Colorazioni - AgrariaFree
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Esercitazione di microbiologia generale Colorazioni I coloranti I coloranti reagiscono con la cellula o con suoi componenti ma non con l’ambiente circostante permettendoci così di distinguerli I vantaggi principali delle colorazioni consistono nel fatto che esse oltre a fornire il contrasto tra i microrganismi e l’ambiente circostante permettono la differenziazione tra i vari tipi morfologici e favoriscono lo studio di alcune strutture interne come la parete, i vacuoli, e le spore. Uso di colorazioni per migliorare il contrasto dei preparati Utilizzando diverse classi di coloranti è possibile migliorare il contrasto delle immagini al microscopio. Si possono distinguere: A. Coloranti vitali: le cellule possono essere colorate senza fissazione e sono quindi solo minimamente alterate dal trattamento; oggi vengono utilizzati coloranti fluorescenti per colorare selettivamente specie diverse o strutture cellulari diverse B. Coloranti che richiedono fissazione: le cellule devono essere disidratate prima della colorazione I coloranti si dividono in: Composti basici: (bleu di metilene, safranina, cristalvioletto) Composti acidi: (eosina, rosso congo, fuscina) Composti neutri: (giemsa) Composti mordenzanti: (permettono la fissazione del colorante) Le colorazioni •Semplici (bleu di metilene) •Differenziali (gram, zihel-neelsen) •Negativa (inchiostro di china) Parete cellulare Peptidoglicano 90% del peso secco della parete Peptidoglicano 5-10% del peso secco della parete La colorazione di Gram 1. Aggiunta del cristal violetto 2. lavaggio La colorazione di Gram 3. Aggiunta della soluzione di iodio 4. lavaggio La colorazione di Gram 5. Dopo la decolorazione con alcool-acetone il passaggio finale è la colorazione di contrasto con safranina La colorazione di Gram Un Gram positivo Un Gram negativo Un Gram positivo La colorazione con bleu di metilene Colorazione che ci permette di distinguere cellule vive da cellule morte Ciò avviene grazie al fatto che le cellule vive hanno enzimi capaci di degradare il bleu di metilene La colorazione con blue di metilene Si prepara una soluzione allo 0,5% di bleu di metilene. Si scioglie una ansata di coltura in 500 µl di H2O e si aggiungono 500 µl della soluzione colorante. Dopo 10 min si osservano le cellule al microscopio, quelle vive appariranno normali mentre quelle morte appariranno colorate di blu.
