Dosaggio DRI® per il metaqualone - Fisher Scientific

Dosaggio DRI® per il metaqualone
Per uso diagnostico in vitro
0514 (Kit da 100 mL )
0515 (Kit da 500 mL)
Preparazione e conservazione dei reagenti
Uso previsto
Il dosaggio DRI® per il metaqualone è previsto per la determinazione qualitativa e semiquantitativa
del metaqualone nell’urina umana.
Questo dosaggio fornisce unicamente un risultato analitico preliminare. Per ottenere un risultato
analitico di conferma, è necessario utilizzare un metodo chimico alternativo a specificità
più elevata. Il metodo di conferma più idoneo è la gascromatografia/spettrometria di massa
(GC/MS).1 Qualsiasi risultato di analisi riguardante sostanze stupefacenti, soprattutto nel caso
di un risultato preliminare positivo, va trattato con la considerazione clinica e la discrezione
professionale opportune.
Sommario e spiegazione del metodo
Il metaqualone è un ipnotico-sedativo. L’abuso di metaqualone può condurre ad assuefazione
o dipendenza. Una volta ingerito, il metaqualone viene metabolizzato ed escreto nell’urina sotto
forma di metaboliti.2,3 Il rilevamento del metaqualone o dei suoi metaboliti nell’urina indica l’uso
di metaqualone.
Per la determinazione del metaqualone esistono svariate tecniche di analisi, come la
cromatografia su strato sottile, la gascromatografia, la cromatografia liquida/spettrometria di
massa e i radioimmunodosaggi.4-8 Tuttavia, questi metodi di analisi sono laboriosi e inadatti ad
applicazioni di screening che prevedono un numero elevato di campioni.
Il dosaggio DRI per il metaqualone è un immunodosaggio enzimatico omogeneo con reagenti
liquidi pronti per l’uso.9 Il dosaggio utilizza un anticorpo specifico in grado di rilevare la presenza
del metaqualone nell’urina. L’analisi si basa sulla competizione di una sostanza marcata con
enzima glucosio-6-fosfato deidrogenasi (G6PDH) con la sostanza contenuta nel campione
di urina per un numero fisso di siti di legame anticorpale specifico. In assenza di sostanza
libera nel campione, l’anticorpo specifico si lega alla sostanza marcata con G6PDH e l’attività
enzimatica risulta inibita. Questo fenomeno crea una relazione diretta tra la concentrazione della
sostanza stupefacente nel campione di urina e l’attività enzimatica. L’attività dell’enzima G6PDH
viene determinata spettrofotometricamente a 340 nm misurando la sua capacità di convertire
nicotinamide adenina dinucleotide (NAD) in NADH.
Reagenti
Reagente anticorpo/substrato:
contiene anticorpi monoclonali anti-metaqualone, glucosio-6-fosfato (G6P) e nicotinamide
adenina dinucleotide (NAD) in tampone Tris con azoturo di sodio come conservante.
Reagente coniugato enzimatico:
contiene metaqualone marcato con glucosio-6-fosfato deidrogenasi (G6PDH) in tampone Tris
con azoturo di sodio come conservante.
Ulteriori materiali necessari (venduti separatamente)
1664 1388 1589 1591 1592 1595 1598 100200
Descrizione del kit
Calibratore negativo DRI, 10 mL
Calibratore negativo DRI, 25 mL
Calibratore 1 multidroga DRI, 25 mL
Calibratore 2 multidroga DRI, 10 mL
Calibratore 2 multidroga DRI, 25 mL
Calibratore 3 multidroga DRI, 25 mL
Calibratore 4 multidroga DRI, 25 mL
Set di controlli MGC per DAU primarie,
3 x 5 mL cada uno (Alto ed Basso)
Avvertenze e precauzioni
Il presente dosaggio è esclusivamente per uso diagnostico in vitro. I reagenti sono nocivi se
ingeriti.
I reagenti del dosaggio contengono < 0,09% azoturo di sodio. Evitarne il contatto con la pelle e
le mucose. In caso di contatto, sciacquare le aree interessate con abbondanti quantità di acqua.
Se i reagenti vengono ingeriti o vengono a contatto con gli occhi, rivolgersi immediatamente ad
un medico. Il sodio azide può reagire con il rame o il piombo delle tubature di scarico generando
azidi metalliche potenzialmente esplosive. Quando si gettano via tali reagenti, sciacquare sempre
con abbondanti quantità di acqua per impedire l’accumulo di azidi. Pulire le superfici metalliche
esposte con una soluzione di idrossido di sodio al 10%.
Non usare i reagenti scaduti.
I reagenti sono pronti per l’uso, e pertanto non richiedono alcuna preparazione. Tutti i componenti
del dosaggio, quando conservati a 2-8°C, sono stabili fino alla data di scadenza indicata sulle
rispettive etichette.
Raccolta e trattamento del campione
Raccogliere i campioni di urina in recipienti di vetro o plastica. Si consiglia di analizzare campioni
di urina freschi.
Ai sensi delle direttive The Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Programs:
Final Guidelines, i campioni non analizzati entro 7 giorni dal loro arrivo al laboratorio vanno
conservati in frigoriferi di sicurezza.10
I campioni con un pH da 3 a 11 sono idonei per essere analizzati con questo dosaggio.
È necessario fare il possibile per mantenere i campioni pipettati privi di residui solidi; si consiglia
di centrifugare prima dell’analisi i campioni molto torbidi. L’adulterazione dei campioni di urina
può dare luogo a risultati errati. Se si sospetta adulterazione, ottenere un altro campione e inviare
entrambi i campioni al laboratorio per l’analisi.
Manipolare tutti i campioni di urina come se fossero potenzialmente infettivi.
Procedura di analisi
Ai fini del presente dosaggio è possibile utilizzare gli analizzatori in grado di mantenere una
temperatura costante, pipettare i campioni, miscelare i reagenti, misurare i tassi enzimatici a
340 nm e regolare con precisione i tempi di reazione.
Prima di eseguire l’analisi, consultare le istruzioni applicative specifiche dell’analizzatore in
dotazione per ottenere i parametri chimici.
Controllo di qualità e calibrazione
Analisi qualitativa
Per l’analisi qualitativa dei campioni, usare il calibratore 2, che contiene 300 ng/mL di
metaqualone, come valore limite. Il calibratore 2 multidroga per urine DRI, contenente 300 ng/mL
di metaqualone, viene usato come riferimento per valore limite per la distinzione tra i campioni
positivi e i campioni negativi.
Analisi semiquantitativa
Per l’analisi semiquantitativa, usare tutti i calibratori.
Una buona prassi di laboratorio prevede l’analisi di campioni di controllo allo scopo di garantire
le corrette prestazioni del dosaggio. Per convalidare la calibrazione, usare controlli vicini al
calibratore sovrapponibile al valore limite. I risultati dei controlli devono rientrare nel range
prestabilito. Se i risultati non rientrano nel range prestabilito, i risultati dell’analisi non sono validi.
Tutti i requisiti di controllo della qualità vanno soddisfatti in conformità alle normative vigenti o
ai requisiti per l’accreditamento.
Risultati e valori attesi
Risultati qualitativi
Un campione che mostra una variazione del valore di assorbanza (∆A) uguale o maggiore rispetto
al valore ottenuto mediante il calibratore per valore limite è considerato positivo. Un campione che
mostra una variazione del valore di assorbanza (∆A) minore rispetto a quello ottenuto mediante
il calibratore per valore limite è considerato negativo.
Risultati dell’analisi semiquantitativa
Per ottenere una stima approssimativa della concentrazione di sostanza nei campioni, tracciare
una curva standard con tutti i calibratori e quantificare i campioni che ricadono al di fuori della
curva standard.
Limitazioni
1. Un risultato di analisi positivo indica solo la presenza di metaqualone o dei suoi metaboliti
e non si correla necessariamente all’intensità degli effetti fisiologici e psicologici.
2. Un risultato di analisi positivo ottenuto mediante il presente dosaggio va confermato
mediante un altro metodo di tipo non immunologico, come la GC, la TLC o la GC/MS.
3. Il dosaggio è previsto per essere eseguito unicamente su urina umana.
4. È possibile che altre sostanze e/o fattori (come ad esempio elementi tecnici o procedurali)
diversi da quelli elencati nella tabella di specificità possano interferire con il dosaggio e
dare luogo a risultati falsi.
Caratteristiche di rendimento del test tipiche
Qui di seguito sono riportate le caratteristiche di rendimento del test ottenibili mediante
l’analizzatore Hitachi 717.11 I valori ottenuti nei diversi laboratori possono essere differenti da
quelli riportati in questa sede.
Bibliografia
Precisione
Il controllo negativo, il controllo da 300 ng/mL e i calibratori da 1000 ng/mL sono stati analizzati
in dieci replicati. Sono stati ottenuti i seguenti risultati.
Intra-analisi (n=10)
Calibratore
Mean ± SD
(mA/min)
1. Urine Testing for Drug of Abuse. National Institute on Drug Abuse (NIDA) Research
Monograph 73 (1986).
2. Kazyak L, Kelley JA, Cella JA, Droege RE, Hilpert LR and Permisohn RC. Methaqualone
metabolites in human urine after therapeutic doses. Clin. Chem. 23, 2001 (1977).
3. Smyth RD, Lee JK, Polk A et al. Bioavailability and biological disposition of methaqualone.
J. Int. Med. Res. 2, 85 (1974).
4. Sleeman HK, Cella JA, Harvey JL and Beach DJ. Thin-layer chromatographic detection
and identification of methaqualone metabolites in urine. Clin. Chem. 21, 76 (1976).
5. Goudie JH and Burnett D. A rapid method for the detection of methaqualone metabolites.
Clin. Chim. Acta. 35, 133 (1971).
6. Burnett D, Goudie JH and Sherrif JM. Detection of meth aqualone and its metabolites in
urine. J. Clin. Pathol. 22, 602 (1969).
7. Bonnichsen R, Fri CG, Negoita C and Ryhage R. Identification of methaqualone metabolite
from urine extract by gas chromatography-mass spectrometry. Clin. Chim. Acta. 40, 309 (1974).
8. Berman AR, McGrath JP, Permisohn RC and Cella JA. Radioimmunoassay of methaqualone
and its monohydroxy metabolites in urine. Clin. Chem. 21, 1878 (1975).
9. Rubenstein KE, Schneider RS, and EF Ullman: Homogeneous enzyme immunoassay: a
new immunochemical technique. Biochem Biophys Res Commun 47, 846 (1972).
10.Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Programs.National Institute
On Drug Abuse. Federal Register Vol. 53, No 69, pp 11970 (1988).
11. Dati in archivio presso Microgenics, che fa parte della Thermo Fisher Scientific.
Tra analisi (n=10)
%CV
Mean ± SD
(mA/min)
%CV
Negativo
168 ± 1,0
0,6
170 ± 1,5
0,9
300 ng/mL
244 ± 1,6
0,7
246 ± 2,0
0,8
10.000 ng/mL
301 ± 2,6
0,9
304 ± 2,1
0,7
Sensibilità
La sensibilità, definita come la concentrazione più bassa differenziabile dal calibratore negativo
per l’urina con una confidenza del 95%, è di 15 ng/mL.
Accuratezza
Centotrenta campioni di urine sono stati analizzati con un dosaggio commerciale EIA e con il
dosaggio DRI per il metaqualone. Sessantasette sono risultati negativi e sessantatre positivi con
il dosaggio DRI per il metaqualone, mentre sessantotto sono risultati negativi e sessantadue
positivi con il dosaggio commerciale. È stato riscontrato che un totale di tre campioni discordanti
conteneva concentrazioni al limite di metaqualone. Tramite GC/MS è stato confermato che i
campioni positivi contenevano metaqualone.
Specificità
Sono state analizzate diverse sostanze potenzialmente interferenti per rilevare l’eventuale
reattività crociata con il dosaggio. I composti elencati nella tabella che segue hanno dato luogo
a un risultato negativo alla concentrazione analizzata.
Composto
Concentrazione
Analizzate (ng/mL)
Metaqualone
300
Mecloqualone
500
3’-idrossi metaqualone
500
4’-idrossi metaqualone
500
2’-idrossi metaqualone
3.000
Acido acetilsalicilico
1.000.000
Acido valproico
150.000
Amfetamina
1.000.000
Amitriptilina
50.000
Benzoilecgonina
1.000.000
Caffeina
1.000.000
Carbamazepina
20.000
Codeina
1.000.000
Dextrometorfano
1.000.000
Fenciclidina
1.000.000
Fenobarbitale
1.000.000
Fenitoina
40.000
Meperidina
1.000.000
Metadone
500.000
Morfina
1.000.000
Nortriptilina
50.000
Oxazepam
1.000.000
Paracetamolo
1.000.000
Primidone
24.000
Prometazina
1.000.000
Propossifene
1.000.000
Secobarbitale
1.000.000
Teofillina
40.000
Microgenics Corporation
46360 Fremont Blvd.
Fremont, CA 94538-6406 USA
Assistenza tecnica e assistenza
alla clientela negli USA:
1-800-232-3342
Per gli aggiornamenti del foglietto illustrativo, visitare:
www.thermoscientific.com
Altri Paesi:
Consultare il rappresentante Thermo Fisher Scientific di zona.
0762-3
2010 12
2
Microgenics GmbH
Spitalhofstrasse 94
D-94032 Passau Germany
Tel: +49 (0) 851-88 68 90
Fax: +49 (0) 851-88 68 910