Saggio per la rilevazione dei cannabinoidi DRI®
Per uso diagnostico in vitro
10014665 (3 x 18 mL)
0185 (100 mL Kit)
0186 (500 mL Kit)
Uso previsto
Il saggio garantisce unicamente un risultato analitico preliminare. Utilizzare un metodo
chimico alternativo più specifico a conferma del risultato analitico. La gas-cromatografia/
spettrometria di massa (GC/MS) costituisce il metodo di conferma d'elezione.1,2 Avvalersi di
considerazioni cliniche e del giudizio professionale per interpretare i risultati di qualsiasi test
sulle droghe d'abuso soprattutto quando si utilizzano risultati positivi preliminari.
Evitare di respirare la polvere o i vapori. Gli indumenti da lavoro contaminati non devono essere
portati fuori dal luogo di lavoro. Indossare guanti protettivi/Proteggere gli occhi/il viso. In caso di
ventilazione insufficiente utilizzare un apparecchio respiratorio. In caso di contatto con la pelle:
lavare abbondantemente con acqua e sapone. IN CASO DI INALAZIONE: se la respirazione è
difficile, trasportare l’infortunato all’aria aperta e mantenerlo a riposo in posizione che favorisca
la respirazione. In caso di irritazione o eruzione della pelle: consultare un medico. In caso
di sintomi respiratori: contattare un CENTRO ANTIVELENI o un medico. Lavare gli indumenti
contaminati prima di indossarli nuovamente. Smaltire il prodotto/recipiente nelle apposite aree
in conformità alla regolamentazione locale/regionale/nazionale/internazionale.
Riepilogo e presentazione del test
Preparazione e conservazione dei reagenti
Il saggio per la rilevazione del cannabinoide DRI di è indicato per la determinazione qualitativa
o semi-quantitativa dei cannabinoidi (THC) nell'urina umana.
È opinione ampiamente condivisa che il principio attivo principale della marijuana e/o dell'hashish
in grado di produrre effetti allucinogeni ed altri effetti biologici sia il ∆9-tetraidrocannabinolo
(∆9-THC). Il ∆9-THC viene rapidamente assorbito e quasi completamente metabolizzato per
inalazione o nel tratto gastrointestinale. Il metabolita principale del ∆9‑THC (vale a dire il 11-nor∆-9-THC-acido carbossilico) diviene rilevabile nel plasma, nelle feci e nell'urina nel giro di poche
ore dall'assunzione.3 L'inalazione passiva del fumo di marijuana può indurre un innalzamento
della concentrazione di THC nell'urina fino a 10–40 ng/mL.4,5 Negli utilizzatori cronici, il THC tende
ad accumularsi nei tessuti adiposi più rapidamente di quanto sia escreto. Ciò determina tempi
di rilevamento più lunghi nelle urine degli utenti cronici rispetto agli utilizzatori occasionali.
Il saggio per la rilevazione del THC DRI® è un saggio immunoenzimatico in fase omogenea
che utilizza reagenti liquidi pronti per l'uso.6 Il saggio utilizza un anticorpo specifico in grado di
rilevare il principale metabolita del ∆9-THC nell'urina. Il saggio si basa sulla concorrenza tra la
sostanza stupefacente marcata con un enzima glucosio-6-fosfato deidrogenasi (G6PD) e quella
contenuta nel campione di urina per un quantitativo determinato di siti di legame specifici
dell'anticorpo. Se il campione non contiene droga, l'anticorpo specifico si lega alla sostanza
stupefacente marcata con la G6PD inibendo l'attività enzimatica. Questo fenomeno crea una
relazione diretta tra la concentrazione della droga nell'urina e l'attività enzimatica. L'attività
della G6PD viene determinata mediante spettrofotometria a 340 nm misurando la sua abilità di
convertire il NAD (nicotinammide adenina dinucleotide) in NADH.
I reagenti sono pronti per l'uso. Non richiedono alcuna preparazione. Tutti i componenti del
saggio, correttamente conservati alla temperatura di 2–8 °C sono stabili fino alla data di
scadenza indicata sull'etichetta.
Raccolta e manipolazione del campione
Raccogliere i campioni di urina in contenitori puliti di vetro o di plastica. Si consiglia di saggiare
campioni freschi di urina.
The Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Programs: Final Guidelines:
Notice (Linee direttive inderogabili per i programmi di test tossicologici sui luoghi di lavoro
federali - linee direttive finali) raccomandano di refrigerare i campioni non sottoposti al primo
test entro 7 giorni dalla data di arrivo al laboratorio in unità di refrigerazione sicure.2
I campioni con un intervallo del pH compreso tra 3 e 11 sono idonei per il test.
Usare la massima cura per mantenere i campioni pipettati privi di grossi residui. Centrifugare
i campioni particolarmente torbidi prima dell'analisi. La diluizione dei campioni di urina può
inficiare i risultati del test. Se si sospetta la contraffazione del campione, raccogliere un altro
campione da saggiare e inviare entrambi i campioni al laboratorio per l'analisi.
Trattare tutti i campioni di urina come materiale potenzialmente infetto.
Procedimento
Reagenti
Reagente anticorpo/substrato.
Contiene anticorpi monoclonali di topo anti-∆9-THC, glucosio-6-fosfato (G6P), e il nicotinammide
adenina dinucleotide (NAD) in tampone Tris con azoturo di sodio come conservante.
Reagente enzima-coniugato.
Contiene ∆9-THC marcato con glucosio-6-fosfato deidrogenasi (G6PD) in tampone Tris con
azoturo di sodio come conservante.
Materiali aggiuntivi occorrenti (venduti separatamente):
Descrizione del kit
1664 Calibratore negativo DRI, 10 mL
1388 Calibratore negativo DRI, 25 mL
0235
Calibratore THC 20 ng/mL DRI, 5 mL
1397
Calibratore THC 20 ng/mL DRI, 25 mL
0042
Calibratore THC 50 ng/mL DRI, 5 mL
1398
Calibratore THC 50 ng/mL DRI, 25 mL
0044
Calibratore THC 100 ng/mL DRI, 5 mL
1399
Calibratore THC 100 ng/mL DRI, 25 mL
0206
Calibratore THC 200 ng/mL DRI, 5 mL
1400
Calibratore THC 200 ng/mL DRI, 25 mL
Precauzioni e avvertenze
PERICOLO 1.Questo test è unicamente per uso diagnostico in vitro. I reagenti sono dannosi se
ingeriti.
2.
I componenti del dosaggio contengono ≤0,09% di sodio azide, ≤0,2% di albumina
sierica bovina (BSA) e ≤0,5% di anticorpo specifico del farmaco (topo). Evitare il
contatto con la pelle e le membrane mucose. Lavare le aree colpite con acqua
abbondante. Richiedere immediatamente l'aiuto di un medico se il prodotto
è stato posto a contatto con gli occhi o se è stato ingerito. L'azoturo di sodio
può reagire con il piombo o il rame delle condutture e formare azoturi metallici
potenzialmente esplosivi. Nello smaltire i reagenti aver cura di sciacquare
sempre con acqua abbondante onde prevenirne l'accumulo. Pulire le superfici
metalliche esposte con idrossido di sodio al 10%.
3.Non utilizzare i reagenti oltre la data di scadenza.
H317 - Può provocare una reazione allergica cutanea.
H334 - Può provocare sintomi allergici o asmatici o difficoltà respiratorie se inalato.
Per l'esecuzione del saggio si possono usare analizzatori in grado di mantenere una temperatura
costante, di pipettare i campioni, miscelare i reagenti e misurare i tassi enzimatici a 340 nm e i
tempi di reazione con accuratezza.
Prima di eseguire il saggio, consultare i parametri chimici riportati nelle istruzioni di ciascun
analizzatore per l'applicazione desiderata.
Controllo della qualità e calibrazione
La buona pratica di laboratorio raccomanda di utilizzare campioni di controllo per assicurare la
corretta esecuzione del saggio. Utilizzare controlli prossimi al calibratore di cutoff per convalidare
la calibrazione. I risultati del controllo devono ricadere entro intervalli prestabiliti. Se ricadono
esternamente agli intervalli predefiniti, il saggio deve essere considerato non valido. Tutti i requisiti
di controllo di qualità devono essere eseguiti in conformità con i regolamenti locali, regionali e/o
statali o con i requisiti di accreditamento vigenti.
Analisi qualitativa
Per l'analisi qualitativa dei campioni, utilizzare i calibratori 11-nor-D-∆9-THC-acido carbossilico da
20 ng/mL, 50 ng/mL, o 100 ng/mL come livello di cutoff. I calibratori THC DRI sono utilizzati come
riferimenti di cutoff per distinguere i campioni “positivi” da quelli “negativi”.
Analisi semi-quantitativa
Per l'analisi semi-quantitativa, utilizzare tutti i calibratori.
Risultati e valori attesi
Risultati qualitativi
Un campione in cui si rileva una variazione del valore di assorbanza (∆A) uguale o superiore al
valore ottenuto con il calibratore di cutoff è considerato positivo. Un campione che rilevi una
variazione del valore di assorbanza (∆A) inferiore al valore ottenuto con il calibratore di cutoff
prescelto è considerato negativo.
Risultati semi-quantitativi
Una stima approssimativa della concentrazione dell'oppiaceo nei campioni può essere ottenuta
eseguendo una curva standard con tutti i calibratori e quantificando i campioni esterni alla
curva standard.
Limitazioni
1. Un risultato positivo di questo saggio è unicamente indicativo della presenza del
metabolita del THC e non è necessariamente correlato con l'entità degli effetti fisiologici
e psicologici.
2. Un risultato positivo del saggio deve essere confermato da un altro metodo non
immunologico quale una gas-cromatografia (GC) o una gascromatografia/spettrometria
di massa (GC/MS).
3. Il test è indicato per l'uso unicamente con urina umana.
4. Vi è inoltre la possibilità che altre sostanze e/o fattori (ad es. tecnici o procedurali) non
elencati nella precedente tabella delle specificità possano interferire con il test causando
dei falsi risultati.
Caratteristiche prestazionali tipiche
Bibliografia
I risultati prestazionali tipici ottenuti sull'analizzatore Hitachi 717 sono riportati in basso.7 I risultati
conseguiti nel proprio laboratorio potrebbero differire.
1. Urine Testing for Drugs of Abuse. National Institute on Drug Abuse (NIDA) Research
Monograph 73 (1986).
2. Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Program. National Institute
on Drug Abuse. Federal Register Vol. 53, No. 69, p 11979 (1988).
3. Wall ME, Brine DR and M Perez-Reyes: Metabolism of Cannabinoids in Man. Brande MC
and S Szara, Eds.: The Pharmacology of Marijuana. Raven Press, 93 (1976).
4. Perez-Reyes M, Di Guiseppi S, Mason AP and KH Davis: Passive Inhalation of Marijuana
Smoke and Urinary Excretion of Cannabinoids. Clin Pharmacol Ther 34, 36 (1983).
5. Ferslew KE, Manno JE and BR Manno: Determination of Urinary Cannabinoid Metabolites
Following Incidental Exposure to Marijuana Smoke. Res Commun Substance Abuse,
289 (1983).
6. Rubenstein KE, Schneider RS and EF Ullman: Homogeneous Enzyme Immunoassay:
A New Immunochemical Technique. Biochem Biophys Res Commun 47, 846 (1972).
7. Data on file at Microgenics, a part of Thermo Fisher Scientific.
Precisione
Sono state valutate la precisione intrasequenza e intersequenza utilizzando il negativo e tutti i
livelli del calibratore. I risultati sono riportati nelle tabelle seguenti:
Calibratore
o controllo
Intrasequenza (n=20)
Media ± SD
(mA/min)
Negativo
20 ng/mL
Intersequenza (n=12)
% CV
Media ± SD
(mA/min)
% CV
287 ± 2,9
1,0
287 ± 2,9
1,0
317 ± 2,9
0,9
319 ± 2,2
0,7
50 ng/mL
387 ± 3,5
0,9
388 ± 3,9
1,0
100 ng/mL
447 ± 4,0
0,9
449 ± 5,4
1,2
200 ng/mL
472 ± 2,4
0,5
473 ± 3,8
0,8
Sensibilità
La sensibilità, definita come la minima concentrazione dell'analita THC differenziabile dal
calibratore dell'urina negativa con il 95% di confidenza, è di 10 ng/mL.
Accuratezza
Cinquecentonovantadue (592) campioni clinici di urina sono stati raccolti e saggiati
con questo saggio, un saggio immunoenzimatico (EIA) commerciale, e una GC/MS per
il cannabinoide. Per la GC/MS è stato utilizzato un cutoff da 15 ng/mL. Il saggio per la
rilevazione dei cannabinoidi DRI ha rilevato una correlazione del 100% con la tecnica GC/MS
quando è stato utilizzato un calibratore di cutoff da 50 ng/mL. Sei (6) campioni positivi alla GC/MS
sono stati quantificati come "negativi al limite" dal saggio quando è stato utilizzato un calibratore
di cutoff da 100 ng/mL. Il saggio ha dimostrato anche una buona correlazione con un saggio
immunoenzimatico (EIA) disponibile in commercio.
Specificità
Alcuni metaboliti del THC e sostanze potenzialmente interferenti sono state saggiate per la
cross-reattività nel saggio. La tabella seguente riepiloga i risultati ottenuti alle concentrazioni
saggiate per ciascun potenziale cross-reattivo utilizzando un calibratore di cutoff di 50 ng/mL.
Tabella 1. Composti strutturalmente correlati che producono un risultato positivo alle
concentrazioni elencate.
Composto
Concentrazione saggiata (ng/mL)
11-idrossi- 9-THC
100
/-11-Nor- 8-THC-COOH
100
/-11-Nor- 9-THC-COOH
8- -idrossi- 9-THC
8- -11-idrossi- 9-THC
-THC
9
Cannabinolo
50
100
50
50
100
Tabella 2. Composti strutturalmente non-correlati che producono un risultato negativo alle
concentrazioni elencate.
Composto
Concentrazione saggiata (ng/mL)
Acido acetilsalicilico
1.000.000
Amobarbital
1.000.000
Anfetamina
1.000.000
Benzoilecgonina
1.000.000
Caffeina
Cannabidiolo
100.000
10.000
Cocaina
200.000
Codeina
1.000.000
d-11-Nor- 9-THC-COOH
100
Destrometorfano
1.000.000
Fenciclidina (PCP)
1.000.000
Fenobarbital
1.000.000
Meperidina
1.000.000
Metadone
1.000.000
Metanfetamina
1.000.000
Morfina
Oxazepam
Microgenics Corporation
46500 Kato Road
Fremont, CA 94538 USA
Servizio di assistenza tecnica
e alla clientela:
1-800-232-3342
Per gli aggiornamenti del foglio illustrativo, visitare:
www.thermoscientific.com/diagnostics
Negli altri paesi:
Rivolgersi al rappresentante Thermo Fisher Scientific di zona.
200.000
500.000
Paracetamolo
1.000.000
Propossifene
1.000.000
Secobarbitale
1.000.000
0142-8-IT
2015 10
2
Microgenics GmbH
Spitalhofstrasse 94
D-94032 Passau, Germany
Tel: +49 (0) 851 886 89 0
Fax: +49 (0) 851 886 89 10
