Esercitazione di microbiologia
generale
Colorazioni
I coloranti
I coloranti reagiscono con la cellula o con suoi
componenti ma non con l’ambiente circostante
permettendoci così di distinguerli
I vantaggi principali delle colorazioni consistono nel
fatto che esse oltre a fornire il contrasto tra i
microrganismi e l’ambiente circostante permettono la
differenziazione tra i vari tipi morfologici e
favoriscono lo studio di alcune strutture interne come
la parete, i vacuoli, e le spore.
Uso di colorazioni per migliorare il
contrasto dei preparati
Utilizzando diverse classi di coloranti è possibile
migliorare il contrasto delle immagini al microscopio. Si
possono distinguere:
A. Coloranti vitali: le cellule possono essere colorate senza
fissazione e sono quindi solo minimamente alterate dal
trattamento; oggi vengono utilizzati coloranti fluorescenti
per colorare selettivamente specie diverse o strutture
cellulari diverse
B. Coloranti che richiedono fissazione: le cellule devono
essere disidratate prima della colorazione
I coloranti si dividono in:
Composti basici: (bleu di metilene, safranina, cristalvioletto)
Composti acidi: (eosina, rosso congo, fuscina)
Composti neutri: (giemsa)
Composti mordenzanti: (permettono la fissazione del colorante)
Le colorazioni
•Semplici (bleu di metilene)
•Differenziali (gram, zihel-neelsen)
•Negativa (inchiostro di china)
Parete cellulare
Peptidoglicano 90% del
peso secco della parete
Peptidoglicano 5-10% del
peso secco della parete
La colorazione di Gram
1. Aggiunta del cristal violetto
2. lavaggio
La colorazione di Gram
3. Aggiunta della soluzione di
iodio
4. lavaggio
La colorazione di Gram
5. Dopo la decolorazione con
alcool-acetone il passaggio
finale è la colorazione di
contrasto con safranina
La colorazione di Gram
Un Gram positivo
Un Gram negativo
Un Gram positivo
La colorazione con bleu di metilene
Colorazione che ci permette di distinguere cellule
vive da cellule morte
Ciò avviene grazie al fatto che le cellule vive hanno
enzimi capaci di degradare il bleu di metilene
La colorazione con blue di metilene
Si prepara una soluzione allo 0,5% di bleu di metilene.
Si scioglie una ansata di coltura in 500 µl di H2O e si
aggiungono 500 µl della soluzione colorante.
Dopo 10 min si osservano le cellule al microscopio,
quelle vive appariranno normali mentre quelle morte
appariranno colorate di blu.
