Programma Laboratorio Farmacologia Molecolare

Programma di Farmacologia molecolare AA 2012/2013
Lezioni frontali
Farmaci e espresssione genica. Metodi di studio dell’espressione genica per l’ individuazione di nuovi
target farmacologici e per lo studio del meccanismo d’azione di farmaci: metodi di valutazione dell’mRNA in
maniera semiquantitativa e quantitativa. Importanza dei controlli (positivi e negativi) ai fini della veridicità
del dato,, fattori per la scelta dei primers (fattori termodinamici e specificità). Concetti base sulla
fluorescenza e sull’importanza in biologia molecolare. Sequenziamento di prodotti di PCR (tecnica di
Sanger). Tipologie di sonda per real-time PCR. Detezione In situ dell’ mRNA: cenni.
Farmacologia del sistema endocannabinoide: recettori e enzimi e principali tipologie di farmaci che
interferiscono con il sistema.
Farmaci e morte cellulare: apoptosi e necrosi quali principali tipologie di morte cellulare e relativi metodi di
studio. Valutazione della vitalità cellulare e della proliferazione cellulare per studi di citotossicità. Effetti
ciclo-specifici dei farmaci a livello cellulare.
Farmaci e trasportatori: tipologie e ruolo di sistemi di trasporto nella farmacodinamica e nella
farmacocinetica
Farmaci e fosforilazione intracellulare: chinasi attivate da mitogeni quali target farmacologici
Autenticazione e controllo di qualità di piante medicinali: techiche di fingerprinting genetico di materiale
vegetale
Laboratorio:
1)Utilizzo di Blast per il disegno e la valutazione di coppie di primers da utilizzarsi in PCR; multiallineamento
genico per la valutazione di sequenze filogeneticamente conservate sfruttabili per il disegno di primers in
condizioni di non conoscenza del genoma in studio.
2)Realizzazione di un esperimento simulato in coltura cellulare: curva concentrazione risposta ad un
farmaco citotossico e valutazione dell’indice di IC50 (concentrazione inibitoria al 50%) in seguito a
graficazione con software specifico.
3)Valutazione di attività farmacologica proapoptotica tramite test di attività caspasica con saggio ELISA e
verifica della frammentazione del DNA (DNA laddering)
4)Estrazione del DNA da piante, corsa elettroforetica dell’acido nucleico e simulazione di tecnica RAP-PCR
(random amplified-PCR).