Dosaggio DRI® Metadone - Thermo Fisher Scientific

Dosaggio DRI® Metadone
Per uso diagnostico in vitro
10016403 (3 x 18 mL Kit)
0596 (100 mL Kit)
0597 (500 mL Kit)
Uso previsto
Il dosaggio DRI ® per metadone è previsto per la determinazione qualitativa e semiquantitativa
del metadone nell’urina umana.
Questo dosaggio fornisce unicamente un risultato analitico preliminare. Per ottenere un risultato
analitico di conferma, è necessario utilizzare un metodo chimico alternativo a specificità
più elevata. Il metodo di conferma più idoneo è la gascromatografia/spettrometria di massa
(GC/MS).1,2 Qualsiasi risultato di analisi riguardante sostanze stupefacenti, soprattutto nel caso
di un risultato preliminare positivo, va trattato con la considerazione clinica e la discrezione
professionale opportune.
Sommario e spiegazione del metodo
Il metadone, una sostanza oppiacea sintetica, è usato nel trattamento della tossicodipendenza
da eroina. La compliance del paziente per quanto riguarda il trattamento a base di metadone è
fondamentale e può essere monitorata con efficacia mediante la ricerca nell’urina del metadone
o del suo metabolita.
Quando il metadone è assunto per via orale, viene rapidamente metabolizzato nel fegato.
Il metabolita principale del metadone è formato dalla N-dimetilazione della sostanza in
normetadone. Tuttavia il normetadone viene raramente rilevato poiché si disidrata rapidamente
formando 2-etilidene-1, 5-dimetil-3, 3-difenilpirrolidina, comunemente nota come EDDP.3,4
L’ulteriore dimetilazione della EDDP forma 2-etil-5-metil-3, 3-difenil-1-pirrolidina (EMDP) che è il
metabolita secondario del metadone.
Sono disponibili svariate tecniche di analisi, quali la TLC, la GC e immunodosaggi, finalizzate al
controllo della compliance del paziente per quanto riguarda il trattamento a base di metadone.5
Sia la TLC che la GC 6 sono laboriose e soggette a interferenza. Gli immunodosaggi possono
invece essere eseguiti facilmente con un analizzatore chimico-clinico automatico. La possibilità
di determinare la presenza di metadone nelle urine mediante immunodosaggio contribuirà a una
maggiore diffusione del monitoraggio della compliance dei pazienti.
Il dosaggio DRI per metadone è un immunodosaggio enzimatico omogeneo con reagenti liquidi
pronti per l’uso.7 Il dosaggio utilizza anticorpi specifici in grado di individuare il metadone nell’urina.
Il dosaggio si basa sulla competizione di sostanza stupefacente marcata con enzima glucosio-6fosfato deidrogenasi (G6PDH) con la sostanza stupefacente contenuta nel campione di urina per
un numero fisso di siti di legame anticorpale specifico. In assenza di sostanza stupefacente nel
campione, l’anticorpo specifico si lega alla sostanza stupefacente marcata con G6PDH e l’attività
enzimatica risulta inibita. Questo fenomeno crea una relazione diretta tra la concentrazione della
sostanza stupefacente nel campione di urina e l’attività enzimatica. L’attività dell’enzima G6PDH
viene determinata spettrofotometricamente a 340 nm misurando la sua capacità di convertire la
nicotinamide adenina dinucleotide (NAD) in NADH.
Reagenti
Reagente anticorpo/substrato:
contiene anticorpo monoclonale anti-metadone, glucosio-6-fosfato (G6P) e nicotinamide adenina
dinucleotide (NAD) in tampone Tris con azoturo di sodio come conservante.
Reagente coniugato enzimatico:
contiene derivato del metadone marcato con glucosio-6-fosfato deidrogenasi (G6PDH) in tampone
Tris con azoturo di sodio come conservante.
Ulteriori materiali necessari (venduti separatamente)
1664 1388 1588 1589 1591 1592 1594 1595 1597 1598 100200 Descrizione del kit
Calibratore negativo DRI, 10 mL
Calibratore negativo DRI, 25 mL
Calibratore multidroga DRI 1, 10 mL
Calibratore multidroga DRI 1, 25 mL
Calibratore multidroga DRI 2, 10 mL
Calibratore multidroga DRI 2, 25 mL
Calibratore multidroga DRI 3, 10 mL
Calibratore multidroga DRI 3, 25 mL
Calibratore multidroga DRI 4, 10 mL
Calibratore multidroga DRI 4, 25 mL
Set di controlli MGC per DAU primarie,
3 x 5 mL cada uno (Alto ed Basso)
Avvertenze e precauzioni
Il presente dosaggio è esclusivamente per uso diagnostico in vitro. I componenti sono nocivi
se ingeriti.
PERICOLO: i reagenti utilizzati nei componenti del dosaggio contengono ≤ 0,09% di sodio azide,
≤ 0,2% di albumina sierica bovina (BSA) e ≤ 0,5% di anticorpo specifico del farmaco. Evitarne
il contatto con la pelle e le mucose. In caso di contatto, sciacquare le aree interessate con
abbondanti quantità di acqua. Se i reagenti vengono ingeriti o vengono a contatto con gli occhi,
rivolgersi immediatamente ad un medico. Il sodio azide può reagire con il rame o il piombo delle
tubature di scarico generando azidi metalliche potenzialmente esplosive. Quando si gettano
via tali reagenti, sciacquare sempre con abbondanti quantità di acqua per impedire l’accumulo
di azidi. Pulire le superfici metalliche esposte con una soluzione di idrossido di sodio al 10%.
H317 - Può provocare una reazione allergica cutanea.
H334 - Può provocare sintomi allergici o asmatici o difficoltà respiratorie se inalato.
Evitare di respirare la polvere o i vapori. Gli indumenti da lavoro contaminati non devono essere
portati fuori dal luogo di lavoro. Indossare guanti protettivi/Proteggere gli occhi/il viso. In caso di
ventilazione insufficiente utilizzare un apparecchio respiratorio. In caso di contatto con la pelle:
lavare abbondantemente con acqua e sapone. IN CASO DI INALAZIONE: se la respirazione è
difficile, trasportare l’infortunato all’aria aperta e mantenerlo a riposo in posizione che favorisca
la respirazione. In caso di irritazione o eruzione della pelle: consultare un medico. In caso
di sintomi respiratori: contattare un CENTRO ANTIVELENI o un medico. Lavare gli indumenti
contaminati prima di indossarli nuovamente. Smaltire il prodotto/recipiente nelle apposite aree
in conformità alla regolamentazione locale/regionale/nazionale/internazionale.
Non usare i reagenti scaduti.
Preparazione e conservazione dei reagenti
I reagenti sono pronti per l’uso, e pertanto non richiedono alcuna preparazione. Tutti i componenti
del dosaggio, quando conservati a 2-8°C, sono stabili fino alla data di scadenza indicata sulle
rispettive etichette.
Raccolta e trattamento del campione
Raccogliere i campioni di urina in recipienti di vetro o plastica. Si consiglia di analizzare campioni
di urina freschi.
Ai sensi delle direttive The Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Programs:
Final Guidelines, i campioni non analizzati entro 7 giorni dal loro arrivo al laboratorio vanno
conservati in frigoriferi di sicurezza.
I campioni con un pH da 3 a 11 sono idonei per essere analizzati con questo dosaggio.
È necessario fare il possibile per mantenere i campioni pipettati privi di residui solidi; si consiglia
di centrifugare prima dell’analisi i campioni molto torbidi. L’adulterazione dei campioni di urina
può dare luogo a risultati errati. Se si sospetta adulterazione, ottenere un altro campione e inviare
entrambi i campioni al laboratorio per l’analisi.
Manipolare tutti i campioni di urina come se fossero potenzialmente infettivi.
Procedura di analisi
Ai fini del presente dosaggio è possibile utilizzare gli analizzatori in grado di mantenere una
temperatura costante, pipettare i campioni, miscelare i reagenti, misurare i tassi enzimatici a
340 nm e regolare con precisione i tempi di reazione.
Prima di eseguire il dosaggio, consultare il foglio del protocollo applicativo specifico per
l’analizzatore in dotazione, contenente i parametri e/o ulteriori istruzioni per l’uso.
Controllo di qualità e calibrazione
Analisi qualitativa
Per l’analisi qualitativa dei campioni, usare il calibratore da 300 ng/mL come valore di cutoff. Il
calibratore DRI 2, contenente 300 ng/mL di metadone, viene usato come cutoff di riferimento per
la distinzione tra i campioni positivi e i campioni negativi.
Analisi semiquantitativa
Per l’analisi semiquantitativa, usare tutti i calibratori.
Una buona prassi di laboratorio prevede l’analisi di campioni di controllo allo scopo di garantire
le corrette prestazioni del dosaggio. Per convalidare la calibrazione, usare controlli vicini al
calibratore sovrapponibile al cutoff. I risultati dei controlli devono rientrare nel range prestabilito.
Se i risultati non rientrano nel range prestabilito, i risultati dell’analisi non sono validi. Tutti i
requisiti di controllo della qualità vanno soddisfatti in conformità alle normative vigenti o ai
requisiti per l’accreditamento.
Risultati e valori attesi
Risultati qualitativi
Un campione che mostra una variazione nel valore di assorbanza (∆A) uguale o maggiore rispetto
al valore ottenuto mediante il calibratore per valore limite è considerato positivo. Un campione che
mostra una variazione nel valore di assorbanza (∆A) minore rispetto a quello ottenuto mediante
il calibratore per valore limite è considerato negativo.
Risultati dell’analisi semiquantitativa
Per ottenere una stima approssimativa della concentrazione di sostanza nei campioni, tracciare
una curva standard con tutti i calibratori e quantificare i campioni che ricadono al di fuori della
curva standard.
Limitazioni
Table Con’t
1. Un risultato di analisi positivo indica solo la presenza di metadone e non si correla
necessariamente all’intensità degli effetti fisiologici e psicologici.
2. Un risultato di analisi positivo ottenuto mediante il presente dosaggio va confermato
mediante un altro metodo di tipo non immunologico, come la GC, la GC/MS o la TLC.
3. Il dosaggio è previsto per essere eseguito unicamente su urina umana.
4. È possibile che altre sostanze e/o fattori (come ad esempio elementi tecnici o procedurali)
diversi da quelli elencati nella tabella di specificità possano interferire con il dosaggio e
dare luogo a risultati falsi.
Composto
Fenciclidina
Fenobarbitale
50.000
Meperidina
150.000
Metabolita del metadone (EDDP)
Precisione
Sono stati analizzati il calibratore negativo, il calibratore da 300 ng/mL e il calibratore da
1000 ng/mL e sono stati ottenuti i seguenti risultati.
Morfina
Qualitativa:
Oxazepam
Mean ± SD
(mA/min)
%CV
%CV
10.000
Metabolita del metadone (EMDP)
Tra Analisi (n=12)
Mean ± SD
(mA/min)
40.000
1.000.000
Imipramina
A continuación se muestran los resultados de rendimiento obtenidos con el analizador Hitachi 717.8
I valori ottenuti nei diversi laboratori possono essere differenti da quelli riportati in questa sede.
Calibratore
500.000
Fenitoina
Caratteristiche di rendimento del test tipiche
Intra-analisi (n=20)
Concentrazioni
Analizzate (ng/mL)
10.000
200.000
Nortriptilina
50.000
Orfenadrina
1.000.000
Paracetamolo
500.000
1.000.000
Primidone
24.000
Prometazina
Negativo
258 ± 1,3
0,5
258 ± 1,3
0,5
300 ng/mL
340 ± 2,4
0,7
340 ± 2,9
0,8
Secobarbitale
1000 ng/mL
472 ± 2,4
0,5
472 ± 4,6
0,9
Teofillina
100.000
Propossifene
250.000
1.000.000
50.000
Acido valproico
Semiquantitativa:
Intra-analisi (n=20)
Verapamil
Tra Analisi (n=12)
Controllo
Mean ± SD
(ng/mL)
%CV
Mean ± SD
(ng/mL)
%CV
Controllo 1
166 ± 4,5
2,7
166 ± 5,7
3,4
Controllo 2
403 ± 6,8
1,7
406 ± 7,1
1,7
150.000
1.000.000
Bibliografia
1. Urine Testing for Drugs of Abuse. National Institute on Drug Abuse (NIDA) Research
Monograph 73, 1986.
2. Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Programs. National Institute
on Drug Abuse. Federal Register Vol. 53, No 69 pp 11970 (1988).
3. Pohland A, Boaz HE and HR Sullivan. Synthesis and Identification of Metabolites
Resulting from the Biotransformation of d,l-Methadone in Man and in Rat. J Med Chem
14:194-197 (1971).
4. Baselt RC and LJ Casarett. Urinary Excretion of Methadone in Man. Clin Pharm Therap
13:64-70 (1971).
5. Ferrara SD. Comparison of GLC-EMIT Analysis for the Assay of Methadone and Its
Metabolite in Urine. Vet Hum Toxicology 21 (Suppl):169-172 (1979).
6. Roerig DL et al. Radioimmunoassay Compared to Thin-Layer and Gas-Liquid
Chromatography for Detecting Methadone in Human Urine. Clin Chem 22:1915-1918 (1976).
7. Rubenstein KE, Schneider RS, and EF Ullman: Homogeneous Enzyme Immunoassay: a
New Immunochemical Technique. Biochem Biophys Res Commun 47:846-851, 1972.
8. Dati disponibili presso la Microgenics, che fa parte della Thermo Fisher Scientific.
Sensibilità
La sensibilità, definita come la concentrazione più bassa differenziabile dal calibratore negativo
per l’urina con una confidenza del 95%, è di 10 ng/mL.
Accuratezza
Novantasei campioni clinici di urine sono stati analizzati sia mediante un dosaggio per metadone
disponibile in commercio, sia mediante il dosaggio DRI per metadone. La percentuale di
concordanza tra i due metodi è stata del 100%. Quarantasei campioni sono risultati positivi e
cinquanta sono risultati negativi con entrambi i dosaggi. Inoltre, tutti i quarantasei campioni
positivi sono stati analizzati mediante GC/MS, che ha confermato la presenza di metadone.
Specificità
Sono state analizzate diverse sostanze potenzialmente interferenti per rilevare l’eventuale
reattività crociata con il dosaggio. La Tabella 1 riporta i composti che danno luogo a un risultato
positivo alle concentrazioni elencate. La Tabella 2 riporta i composti che danno luogo a un risultato
negativo alle concentrazioni elencate.
Tabella 1
Composto
Concentrazioni
Analizzate (ng/mL)
Metadone
300
Metadolo
750
Composto
Concentrazioni
Analizzate (ng/mL)
Tabella 2
Levo-alfa-acetil-metadolo (LAAM)
5.000
Acido acetilsalicilico
1.000.000
Amfetamina
1.000.000
Amitriptilina
50.000
Benzoilecgonina
400.000
Caffeina
100.000
Carbamazepina
Per gli aggiornamenti del foglietto illustrativo, visitare:
www.thermoscientific.com/diagnostics
20.000
Cocaina
200.000
Codeina
500.000
Dextrometorfano
Microgenics Corporation
46500 Kato Road
Fremont, CA 94538 USA
Assistenza tecnica e assistenza
alla clientela negli USA:
1-800-232-3342
Altri Paesi:
Consultare il rappresentante Thermo Fisher Scientific di zona.
250.000
Difenidramina
1.000.000
Efedrina
1.000.000
0666-7-IT
2015 10
2
Microgenics GmbH
Spitalhofstrasse 94
D-94032 Passau, Germany
Tel: +49 (0) 851 886 89 0
Fax: +49 (0) 851 886 89 10