflavina
7,5 mg/dL
Controllo alto (2.500 ng/mL)
507 + 3,1
0,6
507 + 4,2
0,8
Creatinina
Hitachi 717 semi-quantitativo
Utilizzando il calibratore di
cutoff da 300 ng/mL
Precisione intrasequenza
Media + SD
(ng/mL)
Controllo basso (225 ng/mL)
Cutoff
Controllo alto (375 ng/mL)
Utilizzando il calibratore di
cutoff da 2.000 ng/mL
500 mg/dL
Urea
6 g/dL
Specificità
La specificità del saggio è stata valutata con i calibratori di cutoff da 300 ng/mL e da
2.000 ng/mL. I risultati sono presentati nelle tabelle seguenti.
Precisione totale
% CV
Media + SD
(ng/mL)
% CV
226 + 6,0
2,7
226 + 8,2
3,6
303 + 8,1
2,7
303 + 9,4
3,1
Composto
379 + 15,1
4,0
379 + 15,9
4,2
Precisione intrasequenza
1,5 g/dL
I composti che appaiono elencati nella tabella seguente hanno prodotto un risultato
approssimativamente equivalente al calibratore di cutoff.
Precisione totale
Concentrazione cutoff
300 ng/mL
Concentrazione cutoff
2.000 ng/mL
6-monoacetil morfina
280
2.500
Codeina
150
950
Diidrocodeina
650
4.500
Media + SD
(ng/mL)
% CV
Media + SD
(ng/mL)
% CV
Eroina
380
2.400
Controllo basso (1.500 ng/mL)
1.513 + 42,8
2,8
1.513 + 54,4
3,6
Idrocodone
650
6.500
Cutoff
2.008 + 64,7
3,2
2.008 + 83,5
4,2
Idromorfone
1.400
13.000
4,9
Levorfanolo
10.500
87.000
Controllo alto (2.500 ng/mL)
2.517 + 88,0
3,5
2.517 + 124,4
Sensibilità
La sensibilità, definita come la minima concentrazione differenziabile dall'urina negativa con il
95% di confidenza, è di 6 ng/mL per il saggio con cutoff di 300 ng/mL e di 26 ng/mL per il saggio
con cutoff di 2.000 ng/mL.
Morfina
300
2.000
Morfina-3-glucuronide
340
2.300
Morfina-6-glucuronide
270
1.350
Accuratezza
Centosettantanove (179) campioni di urina sono stati saggiati con il saggio per il rilevamento
degli oppiacei DRI al cutoff di 300 ng/mL e centosessantatre (163) campioni di urina sono stati
sottoposti al saggio per il rilevamento degli oppiacei DRI al cutoff di 2.000 ng/mL su analizzatore
Hitachi 717 e con GC/MS.
Ossicodone
10.500
90.000
Ossimorfone
37.000
280.000
Ranitidina
500.000
2.000.000
2
Concentrazione dei composti che hanno prodotto un risultato negativo con entrambi i calibratori
di 300 ng/mL e 2.000 ng/mL:
Concentrazione
(ng/mL)
Composto
Concentrazione
(ng/mL)
Acido acetilsalicilico
500.000
Ibuprofene
500.000
Amitriptilina
100.000
Imipramina
100.000
Anfetamina
1.000.000
Maprotilina
100.000
Benzoilecgonina
1.000.000
Meperidina
20.000
Caffeina
10.000
Metadone
500.000
Carbamazepina
500.000
Metronidazolo
1.000.000
Ciclazocina
35.000
Nalbufina
1.000.000
Clomipramina
100.000
Naloxone
Clorpromazina
10.000
Naltrexone
3.000.000
Desipramina
100.000
Normorfina
100.000
Destrometorfano
100.000
Nortriptilina
100.000
Doxepina
100.000
Oxazepam
250.000
Efedrina
1.000.000
Paracetamolo
500.000
Fenciclidina (PCP)
1.000.000
Secobarbitale
1.000.000
Fenobarbital
1.000.000
Talwin
Fentanil
100.000
Tebaina
Flufenazina
100.000
Tioridazina
100.000
Fluoxetina
100.000
Tramadolo
100.000
Composto
100.000
100.000
2.000
Bibliografia
1.
2.
3.
4.
Urine Testing for Drugs of Abuse. National Institute on Drug Abuse (NIDA). Research
Monograph 73, 1986.
Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Programs. National Institute
on Drug Abuse. Federal Register Vol. 53, No 69, pp 11970 (1988).
Rubenstein KE, Schneider RS, and EF Ullman: Homogeneous Enzyme Immunoassay:
A New Immunochemical Technique. Biochem Biophys Res Commun 47, 846-851 (1972).
Data on file at Microgenics, a part of Thermo Fisher Scientific.
Microgenics Corporation
46500 Kato Road
Fremont, CA 94538 USA
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e alla clientela negli USA:
1-800-232-3342
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3
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